清肠化湿方对TNBS诱导大鼠UC模型紧密连接蛋白的影响

目的:观察三硝基苯磺酸(TNBS)法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型结肠黏膜occludin、claudin-1蛋白的变化特点及清肠化湿方对occludin、claudin-1蛋白表达的影响。方法:采用TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,并随机分为正常对照组、模型对照组、清肠化湿方组、SASP组,治疗10天后处死大鼠取新鲜结肠标本,观察黏膜大体形态及组织学改变,并采用Western blot法检测occludin、claudin-1蛋白表达水平。结果:模型对照组occludin、claudin-1蛋白表达均明显低于正常对照组,清肠化湿方组occludin、claudin-1的表达高于模型对照组,同时,清肠化湿方组大鼠结肠形态及组织学损伤评分均有降低。结论:清肠化湿方对UC模型大鼠具有治疗作用,增强occludin、claudin-1的表达,恢复正常的肠粘膜屏障功能可能是其作用机制之一。     

清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠黏膜及肠系膜淋巴结树状突细胞的影响

目的 观察清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎树状突细胞(dendritic cells,DCs)的影响,以探讨其治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的可能机制。方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)/无水乙醇诱导大鼠结肠炎模型,40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清肠化湿方组和美沙拉嗪组,每组10只。造模后第2天,用药组分别给予相应药物连续灌胃10天。免疫组化法观察大鼠结肠黏膜DCs数目;流式细胞仪检测肠系膜淋巴结DCs比例及表面分子MHC-Ⅱ 和CD86表达。结果 与模型组比较,清肠化湿方组和美沙拉嗪组大鼠结肠黏膜DCs数目显著减少,肠系膜淋巴结MHC-Ⅱ 表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01);两用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各组DCs比例和CD86表达比较,差异均无统计学意义(P>005)。结论 减少结肠黏膜DCs浸润,抑制肠系膜淋巴结DCs的活化,是清肠化湿方治疗UC的机制之一。     

清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠TLR-4、NF-κBp65蛋白表达的影响

目的观察三硝基苯磺酸(TNBS)法溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜TLR-4、NF-κBp65的变化特点及清肠化湿方对TLR-4、NF-κBp65蛋白表达的影响。方法采用TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎模型。将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、清肠化湿方组、巴柳氮组,治疗10d后处死大鼠取新鲜结肠标本,观察黏膜大体形态及组织学改变,并采用Westernblot法检测TLR-4、NF-κBp65蛋白表达水平。结果模型对照组TLR-4、NF-κBp65蛋白表达均高于正常对照组,清肠化湿方组TLR-4、NF-κBp65的表达低于模型对照组,同时清肠化湿方组大鼠结肠形态及组织学损伤评分均有降低。结论清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠具有治疗作用,抑制TLR-4、NF-κBp65的表达可能是其作用机制之一。     

清肠化湿方干预治疗对溃疡性结肠炎急性活动期小鼠结肠组织黏膜修复及COX-2表达影响的实验研究

目的:探寻清肠化湿方对小鼠溃疡性结肠炎急性活动期模型结肠组织黏膜修复及COX-2表达的影响,进而分析其可能的作用机制。方法:采用TMBS法制备小鼠溃疡性结肠炎急性活动期模型。实验设对照组、模型组、清肠化湿方低剂量组,清肠化湿方中剂量组,清肠化湿方高剂量组,造模前预防性给药3天,造模后给药3天,分别观察给药结束后小鼠结肠组织黏膜修复及COX-2表达情况。结果:清肠化湿方低、中、高剂量组与模型组比较,结肠组织炎症程度、黏膜糜烂、溃疡等都有所减轻,且各组病理学评分显著低于模型组,有显著性差异;模型组小鼠结肠组织COX-2表达显著增强,清肠化湿方各剂量组可明显降低COX-2表达,清肠化湿方低、中剂量组与模型组比较有显著性差异。结论:清肠化湿方能修复溃疡性结肠炎结肠黏膜,抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠组织COX-2的表达,可能是其疗效的机制之一。     

