Rh2逆转耐药细胞对顺铂抗性作用的机制

目的 探讨人参单体Rh2逆转肺腺癌耐药A549DDP细胞对顺铂抗性作用的机制.方法 以Rh2单独作用为Rh2组,低效浓度的顺铂单独作用为DDP组,二者联合作用为Rh2+DDP组,不加药物干预为对照组,紫外光分光光度计检测各组细胞的线粒体PTP开放情况,流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度及线粒体跨膜电位的变化及细胞凋亡状况,Western印迹检测细胞色素C及Caspase-3表达;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Rh2组和DDP组细胞内钙离子浓度与对照组的接近,Rh2+DDP组细胞内钙离子浓度升高,与对照组比较,差异有统计学意义(t=22.47,P<0.01).前3组细胞的线粒体吸光度(A540nm)值接近,而Rh2+DDP组A540nm值明显低于对照组(t=8.21,P<0.01).前3组线粒体跨膜电位接近,Rh2+DDP组细胞内线粒体跨膜电位明显低于对照组(X~2=46.01,P<0.01).前3组细胞的胞质中细胞色素C和Caspase-3表达极低,Rh2+DDP组细胞色素C和Caspase-3高表达.荧光显微镜下,前3组细胞核荧光分布均匀;Rh2+DDP组的细胞核数目减少,荧光成团块分布,很多细胞核缩小或变形.前3组凋亡细胞百分率分别为6.32%、7.24%、7.41%,3组间差异无统计学意义,Rh2+DDP组凋亡细胞百分率为21.96%,与对照组差异有统计学意义(t=10.92,P<0.05).结论 无毒浓度的Rh2逆转A549DDP细胞对顺铂的耐药性作用可通过线粒体凋亡通路实现.     

99m Tc-甲氧基异丁基异腈在人肺癌组织中的摄取与多药耐药基因表达的相关性研究

目的探讨甲氧基异丁基异腈(MIBI)在人肺癌组织中的摄取与多药耐药基因(mdr-1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达之间的相关性,用以指导临床化疗. 方法研究对象为27例肺癌患者.18例静脉注入99mTc-MIBI 1 110 MBq,60和120 min后分别作胸部双探头单光子发射型计算机断层显像(SPECT),根据病灶和对侧正常肺组织的计数率比值,计算出99mTc-MIBI在肺癌组织中的早期显像摄取比值、延迟显像摄取比值和储留指数.用逆转录聚合酶链反应技术检测27例患者手术切除标本中mdr-1和MRP基因的表达,表达量以mdr-1或MRP条带与内参照β2-微球蛋白条带的吸光度值之比表示. 结果肺癌患者胸部99mTc-MIBI早期显像的阳性率为83.3%(15/18);阳性者摄取比值为1.99±0.64,其中13例作了延迟显像,经过时间衰变校正后,其99mTc-MIBI摄取比值和储留指数分别为2.06±0.69和-45%～33%.手术切除的肺癌组织中mdr-1和MRP基因表达阳性率分别为22.2%(6/27) 和63.0%(17/27),表达量分别为0.39±0.10和0.23±0.17;癌旁正常肺组织中mdr-1和MRP基因表达的阳性率分别为35.0%(7/20)和45.0%(9/20),表达量分别为0.44±0.14和0.17±0.18.肺癌组织与癌旁正常肺组织比较,mdr-1和MRP基因表达的差异无显著意义.肺癌组织MRP基因表达的阳性率高于mdr-1(P< 0.05).肺癌组织mdr-1和MRP基因共表达量以及MRP基因表达量,与99mTc-MIBI早期显像摄取比值和储留指数之间无明显相关性(P>0.05). 结论肺癌的原发性耐药与mdr-1和MRP基因的表达水平关系不大,可能存在其他耐药机制;用99mTc-MIBI SPECT检测未经化疗的原发性肺癌患者mdr1和MRP基因的表达,临床价值不大.     

Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及其机制

目的:观察阻断Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭、血管生成和上皮-间质转化(EMT)及其对顺铂敏感性的影响,阐明Notch1信号通路在肺腺癌侵袭和转移及顺铂耐药中的作用及相关机制.方法:以γ-分泌酶抑制剂(DAPT)作为Notch1信号通路阻断剂作用A549细胞,分为0μmol·L-1 DAPT组(对照组)、10μm...     

Survivin反义寡核苷酸逆转顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡耐受作用

目的 探讨survivin反义寡核苷酸逆转人肺腺癌细胞对顺铂诱导的细胞凋亡耐受的效应.方法 常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸(ASODN)体外转染细胞.采用二苯胺反应法(DPA)测定DNA片段化、激酶法检测Caspase-3酶活性及流式细胞术检测细胞凋亡率(AI),评价细胞凋亡程度.采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC50)及耐药倍数(RI).结果 单用ASODN转梁组DNA片段化比率、细胞凋亡率和Caspase3相对活性分别增高至(43.55±6.07)%、(34.03±2.25)%和(1.1298±0.2502),和各对照组相比较,均有显著性变化(P＜0.05);而ASODN和CDDP联用组上述凋亡指标增高更为明显,分别达(76.73±2.04)%、(65.85±5.47)%和(1.6805±0.2758)(P＜0.05).转染组A549/CDDP细胞生长抑制显著,单用转染组和联合CDDP组生长抑制率分别增高达59.3%和83.7%(P＜0.05).3.ASODN转染后CDDP对细胞IC50由(225.03±10.59)μmol/L减低至(158.84±4.256)μmol/L,其RI由11.9减为8.39.结论 Survivin反义寡核苷酸体外转染可降低耐顺铂人肺腺癌细胞的凋亡阈值,从而较大程度上逆转其对顺铂诱导的细胞凋亡耐受.     

