肺炎支原体肺炎患儿肺功能变化与肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性的相关性

目的 分析肺炎支原体肺炎(MPP)患儿肺功能变化与肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性的相关性。方法 选取2019年1月—2021年12月杭州市富阳区妇幼保健院收治的85例MPP患儿为研究对象,统计肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性情况,确定肺炎支原体23S rRNA耐药基因型,统计MPP患儿肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性者(阳性组)、阴性者(阴性组)。比较两组临床症状、体征、住院时间、并发症发生情况、影像学特征及肺功能指标,并分析患儿肺功能指标与肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性的相关性。结果 85例MPP患儿中,肺炎支原体23S rRNA耐药基因阳性者43例(阳性组),肺炎支原体23S rRNA耐药基因阴性者42例(阴性组)。阳性组咳嗽43例(100.00%),发热38例(88.37%),气促25例(58.14%),寒战13例(30.23%),呼吸音减弱29例(67.44%);阴性组咳嗽41例(97.62%),发热34例(80.95%),气促21例(50.00%),寒战11例(26.19%),呼吸音减弱13例(30.95%)。两组咳嗽、发热、气促及寒战发生率比较,...     

23S rRNA基因位点突变与儿童肺炎支原体肺炎抗生素耐药的相关性分析

目的 分析23S rRNA基因位点突变与儿童肺炎支原体肺炎（MPP）抗生素耐药的相关性。方法 收集2020年6月—2021年6月本院治疗的MPP患儿呼吸道标本181份,采集MP阳性患儿的咽拭子标本进行药物敏感试验,并用荧光聚合酶链式反应（PCR）对标本中的肺炎支原体（MP）大环内酯类药物耐药基因突变点（A2063G和A2064G）进行检测,根据基因检测结果,将患儿分为突变组和非突变组。比较2组患儿的临床特征和实验室检查结果。结果 181份呼吸道标本中,86份PCR检测结果为阳性,总阳性率为47.51%,86份MP阳性标本中存在23S rRNA基因位点突变40例,23S rRNA基因位点未突变46例。突变组嗜中性粒细胞百分比（N百分比）、红细胞沉降率（ESR）、发热时间、住院时间、大环内酯类药物应用时间、咳嗽时间高于非突变组（P<0.05）,突变组WBC、PCT低于非突变组（P<0.05）;2组患儿性别、年龄、CRP、乳酸脱氢酶比较,差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 MPP中耐药基因普遍存在,耐药基因的突变组临床症状持续时间长、恢复慢、CRP值更高,MP基因位点...     

RT-PCR法探讨支原体23S rRNA基因突变与支原体肺炎病情的关系

目的采用RT-PCR法检测支原体23S rRNA基因突变,探讨23S rRNA基因突变与患儿病情的临床关系。方法选取本院2017年9月-2018年9月在本院儿科就诊的支原体肺炎患儿90例,所有患者均经咽拭子收集病原体标本,采用RT-PCR检测支原体大环内酯类常见耐药基因位点A2063位点基因突变,若A2063G出现突变则定为观察组,未突变定为对照组,分析基因突变与支原体感染患者病情的关系,采用Logistic回归分析重症支原体肺炎的危险因素。结果A2063G突变组患者发热时间、最高体温、呼吸道症状时间、白细胞总数、住院时间、住院费用、红霉素耐药率均明显高于非突变组患者,A2063G突变组患者对各种抗生素耐药率明显高于A2063G非突变组患者,入院前发热时间(P=0.03)、A2063G突变(P=0.02)、既往使用大环内酯类药物的使用(P=0.01)是支原体感染患儿重症肺炎的独立危险因素。结论支原体23S rRNA基因突变,探讨23S rRNA基因突变与患儿病情的临床关系。     