清肠化湿法对溃疡性结肠炎大鼠肠组织NF-κB、COX-2表达的影响

目的：探寻清肠化湿法对大鼠溃疡性结肠炎NF-κB、COX-2表达的影响,进而分析其可能的作用机制。方法：采用葡聚糖硫酸钠制备大鼠溃疡性结肠炎模型。实验设正常对照组、模型对照组、阳性药物组（柳氮磺吡啶组）、清肠化湿法组,每组8只。分别观察治疗后大鼠结肠组织NF-κB、COX-2的表达。结果：在正常结肠组织中NF-κB、COX-2呈弱表达,模型组结肠组织NF-κB、COX-2表达明显高于正常对照组,清肠化湿法组、SASP组结肠组织NF-κB、COX-2的表达明显低于模型组,清肠化湿法组、SASP组结肠组织NF-κB、COX-2的表达无明显差异。结论：清肠化湿方能抑制溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB、COX-2的表达,可能是其疗效的机制之一。     

清肠化湿方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织PPAR-γ,NF-κB及MUC2,TFF3的影响

目的:观察清肠化湿方对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗效果,以过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和核因子(NF)-κB为中心探讨其作用机制。方法:将雄性Wistar大鼠80只,随机分为8组,分别为正常组灌胃(ig)生理盐水2 m L·d-1],模型组(ig生理盐水2 m L·d-1),清肠化湿方低、中、高剂量组(ig清肠化湿方8,16,32 g·kg-1),柳氮磺胺吡啶(SASP)组(ig SASP 0.67 g·kg-1),SASP+双酚A-二甘氨酸醚(BADGE)组(ig SASP 0.67 g·kg-1+腹腔注射BADGE 20 mg·kg-1)及清肠化湿方中剂量+BADGE组(ig清肠化湿方16 g·kg-1+腹腔注射BADGE 20 mg·kg-1),每组10只。除正常组以生理盐水灌肠外,其余组采用TNBS/乙醇灌肠造UC大鼠模型。以柳氮磺胺吡啶(SASP)为阳性药物,同时联合使用PPAR-γ抑制剂双酚A-二甘氨酸醚(BADGE),观察大鼠疾病活动指数及结肠病理评分,蛋白质免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测大鼠结肠组织中PPAR-γ,NF-κB的蛋白和基因表达酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肠组织分泌蛋白黏蛋白2(MUC2)和三叶因子3(TFF3)的表达情况。结果:模型组大鼠结肠出现明显炎症和溃疡,提示造模成功。模型组PPAR-γ蛋白和基因表达较正常组显著降低(P0.01);与模型组比较,清肠化湿方组和SASP组PPAR-γ表达均有所增加(P0.05);联用PPAR-γ抑制剂BADGE后两组PPAR-γ表达又显著降低(P0.05)。同时,模型组NF-κB的蛋白和基因表达显著升高(P0.01),清肠化湿方各剂量组均能降低NF-κB的表达(P0.05),而清肠化湿方中剂量+BADGE组较清肠化湿方中剂量组NF-κB的表达又显著增高(P0.05)。此外,清肠化湿方组和SASP组能有效升高大鼠肠组织中MUC2和TFF3的表达,而当清肠化湿方或SASP联合使用BADGE时这一作用被减弱。结论:清肠化湿方能有效改善溃疡性结肠炎大鼠的病变程度,其作用机制与抑制NF-κB的激活,减轻炎症反应,并通过促进肠道黏膜MUC2与TFF3的分泌修复肠粘膜屏障有关,而这些作用可能主要是通过激活PPAR-γ信号通路完成的。     

