α1,2-岩藻糖转移酶基因转染增加卵巢癌细胞系RMG-I Lewis y抗原的表达

目的 将人α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-FT)基因转染卵巢癌细胞系RMG-I并探讨细胞表面Lewis y及其他相关糖脂抗原的变化.方法 采用PCR方法 克隆人α1,2-FT基因编码区HFUT-H,构建表达载体pcDNA3.1(-)-HFUT-H,利用磷酸钙法将其转染入卵巢癌细胞系RMG-I,建立α1,2-FT基因稳定高表达细胞株RMG-I-H.通过酶活性测定证明转染前后细胞系α1,2-FT活性的改变,采用薄层层析、薄层层析免疫染色方法 测定转染前后细胞脂质及糖脂,特别是Ⅱ型寡糖的变化. 结果 基因转染后细胞RMG-I-H中H-1抗原及Lewis y抗原显著增加,特别是Lewis y抗原为转染前的20倍;而Ⅰ型糖链Lewis b显著减少.转染前后细胞膜上的主要脂质成分胆固醇和磷脂质的含量没有变化,且中性糖脂质也没有明显变化.结论 α1,2-FT基因转染增加α1,2-FT活性的同时,增加卵巢癌细胞系RMG-I Lewis y抗原的表达;RMG-I Lewis y高表达细胞系的建立为研究Lewis y抗原与卵巢癌生物学行为提供了细胞模型.     

α 1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞RMG-1裸鼠体内致瘤性及血管生成因子表达的影响

目的 比较α1,2岩藻糖转移酶(α1,2-FT)基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及碱性成纤维生长因子(b-FGF)表达的变化.方法 我们在前期工作中利用基因转染技术将α1,2-FT基因转入人卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ,建立了α1,2-FT及Lewis y高表达细胞株RMG-I-H.本实验将转染前后细胞种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况.5周后处死动物,测量移植瘤质量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达.结果 两组裸鼠均有皮下荷瘤形成,但转染组的成瘤时间(5.2±0.8d)早于未转染组(8.8±1.3d),且转染组的瘤质量和体积与未转染组相比亦明显增加(P<0.05).转染组裸鼠移植瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达均明显高于未转染组(P均<0.05).结论 α1,2-FT基因转染能增强卵巢癌细胞RMG-Ⅰ的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达.提示α1,2-FT及Lewis y抗原参与血管生成,其高表达在促进血管生成中可能发挥重要作用.     

小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶的底物特异性

目的对比小鼠3种GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-FT)的底物特异性.方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种α1,2-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过检测3种酶对不同种底物特性比较酶的特异性.结果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分别与人类H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性.MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞均具有α1,2-FT活性,而MFUT-Ⅲ基因转染的COS-7细胞无此活性.MFUT-Ⅱ同时对底物缺乏唾液酸的神经节苷脂(GA1)及单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)存在活性,分别生成产物岩藻糖基化GA1(FGA1)及岩藻糖基化神经节苷脂GM1(FGM1);而MFUT-Ⅰ仅对底物GA1存在活性.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性约为MFUT-Ⅰ的80～90倍.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性为GM1的10～20倍.MFUT-Ⅱ不仅具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同时具有对乳丁糖神经酰胺(Lc4Cer)及异乳丁糖神经酰胺(nLc4Cer)的活性,可合成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原.结论MFUT-Ⅱ是小鼠的主要α1,2-FT,具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-Ⅰ仅有合成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ无α1,2-FT活性.     