口服99Tmc-DTPA检测胆石症患者肠黏膜通透性

目的比较不同类型胆石症患者与正常人肠道黏膜通透性的差异。方法根据术中结石剖面结构,将56例胆石症患者分为胆固醇结石组（n=15）和胆色素结石组（n=41）,17例健康志愿者作为对照组,采用口服辨T7-DTPA的方法比较3组24h尿液中^99Tc^m-DTPA排泄率,即肠道黏膜通透性。结果对照组24h尿液中辨T7-DTPA排泄率为4．5％±3．4％,胆固醇结石组5．0％±3．6％,胆色素结石组10．5％4-6．9％,胆色素结石组尿液^99Tc^m-DTPA排泄率明显高于对照组（F值7．62,P〈0．05）,但胆固醇结石组与对照组比较,差异无统计学意义（F值2．16,P〉0．05）。结论胆色素结石患者肠黏膜通透性显著高于对照组,肠黏膜通透性增加可能是胆色素结石的一个发病原因。     

靶向Ku70基因siRNA对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用

目的：研究Ku70与人肺腺癌耐药的相关性,观察调控Ku70表达能否逆转人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）的耐药性。方法：采用RT-PCR、Western Blotting方法比较Ku70在人肺腺癌亲代细胞（A549）与耐药细胞系（A549/DDP）的表达水平。转染靶向Ku70基因siRNA（si-Ku70）的A549/DDP细胞作为实验组,转染非特异性siRNA（si-Scramble）的A549/DDP细胞作为阴性对照组,同时设空白组(A549/DDP细胞)。加药组在转染后48 h给予顺铂。应用MTT法检测各组细胞在顺铂作用下的生存率,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）,采用流式细胞仪定量检测细胞凋亡率;采用分光光度法检测Caspase-3活化程度。结果：Ku70 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞表达水平显著高于其亲代A549细胞（P<0.01）;靶向Ku70的siRNA（si-Ku70)明显下调A549/DDP细胞的Ku70 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）;在不同浓度顺铂作用24 h后,实验组细胞的生存率明显低于阴性对照组和空白组（P<0.01）。6 mg/L顺铂作用24 h后,实验组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于阴性对照组和空白组（P<0.05）。结论：Ku70在人耐药肺腺癌细胞呈现高表达,提示Ku70参与肺腺癌耐药的形成;靶向Ku70siRNA导入人肺腺癌耐药细胞可特异性下调Ku70的表达,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,逆转其耐药性,Ku70可能成为逆转肺癌耐药的一个新的分子靶点。     

甲氨蝶呤对映体诱导肺癌细胞耐药后引起血管内皮细胞分化差异的研究

目的 研究甲氨蝶呤(MTX)对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后,MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性.方法 用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞,流式细胞双色分析细胞CD44/CD31以及P-170表达;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,进行CD34组化染色,计数新生微血管密度(MVD).以A549亲本细胞(未获得耐药)作为对照组.结果 分别建立耐药浓度为15 μmol/L的L-MTX和D-MTX的A549耐药细胞株;它们与各自对映体的耐药指数分别为12.4±1.2和20.1±2.3;A549亲本细胞、L-MTX耐药细胞和D-MTX耐药细胞中:CD31+阳性率分别为55.5%±9.7%、32.9%±8.0%和91.9%±3.2%,差异有统计学意义(F=511.92,P=0.000);P-170阳性率分别为85.5%±4.6%、71.5%±8.2%和87.0%±8.9%,L-MTX耐药细胞P-170的阳性率低于D-MTX耐药细胞(t=6.13,P=0.002);3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计新生MVD,A549亲本细胞为3.6±1.2,L-MTX耐药细胞为7.2±1.7,D-MTX耐药细胞为55.9±11.9,D-MTX耐药细胞显著高于L-MTX耐药细胞(t=13.37,P=0.000).结论 MTX对映体诱导肺癌A549耐药细胞向血管内皮细胞分化能力不同,D-MTX耐药细胞经血管转移高于L-MTX耐药细胞,这提示MTX制剂中D型组分不能简单当成污染物而忽视,应尽量选用单一对映体的L-MTX药物制剂,减少D-MTX带来的副作用.     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

吉马酮调节FAK/YAP信号通路对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK)。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况。结果 与CK组比较,GMC-L组、GMCM组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与GMC-H组、GMC-H+...     

aaptamine 与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

探讨aaptamine与顺铂（DDP）联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用,并阐明其可能的分子机制。