清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠IL-6反式信号转导的影响＊

目的：观察清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠白介素6（IL-6）反式信号转导trans-signaling的影响,初步探讨该方治疗溃疡性结肠炎（UC）作用机制是否与调控IL-6 trans-signaling有关。方法： TNBS法制备小鼠结肠炎模型,药物干预后,ELISA法检测可溶性白细胞介素6受体（sIL-6R）含量,实时荧光定量PCR法检测IL-6、糖蛋白130（gp130）mRNA相对表达水平,Western Blot法观察结肠黏膜IL-6、gp130蛋白的表达情况。结果：模型组小鼠sIL-6含量、IL-6及gp130 mRNA和蛋白表达水平较正常小鼠明显增高。清肠化湿方可以降低实验性结肠炎小鼠结肠sIL-6水平（P<0.01）,降低IL-6及gp130mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）。结论：清肠化湿方对小鼠实验性结肠炎发挥良好抗炎效应,可能与调控IL-6 trans-signaling有关。     

清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠IL-6反式信号转导的影响

目的：观察清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠白介素6（IL-6）反式信号转导trans-signaling的影响,初步探讨该方治疗溃疡性结肠炎（UC）作用机制是否与调控IL-6 trans-signaling有关。方法： TNBS法制备小鼠结肠炎模型,药物干预后,ELISA法检测可溶性白细胞介素6受体（sIL-6R）含量,实时荧光定量PCR法检测IL-6、糖蛋白130（gp130）mRNA 相对表达水平,Western Blot法观察结肠黏膜IL-6、gp130蛋白的表达情况。结果：模型组小鼠sIL-6含量、IL-6及gp130 mRNA和蛋白表达水平较正常小鼠明显增高。清肠化湿方可以降低实验性结肠炎小鼠结肠sIL-6水平（P<0.01）,降低IL-6及gp130mRNA 和蛋白表达水平（P< 0.01）。 结论：清肠化湿方对小鼠实验性结肠炎发挥良好抗炎效应,可能与调控IL-6 trans-signaling有关。     

健脾补肾、清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠炎症及肠道菌群的影响

目的：基于微生物组学方法对溃疡性结肠炎模型大鼠粪便菌群进行研究，探讨健脾补肾、清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠肠道菌群的影响。方法：66只健康SPF级SD大鼠依据随机数字表随机分为空白对照组，模型组，健脾补肾、清肠化湿方组，补肾组，健脾组和清肠组等6组。各给药组依照成人用药浓度灌胃治疗，隔日称量大鼠体质量，10 d后处死大鼠并制作病理切片，计算各组病理评分；酶联免疫吸附法检测血清IL-1β、TNF-α和IL-10水平；基于16S rRNA扩增与高通量测序技术检测大鼠粪便菌群构成及丰度。结果：健脾补肾、清肠化湿方及其拆方明显改善了溃疡性结肠炎组织的病理评分，缓解了结肠黏膜的组织病理学损伤，减少了黏膜杯状细胞的破坏，显著降低了血清IL-1β和TNF-α水平，提高了血清IL-10的水平；通过16S rRNA序列分析验证，发现健脾补肾、清肠化湿方及其拆方有效改善了SD大鼠肠道菌群失调的情况。结论：健脾补肾、清肠化湿方可改善溃疡性结肠炎模型大鼠的肠道炎症反应和组织病理学损伤，并对溃疡性结肠炎模型大鼠的肠道菌群有显著的调节作用。     

清肠栓对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-1β、 IL-6 mRNA表达的影响

目的：探讨中药清肠栓治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机理。方法：用TNBS50％乙醇溶液肛门注入制作大鼠UC模型，分组分别给予清肠栓、醋酸泼尼松等治疗14d后处死，迅速剖取远端结肠，置液氮中备用。用RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳及凝胶图象分析系统检测各组大鼠结肠粘膜IL-1β、IL-6mRNA的表达情况。结果：清肠栓、醋酸泼泥松均可抑制模型大鼠结肠粘膜IL-1β、IL-6mRNA表达。结论：IL-1β、IL-6是导致UC结肠粘膜损伤的重要炎症介质，清肠栓治疗UC的作用机理与抑制IL-1β、IL-6mRNA表达有关。     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1基因和蛋白表达的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法40只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸组及柳氨磺吡啶(SASP)组,除空白组外,其余各组大鼠均以TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型,四神丸组给予四神丸浸膏剂5 g/kg灌胃,SASP组SASP 0.3 g/kg灌胃,灌胃体积均为10 mL/kg,空白组、模型组灌服等体积生理盐水,持续3周。肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分,采用RT-PCR和免疫组化法检测ICAM-1基因和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织黏膜层肉眼观察可见炎症和溃疡形成。模型组大鼠结肠组织ICAM-1基因和蛋白的表达量上调(P＜0.01);与模型组比较,四神丸组ICAM-1基因和蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。结论四神丸可能通过下调ICAM-1 mRNA和ICAM-1蛋白的表达量,抑制炎症细胞浸润,阻止并减轻结肠组织损伤,起到治疗UC的作用。     

泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κBp65及ICAM-1表达的影响

目的观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠NF-κBp65及ICAM-1的影响并探讨其作用机制。方法2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇混合溶液灌肠制备溃疡性结肠炎大鼠模型,实验设空白组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、中药泄浊解毒方低、高剂量组;观察大鼠结肠病理形态学改变及CMDI评分,运用免疫组化染色（SP法）检测NF-κBp65、ICAM-1表达。结果泄浊解毒方能明显降低大鼠结肠CMDI评分,降低NF-κBp65、ICAM-1的表达。结论泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与降低NF-κBp65与ICAM-1的表达有关。     

基于结肠黏膜ICAM-1探讨芍药汤对溃疡性结肠炎(胃肠湿热证)大鼠的作用机制

目的采用RT-PCR和Western-blot检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因生成以及蛋白的表达水平,探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎(UC)可能的作用机制。方法随机将48只清洁级SD大鼠分为4组,分别为空白组、模型组、西药对照组(SASP组)以及芍药汤组,每组12只;模型组、芍药汤组及SASP组3组大鼠在成功制成胃肠湿热证模型基础上,再建立UC模型;造模完成后,各组大鼠分别进行疾病活动指数(DAI)评分,灌胃治疗2周,处死大鼠前对其进行第2次DAI评分,完毕后麻醉并处死各组大鼠;解剖后,取病变的结肠组织观察,进行组织大体形态损伤(CMDI)评分;随后,将病变最明显结肠组织肠段2 cm左右,平均分为两等分,分别用于检测ICAM-1基因的蛋白的表达。结果相比空白组,模型组大鼠的DAI及CMDI评分升高明显(P0.01),治疗后芍药汤组上述积分与模型组相比而言,下降明显(P0.05);在结肠组织ICAM-1蛋白表达方面,Western-blot结果显示,模型组大鼠灰度值较空白组明显下降,治疗后,芍药汤组与SASP组ICAM-1灰度值均有所上升,且与正常组水平相近;大鼠结肠组织中ICAM-1 m RNA生成方面,与空白组相比而言,模型组上升明显(P0.01),而在治疗后与模型组相比,芍药汤组及SASP组ICAM-1 m RNA生成水平显著降低(P0.01)。结论芍药汤通过抑制UC(胃肠湿热证)大鼠结肠黏膜组织中ICAM-1基因及蛋白的表达,从而改善UC大鼠的症状及体征,这可能是其治疗UC的作用机制。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜IKK-α蛋白表达的作用

目的：观察溃结灵对溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠粘膜IKK-α蛋白表达的作用,对其作用机制进行初步探讨。方法：采用三硝基苯磺酸（TNBS）法制作UC大鼠模型,大鼠随机分为六组：正常对照组、模型对照组、溃结灵低、中、高剂量组、SASP阳性对照组。治疗10 d后处死大鼠取结肠组织,采取免疫组化（IHC）法检测IKK-α的阳性细胞表达率。结果：模型组结肠粘膜IKK-α蛋白阳性细胞表达率明显高于正常对照组（P〈0.01）,溃结灵中剂量组结肠粘膜IKK-α蛋白阳性细胞表达率明显低于模型组（P〈0.05）,溃结灵高剂量组和SASP阳性对照组结肠粘膜IKK-α蛋白阳性细胞表达率明显低于模型组（P〈0.01）。结论：溃结灵使TNBS法UC大鼠模型结肠粘膜IKK-α蛋白阳性细胞表达率明显降低,这可能是其治疗UC作用的机理之一。     

