艾康颗粒对肺癌血管生成及转移影响的实验研究

目的:探讨中药艾康颗粒抑制肺癌血管生成和抗转移的作用机制。方法:①采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有艾康颗粒提取液的载体置于7 d胚龄的CAM上作用48 h,观察抑制血管生成情况,并与氢化可的松比较;②采用家兔角膜移植肿瘤模型观察艾康颗粒对肿瘤血管生成抑制作用;③采用Lewis肺癌皮下接种于C57BL/6小鼠模型,以灌胃给药法及局部给药法观察艾康颗粒对肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用。结果:艾康颗粒能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失,抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为45.87%±6.78%,降低血管密度,肺转移抑制率为47.62%。结论:中药复方艾康颗粒能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及Lewis肺癌移植瘤的血管生成,并具有抗肿瘤转移作用。     

人内皮抑素基因的克隆及其表达产物抗肿瘤活性

目的：克隆人内皮抑素（endostatin)基因并对其表达产物进行抗肿瘤活性研究。方法：从人肝cDNA文库中获得人endostatin基因，构建人载体PET15b，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，将表达产物（rhEndostatin)纯化后应用于小鼠Lewis肺癌治疗，并通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验。观察rhEndostatin的血管抑制作用。结果：rhEndostatin可抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成，明显抑制小鼠Lewis肺癌的生长。结论：rhEndostatin具有抗肿瘤活性。且此活性可能与其抑制肿瘤新生血管形成有关。     

蝎毒多肽提取物对小鼠S180肉瘤和H22肝癌血管生成抑制作用的实验研究

目的 :在器官和体内水平观察东亚钳蝎蝎毒的多肽提取物 (PESV)的抗血管生成活性和对肿瘤生长的抑制作用。方法 :①观察PESV对鸡胚尿囊膜 (CAM )新生血管生成的影响。②观察皮下注射PESV(0 .3mg/kg)对S180 肉瘤和H2 2 肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长和肿瘤血管生成的影响。③用免疫组化的方法观察PESV对S180 肉瘤和H2 2肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织血管内皮细胞生长因子VEGF和bFGF表达的影响。结果 :0 .5mg/CAM和 0 .8mg/CAM的PESV能明显抑制CAM新生血管的形成。PESV能明显抑制小鼠S180 肉瘤和H2 2 肝癌的肿瘤生长和血管生成水平 ,并降低肿瘤组织内血管生成相关因子VEGF和bFGF的表达。结论 :PESV具有良好的体内和体外抗肿瘤血管生成活性 ,并藉此抑制肿瘤的生长。     

鸡胚肿瘤血管生成模型的建立

血管生成是肿瘤生长与转移的重要条件，阻断血管生成是抑制肿瘤生长，防止转移的有效方法。建立血管生成模型，对于研究肿瘤的复发与转移及肿瘤血管生成抑制因子提供了条件。本文将鸡胚尿囊膜肿瘤血管生成模型建立方法介绍如下：材料与方法一、鸡胚：孵化箱孵育5－7天经检卵灯检发育正常种蛋（黑龙江省农业现代化研究所提供）二、瘤株；Lewis肺癌；B16黑色素瘤均由上海市肿瘤研究所引进，继续传3代以上。选择生长期组织。剪成1－2mm3小块备用。三、接种方法：（一）5－7天鸡胚在5％CO2、38．5℃湿化空气孵育箱内孵育2天于检卵灯下检视，在…     

椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响

目的:研究收涩中药椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察椿皮含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用。结论:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具有抑制作用。     