α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞RHG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子的影响

目的探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法利用已经建立的Lewis(y)抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学法测定基因转染前后裸鼠移植瘤组织Lewis(y)抗原及VEGF的表达。结果基因转染后的裸鼠移置瘤组织细胞表面Lewis(y)抗原及VEGF的表达明显增加。转染组与非转染组之间有统计学意义(P均<0.05)。结论α1,2-岩藻糖转移酶基因转染使卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子VEGF的表达明显增加。     

Lewis y抗原及α1，2-岩藻糖转移酶基因在卵巢癌细胞系中的表达

 目的探讨卵巢癌细胞系中Lewis y 抗原及α1,2-岩藻糖转移酶（α1,2-FT）基因FUT1表达变化对卵巢癌细胞增殖、耐
药和转移的影响。方法采用免疫细胞化学法、免疫细胞荧光法测定, 基因FUT1转染前后的人卵巢癌细胞系RMG-I
和RMG-I-H、人卵巢癌高转移细胞系HO8910PM 及亲本细胞系HO8910、人卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP 及亲本细胞系COC1
中Lewis y 抗原的表达。利用RT-PCR 法及real-time PCR法检测上述6 种细胞中FUT1基因表达的变化。结果经免疫化学方
法和免疫细胞荧光法分析,在RMG-I-H、HO8910PM 及COC1/DDP 细胞系中Lewis y 表达强度分别为（53.90±4.33）,（37.31±
0.19）和（28.52 ±1.45）,与相应的亲本细胞系RMG-I（32.18±0.64）、HO8910（14.96±0.61）及COC1（19.26±0.83）比较均明显升高
（ P均<0.05）。与RMG-I相比,RMG-I-H 中的FUT1基因表达上调3.07倍,与HO8910 相比,HO8910PM中的基因表达上调
2.13 倍,与COC1相比,COC1/DDP 中的α1,2-FT 基因表达上调2.42 倍（P 均<0.05）。结论人卵巢癌细胞表面Lewis y 抗原与
卵巢癌细胞的增殖、耐药及转移等生物学行为密切相关。     

α-L-岩藻糖苷酶对Lewis y抗原高表达卵巢癌细胞系的体外抑制作用

目的 探讨α-L-岩藻糖苷酶对Lewis y抗原高表达卵巢癌细胞系的体外增殖、黏附以及细胞膜通透性的影响.方法 以α-L-岩藻糖苷酶处理α1,2-岩藻糖转移酶基因转染前、后卵巢癌细胞系作为实验组(RMG-I-H-A、RMG-I-A),以未经α-L-岩藻糖苷酶处理的细胞作为对照组(RMG-I-H-C、RMG-I-C).利用免疫细胞化学染色法检测4组细胞中Lewis y抗原的表达,利用细胞计数法、荧光分光光度计测定细胞的生物学特性.结果 α-L-岩藻糖苷酶处理后的实验组RMG-I-H-A和RMG-I-A细胞黏附性差,生长速度减慢,细胞边缘整齐,呈椭圆型,无延伸生长,处于细胞分裂期的细胞个数少.实验组RMG-I-H-A和RMG-I-A细胞的膜通透性比对照组RMG-I-H细胞增加了4.4倍,比RMG-I细胞增加了2.3倍.结论 Lewis y抗原具有促进卵巢癌细胞系增殖,提高其生存能力的作用.     