清肠栓对UC模型大鼠结肠黏膜固有层淋巴细胞Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:现察溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠黏膜固有层淋巴细胞凋亡及其凋亡调控蛋白Fas、FasL的表达以及清肠栓对相关表达的影响.探讨清肠栓治疗溃疡性结肠炎的作用机制.方法:用5%2,4,6一三硝基苯磺酸100m/kg灌肠建立大晟UC模型,运用电镜、原位末端标记细胞凋亡检测法(TUNEL法)和Fas、FasL蛋白免疫组化染色法,分别检测正常大鼠、UC模型大鼠以及经柳氮磺胺吡啶或清肠栓治疗后的大鼠结肠黏膜固有层淋巴细胞凋亡及固有层淋巴细胞Fas、FasL蛋白的表达情况.结果:与正常组相比,模型组大鼠结肠黏膜固有层淋巴细胞凋亡减慢,结肠黏膜固有层淋巴细胞上FasL的表达率增加,Fas的表达率下降.经清肠栓治疗后UC模型大鼠淋巴细胞凋亡增加,结肠黏膜固有层淋巴细胞上FasL的表达率下降,Fas的表达率增加.结论:溃疡性结肠炎的发病可能是由于结肠黏膜固有层FasL高表达与Fas表达不同步,降低了Fas/FasL介导的淋巴细胞凋亡率,导致淋巴细胞凋亡减慢.清肠栓可能因为诱导结肠黏膜固有层FasL与Fas同步表达,诱导结肠黏膜固有层淋巴细胞凋亡,从而达到缓解溃疡性结肠炎的目的.     

泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路的影响

目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组,除正常组外其余各组小鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型,观察经药物处理后各组大鼠结肠组织TLR2、IκB-α和血清IL-1β的表达。结果:泄浊解毒方可明显减少UC模型大鼠结肠组织TLR2、IκB-α和血清IL-1β的表达。结论:泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与调节TLR2/IκB-α/IL-1β信号通路有关。     

清肠化湿方联合美沙拉嗪颗粒对溃疡性结肠炎患者血浆及肠黏膜组织IL-17的影响

目的检测IL-17在溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）患者血浆及结肠组织中的表达水平,探讨清肠化湿方联合美沙拉嗪协同增效的作用机制。方法选择24例轻、中度UC活动期湿热内蕴证患者,对其肠组织标本进行组织学分级,根据随机数字法分为联合组（12例）与西药组（12例）,另选择12名体检健康者作为健康组,联合组予清肠化湿方联合美沙拉嗪治疗,西药组予美沙拉嗪口服,疗程3个月。治疗结束后,ELISA法检测血浆IL-17表达水平,免疫组化SP法检测肠黏膜组织中IL-17浸润。结果UC患者血浆及肠组织IL-17表达均高于健康组（P<0.05）,且随组织学分级增加而升高。两组患者血浆及肠组织中IL-17表达较治疗前均降低（P<0.05）,且联合组患者IL-17表达水平低于西药组（P<0.05）。结论清肠化湿方联合美沙拉嗪治疗可协同增效,通过下调UC患者体内IL-17的表达抑制肠道炎症。     

针药结合对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜IFN-γ、IL-12表达的影响

目的:探讨针药结合对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠粘膜IFN-γI、L-12表达的调节机制。方法:在成功建立大鼠溃疡性结肠炎模型的基础上,采用电针“足三里”穴结合西药柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗,并与单纯电针、西药、模型及正常组进行对照,以免疫组化和HE染色法观察UC大鼠结肠粘膜IFN-γ、IL-12免疫阳性细胞的表达和组织形态学变化。结果:与正常组相比,模型组大鼠结肠粘膜IFN-γI、L-12免疫阳性细胞表达出现极显著升高(P<0.01),针药、电针及西药组IFN-γ表达则见不同程度的降低(P<0.05,0.01),其中针药组表达接近于正常组水平;而IL-12表达,针药、电针及西药组均较模型组有极显著性降低(P<0.01)。同时,各治疗组对UC大鼠结肠粘膜的组织形态学变化均有一定程度的改善。结论:UC大鼠结肠粘膜IFN-γI、L-12的异常表达是溃疡性结肠炎的发病机制之一。针药结合可能通过有效抑制UC结肠粘膜IFN-γI、L-12的表达达到其治疗目的。     