解毒祛瘀法对肿瘤血管生成影响的实验研究

[目的]证实中医解毒祛瘀法能够抑制血管生成,调控血管生长基因,抑制肿瘤生长和转移作用。[方法]1)采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有解毒祛瘀法提取液的载体置于7d胚龄的CAM上,作用48h观察抑制血管生成情况,并予氢化可的松相比较。2)采用家兔角膜移植肿瘤模型观察解毒祛瘀法对肿瘤血管生成抑制作用。3)解毒祛瘀法对荷瘤小鼠肿瘤生长及血管生成抑制作用研究。[结果]解毒祛瘀法能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失。抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为49.6%,降低血管密度,促进肿瘤血管内皮细胞凋亡。[结论]中药复方解毒祛瘀法能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及荷瘤小鼠肿瘤生长和血管生成作用,提示解毒祛瘀法能够通过抑制肿瘤血管生成起到抑制肿瘤生长作用。     

氟尿嘧啶抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨氟尿嘧啶(5-FU)的抗血管生成作用。方法：以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代培养模型，MTT法测定5-FU对HUVEC增殖的影响；采用鸡胚尿囊膜血管形成模型(CAM模型)，观察5-FU对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。结果：5-FU在非细胞毒浓度下可在体外抑制HUVEC的增殖，在体内抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。结论：5-FU在非细胞毒浓度下具有抗血管生成作用。     

蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用

目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制.方法 采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率.另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05).结论 PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关.     

重组血管生成抑制因子r—K4K5的分离纯化与功能鉴定

目的 分离纯化r-K4K5,探讨r-K4K5对牛毛血管内皮（BCE）细胞、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC-A1生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r-K4K5,BCE细胞在含r-K4K5的DMEM中培养24、48、72h后分别计数;孵化7d的鸡胚加r-K4K5后继续孵育72h,观察新生血管生成;已经接种入SPC-A1肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠（Balb/c,nu/nu）,瘤旁注射r-K4K5继续饲养,观察肿瘤生长变化。结果 r-K4K5抑制BCE细胞增殖,48～72h作用明显;r-K4K5处理的CAM组中直径小于50um的小血管明显减少;高剂量r-K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r-K4K5能够抑制BCE细胞增殖,抑制鸡胚CAM新生血管生成,抑制实验性人SPC-A1肺腺瘤生长。     

息贲胶囊对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及PCNA,CD-44,E-钙黏附素表达的实验研究

目的 探讨息贲胶囊对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及PCNA,CD-44,E-钙黏附素表达的影响.方法 用Lewis肺癌细胞株接种C57BL/6小鼠（H-2Kb）,造成自发性肺癌小鼠模型,息贲胶囊等中药灌胃治疗,用药后计数肺表面转移灶数目,免疫组织化学法检测瘤组织PCNA,CD-44,E-钙黏附素的表达.结果 息贲胶囊能减少肺转移灶数目,并能抑制肿瘤细胞PCNA的表达,增加E-钙黏附素的表达,降低CD44表达.结论 息贲胶囊能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,减少肺转移灶数目;其机制可能与抑制细胞增殖、降低PCNA表达、增加瘤细胞E-钙黏附素的表达、降低肿瘤组织CD44的表达有关.     

肺一丸对肺癌血管生成及转移影响的实验研究

[目的]证实中药肺一丸抑制肺癌血管生成和抗转移的作用。[方法]1)采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有肺一丸提取液的载体置于7d胚龄的CAM上,作用48h观察抑制血管生成情况,并予氢化可的松相比较。2)采用家兔角膜移植肿瘤模型观察肺一丸对肿瘤血管生成抑制作用。3)采用LA795肺腺癌皮下接种T739小鼠模型,灌胃给药法及局部给药法,观察中药肺一丸对肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用。[结果]肺一丸能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失。抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为49.6%,降低血管密度,肺转移抑制率为60%。[结论]中药复方肺一丸能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及肺腺癌移植瘤的血管生成,并具有抗肿瘤转移作用。提示肺一丸能够通过抑制肿瘤血管生成起到抑制肿瘤生长、抗转移作用。     

消积抑癌外敷方对Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤效果和肿瘤血管生成的影响

目的:探讨消积抑癌外敷方对Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤效果、肿瘤血管生成、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响。方法:将20只健康雌性C57BL/6小鼠随机分为荷瘤对照组和治疗组,每组各10只。采用动物移植肿瘤实验法制备Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。对照组小鼠瘤体表面外敷面糊,治疗组小鼠瘤体表面外敷消积抑癌...     