Lewis y抗原对人卵巢癌细胞RMG-I-H部分耐药相关蛋白基因表达的影响

目的 探讨细胞表面Lewis y抗原对人卵巢癌细胞系RMG-I-H细胞的部分耐药相关蛋白基因表达的影响.方法 RT-PCR法检测转染α1,2-岩藻糖转移酶基因和未转染α1,2-岩藻糖转移酶基因的人卵巢癌细胞系RMG-I-H和RMG-I细胞中,以及10 μg/ml抗Lewis y单克隆抗体处理及未处理的RMG-I-H细胞中部分耐药相关蛋白mRNA的表达量.免疫细胞化学方法检测RMG-I和RMG-I-H细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达;分别建立RMG-I和RMG-I-H细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,采取免疫组织化学方法检测移植瘤组织P-gp的表达.结果 与RMG-I细胞比较,RMG-I-H细胞中蛋白激酶C-α(PKC-α)、拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)、多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)及MRP-2基因mRNA的相对表达量均显著增高(0.46±0.02 vs.0.27±0.05、0.82±0.08 vs.0.52±0.04、0.66±0.07 vs.0.34±0.12和0.44±0.08 vs.0.23±0.05,均P<0.05),而多药耐药基因-1(MDR-1)mRNA的相对表达量显著降低(0.26±0.05 vs.0.45±0.08,P<0.05).免疫化学染色分析显示,不论体内还是体外,P-gP在RMG-I-H细胞中的表达量均显著高于RMG-I细胞中的表达量(均P<0.05).经Lewis y单克隆抗体处理后,RMG-I-H细胞中MDR-1、MRP-1、MRP-2、PKC-α及Topo Ⅰ的mRNA相对表达量均呈时间依赖性下降(均P<0.05),而对照组以上基因mRNA的表达量不随时间的变化而变化(均P>0.05).经Lewis y抗体处理6 h的RMG-I-H细胞中MDR-1、MRP-1、MRP-2、PKC-α及Topo Ⅰ的mRNA相对表达量均显著低于对照组(均P<0.05),Lewis y单克隆抗体对上述基因表达的抑制率分别为48.55%、77.50%、70.18%、45.86%和46.13%.结论 人卵巢癌细胞表面Lewis y抗原与部分耐药相关蛋白基因表达的调节密切相关.     

中性鞘糖脂表达在卵巢癌细胞株SKOV3/Adr多药耐药中的作用

目的：探讨中性鞘糖脂(N-NSLs)表达在卵巢癌细胞株的多药耐药(MDR)中的作用。方法：利用三苯氧胺(TAM)和雏拉帕米(VRP)为逆转剂，运用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应。采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株SKOV3／Adr MDR逆转前后及亲本株SKOV3细胞的N-GSLs，高效薄层层析(HPTLC)分析了这些N-GSLs的表达。结果：SKOV3／Adr和SKOV3的N-GSLs表达有差异，SKOV3／Adr的CMH(monohexosylceramide，单己糖神经鞘氨醇)表达较SKOV3强。经TAM、VRP作用后，SKOV3／Adr的耐药性发生逆转，CMH表达降低。结论：卵巢癌的多药耐药I性与中性鞘糖脂相关。CMH可能为卵巢癌MDR相关中性鞘糖脂抗原。     

HE4基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞HO8910生长侵袭的影响

目的 探讨卵巢癌基因HE4对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 构建针对HE4基因的PcDNA3.1/HFA载体,脂质体法介导PcDNA3.1/HE4载体转染人浆液性卵巢癌细胞系HO8910,WESTERN-BLOT检测转染前后细胞内HE4蛋白的表达效果.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆形成实验观察HE4基因对细胞增殖能力的影响,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化.结果 Western-blot结果显示PcDNA3.1/HFA载体成功转染HO8910细胞并显著提高该细胞HE4基因的表达,细胞增殖能力较前无明显变化,侵袭能力明显下降.结论 通过增强HEA基因表达,可降低其侵袭能力,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因.     

缺氧诱导因子-1α增加肿瘤细胞A549化疗药物耐受性的研究

目的构建缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α）基因的表达质粒,转染肺癌细胞系A549后,观察其对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的变化。方法采用RT-PCR方法扩增A549细胞内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,经脂质体Lipofectamine^TM 2000转染A549细胞后,G418筛选。Western blot检测转染前后多药耐药蛋白（MDR1）的表达变化。加入化疗药物5-Fu（0.1mg/ml）,用生长曲线观察A549细胞的生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用Western blot检测Caspase3的活性变化。结果转染HIF-1α后,MDR1表达上调。转染HIF-1α组的细胞增殖抑制、凋亡指数、Caspase3的活性均低于单独加5-Fu组。结论HIF-1α能够增加肺癌细胞A549凋亡的阈值,从而增加细胞对化疗药物的耐受性。     