儿童耐药肺炎支原体DNA载量与23sRNA基因2063位点突变的相关性分析

目的 分析儿童耐药支原体肺炎的肺炎支原体(MP)DNA载量与23sRNA2063位点突变的相关性,以期为MP肺炎的治疗提供参考。方法 选取2017年12月-2019年12月在南通市第一人民医院治疗的MP肺炎患儿158例,对所有患者进行药敏试验,根据抗生素耐药性将患者分为耐药组(n＝112)和非耐药组(n＝46)。比较两组患者咽拭子MPDNA载量指数(MPLI)及23sRNA基因2063位点突变率,分析患者MPLI与临床指标的关系,采用ROC曲线分析MPLI对耐药MP肺炎的诊断价值,并分析患者MPLI与23sRNA基因2063位点突变的相关性。结果 耐药组MPLI低于非耐药组(t=4.373,P<0.001);MPLI诊断耐药MP肺炎的AUC为0.698,截点值为5.16;MPLI阳性组在退热时间≥3 d、咳嗽咯痰消失时间≥5 d、胸部阴影消失时间≥10 d、合并肺外并发症方面的人数比例大于阴性组(χ²=17.584、19.237、44.724、11.075,P<0.001);经多元Logistics回归分析得,退热时间≥3 d、咳嗽咳痰消失时间≥5 d、胸部阴影消失时间≥10 d、合并肺外并发症是影响MP肺炎患儿MPLI表达的相关因素(OR=1.420、1.573、1.670、1.598,P<0.001);耐药组23sRNA基因2063位点基因突变率高于非耐药组(χ²=52.484,P<0.001);MP肺炎患儿MPLI表达水平与23sRNA基因2063位点突变呈负相关(r=-0.538,P<0.001)。结论 耐药肺炎支原体患儿MPLI表达与临床症状消失时间等临床指标有关,与23sRNA基因2063位点突变率呈负相关,且MPLI表达对耐药MP肺炎具有诊断价值。     

军团菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立一种特异、快速、敏感,同时能区分嗜肺和非嗜肺军团菌的荧光定量PCR方法,用于检测临床和环境样品。方法利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种mip基因的保守序列,设计引物和TaqMan探针。提取嗜肺军团菌标准菌株(LP1)DNA,分别构建2个含有目的基因的标准质粒作为阳性模板。优化荧光PCR反应条件和反应体系,对方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。并对环境水样及80份临床痰样进行检测。结果该方法检测灵敏度达10标准质粒拷贝数/反应,具有高度特异性、稳定性。整个过程约需2 h。对35份环境水样进行检测,检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌,所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对临床80份随机痰液标本进行检测,2份嗜肺军团菌阳性。结论 TaqMan探针荧光定量PCR双管检测是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌的特异、敏感、稳定的方法,可用于基层医院对环境标本及临床痰样的检测。     

EVAGreen实时荧光定量PCR检测类志贺邻单胞菌的方法建立

目的 建立实时荧光定量PCR快速检测类志贺邻单胞菌的方法.方法 以类志贺邻单胞菌23S rRNA基因为目标设计引物,使用EVAGreen染料建立实时荧光定量PCR方法并优化反应条件,构建重组质粒作为标准DNA,建立标准曲线;评估该方法的灵敏度、重复性和特异性,并将所建方法用于粪便模拟样品的检测,与常规培养法比较.结果 在反应体系为10μl,模板为1μl的条件下,该方法可测的最低拷贝数为2.18×101拷贝/体系;重组质粒标准建立的标准曲线具有较大的线性范围(108～102 copies/μl);批间差异小于5％,批内差异小于3％;特异性试验中类志贺邻单胞菌检测结果均为阳性,其他常见肠道致病菌、常见弧菌以及常见正常肠道菌均为阴性;粪便模拟样品前增菌处理后检测灵敏度为25 cfu/10 ml增菌液,检测结果和传统培养法相符.结论 成功建立EVAGreen实时荧光定量PCR方法,该方法的建立为类志贺邻单胞菌的检测提供了一种简便、快捷的途径,并可对样品中类志贺邻单胞菌进行快速定量检测.     