几种收涩中药对鸡胚尿囊膜血管生成影响的实验研究

目的研究收涩中药乌梅、椿皮、金樱子、五味子、五倍子、赤石脂、禹余粮对鸡胚尿囊膜生成的影响。方法采用血清药理学方法,制备收涩药物的大鼠血清;建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,并应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第5天,将加药物血清后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育48h后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出,采用医用图像采集系统分析结果。结果收涩药物金樱子、五味子、五倍子、乌梅、赤石脂、椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用（P〈0．05）;乌梅组、椿皮组对抑制新血管生成有一定的趋势,与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。     

血管内皮生长因子受体Flt-1结合小肽抑制肿瘤生长的实验研究

目的：检测从十二肽库中筛选获得的能与血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体Flt-1结合的小肽的生物学活性。方法：免疫细胞化学方法检测小肽融合蛋白DHFR-F56/F90与人脐静脉内皮细胞的结合活性;鸡胚尿囊膜血管增生抑制实验检测DHFR-F56/F90能否抑制鸡胚新生血管形成;裸鼠成瘤实验检测DHFR-F56/F90对荷瘤裸鼠中肿瘤的生长抑制;免疫组织化学方法检测DHFR-F56/F90能否定位于肿瘤组织。结果：小肽融合蛋白DHFR-F56/F90能与人脐静脉内皮细胞结合,DHFR-F56能抑制鸡胚尿囊膜新生血管的形成,且DHFR-F56能与肿瘤细胞结合,促进肿瘤组织坏死及显著抑制肿瘤生长。结论：十二肽F56是VEGF结合Flt-1的有效拮抗剂,具有抑制VEGF诱导的新生血管形成而抗肿瘤生长和转移的潜在应用前景。     

调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能调节的实验研究

目的：研究调衡方对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移的作用并探讨其作用机制．方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠右腋皮下建立Lewis肺癌模型;灌胃给药12d后观察瘤组织中淋巴细胞与瘤细胞形态学的变化;常规石蜡切片HE染色．观察瘤组织癌细胞形态的变化;免疫组化法检测瘤组织中CD4＋,CD8＋的表达水平及其血清IL-2的活性．结果：调衡中、大剂量组可见瘤组织Lewis肺癌细胞大量坏死和凋亡,荷瘤对照组对肿瘤细胞形态无明显影响;调衡中剂量组和调衡大剂量组瘤组织中CD4＋与CD8＋表达均增多,而阳性组、调衡小剂组、热休克组则主要是CD8＋表达升高．调衡方在25g／kg剂量下,对Lewis肺癌荷瘤小鼠外周血IL-2活性水平有显著地增强作用．结论：调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用机制可能与增强小鼠外周血IL-2的活性有关及增强CD4＋,CD8＋的表达水平,从而阻止了肿瘤细胞的侵袭转移．     

血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因对裸鼠人膀胱癌生长的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR胞外区基因对肿瘤新生血管的抑制作用.方法采用脂质体转染技术,将KDR胞外区基因的真核表达质粒pcDNA3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆,阳性细胞克隆进行了RT-PCR鉴定.结果鸡胚测活表明,EJ细胞表达rKDRn7的能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成;表达rKDRn7的EJ细胞株对裸鼠人膀胱癌生长及血管生成明显抑制,实验组的微血管密度(MVD)为12±4,阴性对照组62±11.结论阻断VEGF/KDR信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成,延缓肿瘤的生长速度.     