NF－κB 对卵巢癌细胞中 HIF－1α与 GST－π的调节作用

目的：探讨卵巢癌细胞中,HIF－1α与GST－π表达的相关性及NF－κB的调节作用,为卵巢癌耐药的基因治疗提供重要靶点。方法卵巢癌SKOV3细胞转染HIF－1αsiRNA,检测其转染效率;采用RT－PCR和Western blot法检测HIF－1α基因沉默后卵巢癌细胞中GST－π以及NF－κB基因和蛋白表达的变化;给予不同浓度NF－κB抑制剂PDTC后,检测GST－π和NF－κB的表达变化。结果 HIF－1α的siR－NA载体成功转染卵巢癌SKOV3细胞后,HIF－1αmRNA表达显著下降,GST－π的mRNA 和蛋白表达抑制,NF－κB表达增加。给予NF－κB抑制剂PDTC后,随着抑制剂浓度增加,GST－π表达增加。结论靶向沉默HIF－1α降低卵巢癌耐药因子GST－π的表达,增加卵巢癌细胞对化疗的敏感性。 NF－κB可能参与HIF－1α沉默后引起GST－π表达下降的调节途径。     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:观察RNA干扰沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:体外合成靶向于ERCC1基因的小干扰RNA(ERCC1-siRNA),用脂质体法转染至卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,RT-PCR方法检测转染前后细胞内ERCC1 mRNA的表达,W estern blot方法检测ERCC1基因蛋白表达的改变,MTT实验检测转染前后COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:转染ERCC1-siRNA后,COC1/DDP细胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表达均明显减少。RNA干扰联合顺铂用药能明显提高COC1/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:RNA干扰ERCC1基因能明显抑制COC1/DDP细胞内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达,增加COC1/DDP细胞对化疗药顺铂的敏感性。     

人磷脂磷酸水解酶3基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的:构建人磷脂磷酸水解酶3(hLPP3)基因的真核表达载体pLenExpress-hLPP3并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,初步观察重组表达载体对卵巢癌细胞的转染效率、目的基因表达情况及对卵巢癌细胞生长的影响.方法:采用RT-PCR法从正常胎盘组织中提取hLPP3基因,先克隆人克隆载体pGEM-T easy质粒得到pGEM-T-hLPP3,再用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切,切下的hLPP3基因亚克隆入真核表达载体pLenExpress,得到pLenEx-press-hLPP3重组质粒,采用脂质体转染法转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞.实验分为3组:A组为实验组(转染表达hLPP3基因重组质粒)、B组为空质粒对照(转染空表达质粒)、C组为无转染对照.荧光显微镜观察细胞转染效率,实时荧光定量PCR法检测hLPP3 mRNA的表达,化学法测定转染前后细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果:重组表达质粒经限制性酶切鉴定得到与hLPE,基因长度一致(936 bp)的酶切产物,测序分析证实,目的基因序列与GenBank上登录的hLPP3基因(BC009196)序列完全一致.荧光显微镜下见A、B 2组SKOV3细胞内有大量绿色荧光信号,转染率分别为67%和69%,C组细胞中无荧光信号.实时荧光定量PCR测定显示A组细胞中hLPP3 mRNA的相对表达量较B、C组明显增加(A、B、C组分别为0.510 9±0.058 4、0.149 9±0.025 5、0.143 3±0.0181,P<0.05).A组卵巢癌细胞上清液中的LPA含量较B、C组明显下降[A、B、C组分别为(2.37±0.76)μmol/L、(6.71±2.03)μmol/L、(6.84±1.49)μmol/L,P<0.05];流式细胞仪检测显示A组卵巢癌细胞凋亡率明显增加[A、B、c组分别为(30.50±2.12)%、(1.26±0.43)%、(0.10±0.03)%,P<0.05],细胞周期无明显变化.结论:成功构建了表达目的基因hLPP3的重组真核表达载体pLenEx-press-hLPP3,并能高效转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,使细胞中hLPP3基因表达水平明显升高.增强hLPP3基因表达可以降低细胞外LPA水平,诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长.     