浙江省宁波地区2019—2021年住院儿童肺炎支原体感染及耐药分析

【目的】探讨浙江省宁波地区住院儿童肺炎支原体（MP）感染及耐药性。【方法】回顾性分析2019年1月—2021年12月在宁波市妇女儿童医院住院的6 782例0～14岁急性呼吸道感染患儿的临床资料,对其呼吸道标本采用实时荧光定量聚合酶链法检测MP感染及耐药基因（23S rRNA）突变情况。【结果】2019—2021年6 782例检测患儿中,MP感染数1 290例,感染率为19.02%,MP阳性率呈逐年递减趋势（P<0.05）,2019年MP阳性率（28.12%）高于2020年（7.16%）和2021年（5.16%）,差异有统计学意义（均P<0.017）。1 290例MP阳性标本中,947例发生耐药突变,耐药率为73.41%,2020年耐药率最高（84.04%）,高于2019年（73.01%）和2021年（66.23%）,差异有统计学意义（均P<0.017）。不同季节MP阳性率和耐药率差异有统计学意义（P<0.05）;夏季MP阳性率最高,为25.00%,冬季MP耐药率最高,为78.89%,差异有统计学意义（均P<0.008）。女性患儿阳性率（20.52%）高于男...     

TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用

目的建立TaqMan探针法检测转基因大豆含量的实时定量PCR方法并应用于市售转基因食品含量的检测。方法以0、0．1％、0．5％、2．0％、5．0％的转基因大豆RoundUp Ready^TM为标准品（Fluka公司），以特异TaqMan探针序列：5’（FAM）-cccactatcettcgcaagaccct-3’（TAMRA），引物序列F：5’-tgatgtgatatctccactgacg-3’，R：5’-tgtatcccttgagceatgttgt-3’，用实时荧光定量PCR方法扩增转基因大豆外源基因CP4EPSPS基因，在实验室建立定量转基因大豆检测的标准曲线，并对市场抽检的豆奶粉、素鸡、热狗肠、黄豆等12种豆类食品及制品进行含量分析。结果在实验室建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测转基因大豆含量的方法，得到0值对转基因食品百分含量对数值的标准曲线方程式为Y=-2．8194X＋27．1855，相关系数值R^2为0．9994。12种市售大豆及制品中五香茶干、豆奶粉、素鸡、热狗肠、薄白叶检测出转基因成分含量分别为2．46％、6．26％、13．95％、0．48％、0．66％，其余7份样品为阴性。结论建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR法能够快速地进行转基因大豆含量的检测，并可应用于市售转基因食品的检测。     

Taq Man探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用

目的 建立TaqMan探针法检测转基因大豆含量的实时定量PCR方法 并应用于市售转基因食品含量的检测.方法 以0,0.1%、0.5%、2.0%、5.0%的转基因大豆RoundUp Ready<'TM>为标准品(Fluka公司),以特异TaqMan探针序列:5'(FAM)-cccactatccttcgcaagaccct-3'(TAMRA),引物序列F:5'-tgatgtgatatctceactgacg-3',R:5'-tgtatcecttgagceatgttgt-3',用实时荧光定量PCR方法 扩增转基因大豆外源基因CP4EPSPS基因,在实验室建立定量转基因大豆检测的标准曲线,并对市场抽检的豆奶粉、素鸡、热狗肠、黄豆等12种豆类食品及制品进行含量分析.结果 在实验室建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测转基因大豆含量的方法 ,得到Ct值对转基因食品百分含量对数值的标准曲线方程式为Y=-2.8194X 27.1855,相关系数值R<'2>为0.9994.12种市售大豆及制品中五香荼干、豆奶粉、素鸡、热狗肠、薄白叶检测出转基因成分含量分别为2.46%、6.26%、13.95%、0.48%、0.66%,其余7份样品为阴性.结论 建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR法能够快速地进行转基因大豆含量的检测,并可应用于市售转基因食品的检测.     