蝎毒多肽提取物对肿瘤微环境中树突状细胞成熟表型的影响

目的 探讨蝎毒多肽提取物诱导肿瘤微环境中树突状细胞成熟的分子机制。方法 建立小鼠Lewis肺癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、化疗组（CTX组）和实验组（CTX+PESV组）,每组8只。实验组在常规化疗的间隔期给予蝎毒多肽提取物干预,连续治疗21d,记录肿瘤生长曲线,观察蝎毒多肽提取物对肿瘤浸润性树突状细胞成熟表型的影响,并采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测肿瘤微环境中血管内皮生长因子（VEGF）和肿瘤生长转化因子β1（TGF β1）的表达变化,从肿瘤组织微环境的角度探讨其作用机制。结果 常规化疗的间隔期给予蝎毒多肽提取物连续治疗21d后,实验组中Lewis肺癌移植瘤的生长明显受到抑制（P＜0.05）;肿瘤浸润性树突状细胞数量以及CD80表达均较模型组升高（P＜0.05）;与荷瘤对照组比较,化疗组和实验组肿瘤微环境中VEGF mRNA的相对表达量降低,分别为荷瘤对照组的32%和12%;TGF-β1 mRNA表达量也降低,分别是荷瘤对照组的42%和21%（P＜0.05）。结论 蝎毒多肽提取物在化疗间期通过抑制肿瘤微环境中VEGF和TGF β1的表达,促进树突状细胞的成熟,恢复其功能表型。     

人内皮抑素部分序列——Es-2的生物活性研究

目的：检测人工合成多肽Es-2抑制血管生成活性及其对肿瘤生长的影响。方法：采用MTT法和鸡胚给药实验，观察Es-2对肿瘤细胞和鸡胚尿囊绒膜（CAM）上血管生成的抑制情况。建立C57BL／6黑色素瘤（B16F10）小鼠模型，以不同剂量皮下注射给药，测量各组小鼠皮下移植肿瘤体积变化和抑瘤率。结果：Es-2对肿瘤细胞无抑制现象；在CAM实验中，新生血管生长受到明显的抑制。C57BL／6小鼠给药10d后治疗组与对照组相比，Es-220mg／kg组对小鼠黑色素瘤生长有一定抑制作用，其效果相当于10mg／kg内皮抑素的治疗效果（P〈0．05）。结论：Es-2具有开发成抗肿瘤药物的前景。     

一氧化氮释放型阿司匹林对荷瘤小鼠前列腺癌血管形成的抑制作用

目的探讨一氧化氮释放型阿司匹林(NO-ASA)对小鼠皮下种植前列腺癌的生长及肿瘤血管形成的抑制作用。方法皮下荷前列腺癌小鼠体内注射NO-ASA后监测肿瘤生长情况;处死小鼠后以ELISA法检测小鼠血清VEGF的表达,实时定量PCR法检测肿瘤中VEGF mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中CD34的表达并量化微血管数目,以未注射NO-ASA的皮下荷前列腺癌小鼠为对照。受精鸡胚尿囊膜(HET-CAM)试验检测NO-ASA在体外对血管形成的影响。结果小鼠体内注射NO-ASA后皮下种植的前列腺癌的生长受到抑制,小鼠血清以及肿瘤组织的VEGF表达明显降低,肿瘤组织中的CD34表达减少,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。NO-ASA对受精鸡卵尿囊膜上的血管生长也有明显抑制作用。结论 NO-ASA可抑制前列腺癌肿瘤生长和血管形成。     

片仔癀体外抗肿瘤作用研究

目的 研究片仔癀对体外肿瘤细胞增殖的影响,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用。方法 采用MTT法检测片仔癀对体外培养肿瘤细胞（肝癌SMMC-7721细胞、胃癌SGC-7901细胞、宫颈癌HeLa细胞）的抗肿瘤作用;以鸡胚尿囊膜血管生成（CAM）实验,研究片仔癀对新生血管生成的抑制作用。结果 片仔癀在0.2～1.0 mg/mL对各肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用,1.0 mg/mL片仔癀对肝癌细胞增殖抑制率达到81.55%;片仔癀在0.1～1 000 μg/mL对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用,给药鸡胚的新生血管数减少,血管变细,其中10 μg/mL抑制率最高,一级血管抑制率为61.1%,二级血管抑制率为59.1%。结论 在实验给药浓度下,片仔癀对受试肿瘤细胞的增殖具有较强抑制作用,对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用。