痛泻要方对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜细胞间 黏附分子-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察痛泻要方治疗溃疡性结肠炎(UC)的疗效,并探讨其免疫作用机制。方法:60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、痛泻要方低、中、高剂量组、柳氮磺胺嘧啶(SASP)组,除空白组外,其余各组大鼠均以2,4,6一三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇一次性灌肠法制备UC大鼠模型。模型成功后,痛泻要方低、中、高剂量组(按生药量分别为11,22,44g.kg-1)ig,(按照临床成人用量的5,10,20倍折算),SASP组按0.3 g.kg-1剂量灌胃治疗,灌胃体积均为10 mL.kg-1,空白组、模型组灌服等体积生理盐水,治疗21 d。肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分,采用RT-PCR和免疫组化法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因和蛋白表达水平。结果:肉眼观察模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和溃疡形成,模型组炎症评分(2.50±1.08)分与空白组(0.08±0.28)分比较,P<0.05,差异有统计学意义,证实模型成功。与空白组ICAM-1基因相对表达和ICAM-1蛋白的表达量(0.17±0.02),(0.32±0.012 3)吸光度(A)比较,模型组(0.27±0.05),(0.44±0.016 6)A大鼠结肠组织ICAM-1基因相对表达和ICAM-1蛋白的表达量上调,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,ICAM-1基因相对表达和ICAM-1蛋白的表达量(A)痛泻要方高剂量组(0.19±0.03),(0.32±0.005 9),中剂量组(0.20±0.04),(0.34±0.01)表达量下调,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:痛泻要方可能下调ICAM-1mRNA和ICAM-1蛋白的表达量,抑制炎症细胞的浸润,阻止并减轻结肠组织损伤,起到治疗UC的作用。     

基于β2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路的清肠化湿颗粒防治溃疡性结肠炎的作用机制

目的:观察清肠化湿颗粒对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠及人结肠癌上皮细胞株HT-29炎症模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的干预作用。方法:取8只大鼠作为空白组,其余大鼠采用三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠法复制UC大鼠模型;待模型建立成功后,随机分为模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP,1.0 g·kg~(-1))组,清肠化湿颗粒低、中、高剂量(2.8,5.5,11.0 g·kg~(-1))组,每组8只,灌胃给药10 d,每日1次;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定UC大鼠结肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),MMP-2,MMP-9,胰岛素样生长因子-1(IGF-1),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),一氧化氮(NO),一氧化氮合成酶(iNOS),谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px);免疫组化法检测模型大鼠结肠黏膜β_2AR,β-arrestin2,NF-κB定位表达;采用肿瘤坏死因子与脂多糖诱导HT-29细胞炎症模型;噻唑蓝(MTT)比色法检测清肠化湿颗粒对细胞增殖的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中β_2AR,β-arrestin2,NF-κB蛋白表达量。结果:造模后,模型组大鼠较空白组大鼠结肠黏膜的结肠损伤分数明显升高;与模型组比较,3个剂量的清肠化湿颗粒给药组结肠黏膜损伤明显下降(P0.05,P0.01),大鼠结肠组织IGF-1,SOD,GSH-Px含量与β_2AR,β-arrestin2表达明显上升,MIF,MMP-2,MMP-9,MDA,MPO,NO,iNOS含量及NF-κB表达明显下降(P0.05,P0.01)。结论:清肠化湿颗粒可缓解UC氧化应激反应及肠道炎症,其作用与激活β_2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路有关。