外周血免疫球蛋白M与G联合检测在小儿支原体肺炎诊断中的价值

目的探究外周血免疫球蛋白M与G(IgM、IgG)联合检测在小儿支原体肺炎诊断中的价值。方法选取2019年5月至2020年9月溧水区中医院收治的80例疑似支原体肺炎患儿,均采血行IgM、IgG检测,以痰培养结果为金标准,比较外周血IgM、IgG单项检测与联合检测诊断支原体肺炎的灵敏度与特异度。结果经痰培养结果显示,80例患儿中确诊为支原体肺炎40例(50.00%);外周血IgM、IgG联合检测诊断支原体肺炎的灵敏度与特异度均高于单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血IgM、IgG联合检测诊断支原体肺炎的灵敏度、特异度均较高。     

基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR法检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18

目的建立基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18的方法。方法针对HPV16/18病毒基因组保守序列,设计引物和AllGlo探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性,并与传统HC2方法比较。结果成功建立了双重实时荧光定量PCR检测HPV16/18的方法,检测限均为10copies/μL,敏感性和特异性均为100%。应用该方法检测160份宫颈肿瘤患者样本,与传统HC2法结果一致性为100%。结论该研究建立的快速、准确、可同时检测HPV16/18的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定性,操作简单,可用于HPV16/18的临床筛查和诊断。     

2011年北京市顺义区应用实时荧光PCR检测肺炎支原体检测结果分析

目的:通过对北京市顺义区2011年肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)实时荧光PCR检测数据进行分析,为支原体肺炎早期诊断及防控工作提供科学依据。方法:采用实时荧光PCR法对肺炎病例鼻咽拭子进行MP核酸检测。采用SPSS13.0对检测结果进行统计学分析。结果:117例肺炎病例中共检出MP核酸阳性18例,阳性率为15.38%。各季节、性别之间MP阳性率差异无统计学意义。分年龄组对MP阳性率进行比较,主要感染人群在35岁以下,差异具有统计学意义。结论:青少年为MP检测阳性的重点人群。MP感染与性别、发病季节无明显关系。实时荧光PCR检测对支原体肺炎的早期诊断和临床用药具有重要意义。     

多重荧光逆转录PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型

目的建立多重荧光逆转录PCR（RT-PCR）同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法。方法在肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型VP1基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化多重荧光RT-PCR反应体系,评价所建多重荧光RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于临床样品检测。结果该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测具有高度特异性,检出限分别为0.1 TCID50和1 TCID50,具有较好的稳定性,可直接应用于临床样品的检测。结论本研究建立的多重荧光RT-PCR可以同时准确检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的新方法。     

TaqMan实时荧光定量PCR检测肠道细菌Akkermansia Muciniphila

目的 建立Akkermansia muciniphila(A.muciniphila)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,实现粪便中A.muciniphila的定量检测。方法 根据GenBank公布的A.muciniphila 16S rRNA基因高保守序列,设计合成特异引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为标准品,通过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,同时将建立的方法用于10份成年人粪便标本的检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测A.muciniphila,仅需1.5h,该方法线性好,相关系数R²=0.9991,扩增效率E=94.7%;重复性好,组内和组间变异系数均小于3%;灵敏度可达到5×10³拷贝/μl;特异性良好。10份成年人粪便标本共检出9份为阳性,阳性粪便标本中A.muciniphila平均含量为2.70×108cells/g粪便。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR能够快速、灵敏、特异地定量检测粪便标本中A.muciniphila。     

实时荧光定量PCR快速检测细菌对抗菌素敏感性与耐药性表型的方法建立

目的 建立快速检测细菌对抗菌素的敏感性与耐药性表型的实时荧光定量PCR(qPCR)方法。方法 用基于细菌16S rRNA基因通用引物和通用探针的qPCR检测大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌临床分离菌株基因组DNA,绘制生长曲线以确定细菌显著生长的最短培养时间。计算细菌在含和不含抗菌素的M-H肉汤中的相对生长率,以VITEK 2 Compact 全自动细菌分析系统的药敏结果为金标准,对细菌相对生长率进行ROC曲线分析,确定区分细菌对抗菌素敏感与耐药的相对生长率分界值。用20株肠杆菌科细菌和10株革兰阳性球菌临床分离菌株验证方法的可靠性。结果 细菌显著生长的最短培养时间为3小时。区分大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌对抗菌素敏感与耐药的相对生长率分界值分别为0.44、0.40和0.48本方法检测30株大肠埃希菌对3种抗菌素的敏感性和耐药性的准确度分别为98.4%和100.0%,30株金黄色葡萄球菌对3种抗菌素的敏感性和耐药性的准确度均为100.0%,30株铜绿假单胞菌对3种抗菌素敏感性和耐药性的准确度分别为60.0%和64.0%。20株肠杆菌科细菌和10株革兰阳性球菌对抗菌素的敏感性与耐药性结果的总准确度分别为92.7%和93.3%。结论 本方法能快速准确为临床提供肠杆菌科细菌和革兰阳性球菌对抗菌素的敏感性与耐药性表型,但对非发酵菌药敏结果的准确性不能满足临床要求。     

利用TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒E119V耐药突变

目的 建立快速检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒(简称流感病毒)神经氨酸酶(M)基冈E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)方法.方法 由GenBank获取2000-2012年A(H3N2)亚型流感病毒NA基因序列26条,据此设计特异性靶向NA E119V突变位点的TaqMan-MGB探针进行双重rRT-PCR反应,并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价.结果 建立了快速检测NA基因E119V位点的双重rRT-PCR检测方法.本方法在A(H3N2)病毒(HA=8)稀释度至10-5仍可检测到荧光信号,病毒滴度的对数与Ct值之间呈线性相关,具有较高的灵敏度;与无耐药突变的A(H3N2)流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,两条TaqMan-MGB探针之问不存在交叉反应,具有很高的特异性,并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变,在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％,在低浓度混合病毒中的检测限是50％.重复性试验得到H3N2-119E和H3N2-119V两组探针批内平均变异系数(CV)值分别为2.32％和0.57％,批间CV值分别为1.77％和0.97％,具有较好的重复性.对其中20株病毒的NA基因序列进行分析,证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸(E),表明本研究设计的方法与序列测定结果一致.结论 建立了基于TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT-PCR方法,该方法灵敏、特异、重复性好,实验过程和结果判读简单易操作.     

Reduction of serum lipids by soy protein and soluble fiber is not associated with the ABCG5/G8, apolipoprotein E,and apolipoprotein A1 polymorphisms in a group of hyperlipidemic Mexican subjects

Several studies have evaluated the effect of soy protein or soluble fiber on serum cholesterol in hypercholesterolemic subjects, with different results. We hypothesized that this response is associated with the presence of polymorphisms in genes encoding proteins involved in lipoprotein metabolism or reverse cholesterol transport. Thus, the aims of the present work were to study the effectiveness of a dietary portfolio consisting of a combination of soy protein and soluble fiber integrated in a low saturated fat (LSF) diet on blood lipids in a Mexican group with hyperlipidemia and to determine the association between responsiveness to the diet and the frequency of apolipoprotein (Apo) E and ApoA1 and ABCG5/8 polymorphisms. Forty-three hyperlipidemic subjects (20 men and 23 women) were given an LSF diet for 1 month, followed by an LSF diet that included 25 g of soy protein and 15 g of soluble fiber daily for 2 months. After the 3-month dietary intervention, serum total cholesterol (TC) significantly decreased by 20.6%, and serum triglycerides (TGs) decreased by 40.4%. Fifty-one percent of the subjects had a reduction more than 20% in serum TC, and 77% of the subjects had a reduction more than 20% in serum TG (hyperresponders). Approximately 14% of the hypercholesterolemic subjects had the ABCG8 (52 G/C) polymorphism, 65% had the ABCG5 (1950 C/G and G/G) polymorphism, 53.5% had the ApoA1 (−75 G/A and A/A) polymorphism, and 23.3% had the ApoE (3/4) polymorphism. Independently of genotype, the combination of cholesterol-lowering foods in an LSF diet significantly reduced serum TC and TG in Mexican hypercholesterolemic subjects.