hTERT基因反义cDNA转染对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响

目的: 研究反义hTERT基因对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响.方法: 构建反义hTERT基因的真核表达载体,采用LIPOFCTAMINETM Reagent转染卵巢癌细胞系SKOV3,通过RT-PCR、Trap-ELASA、生长曲线、裸鼠体内致瘤能力等方法比较转染前后细胞hTERT基因表达、端粒酶活性、细胞生长、致瘤性等方面的变化.结果:转化细胞系细胞hTERT基因的表达受到抑制,端粒酶活性下调,肿瘤细胞的增殖与生长速度明显降低,细胞的克隆形成能力及裸鼠体内的成瘤能力下降,肿瘤的恶性表型部分逆转.结论:应用反义技术下调hTERT基因表达可有效降低端粒酶活性并部分逆转卵巢癌细胞的恶性表型,hTERT基因可望成为卵巢癌基因治疗的新靶点.     

RNA干扰抑制α3神经型尼古丁受体的表达对SH-SY5Y神经细胞抗氧化能力的影响

目的：探讨通过RNA干扰技术抑制α3神经型尼古丁受体（nAChR）基因表达后该受体对神经细胞抗氧化能力的影响,了解α3nAChR的神经保护作用。方法：设计并体外合成α3nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSilencer 3.1-H1neo质粒中,构建重组质粒α3nAChR pSilencer3.1-H1neo。将α3nAChR pSilencer 3.1-H1neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用即时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染细胞中α3nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化。用1μmol/Lβ-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）处理转染细胞后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定细胞活力;用比色法测定其指质过氧化产物含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果：成功构建α3nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98%和66%）;经转染处理的细胞活力明显低于对照组,细胞中脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加,超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性不同程度的降低;抑制α3nAChR基因表达后能增强Aβ的神经细胞毒性作用。结论：成功构建的α3nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3nAChR基因表达,α3nAChR基因表达抑制后可引起氧化应激水平升高,并增加Aβ的神经毒性,表明α3nAChR具有一定的抗氧化能力和神经保护作用。     

Replacement of the p16 gene in human ovarian cancer cells

目的　研究逆转录病毒介导的p16基因对人卵巢癌细胞系CAOV3生长与致瘤性的抑制作用。方法　用脂质体介导法将外源野生型p16基因转染不表达p16的人卵巢癌细胞系CAOV3,对转染后细胞DNA、RNA和蛋白进行分析并观察其生物学行为变化。结果　外源性野生型p16基因已整合入细胞并获稳定表达 ,表达有外源p16基因的细胞生长速度、集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。电镜下超微结构出现生长抑制特征。结论　p16基因在卵巢癌发生、发展过程中起重要作用 ,为用p16基因转染对卵巢癌患者进行基因治疗提供了实验依据。     

nm23-H1基因转染对膀胱癌T-24细胞转移能力及化疗敏感性的影响

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力及化疗敏感性的影响.方法 将nm23-H1真核表达质粒通过电击穿孔转染技术导入人膀胱癌细胞株T-24, G418筛选阳性克隆,免疫组织化学方法检测nm23-H1基因的表达情况.Transwell小室和冲刷实验观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化.MTT法检测T-24细胞转染前后对化疗药物敏感性的变化.结果 以电穿孔技术将nm23-H1基因转入T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学结果显示T-24细胞株在nm23-H1基因转染前后其表达水平有明显差异;转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低.转染后T-24细胞对顺铂(CDDP)明显增敏.结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用.nm23-H1基因能增强T24细胞对顺铂的化疗敏感性.     

nm23-H1基因对 T-24细胞株侵袭、粘附和趋化性影响的实验研究

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达,观察nm23-H1对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力的影响。方法 ①采用已经通过基因工程技术构建的nm23-H1基因的真核表达载体,利用电穿孔基因转染技术将nm23-H1基因导入人膀胱癌T-24细胞,利用G418筛选、免疫组织化学、流式细胞方法检测nm23-H1基因的转录和表达情况。②利用Transwell小室和冲刷实验,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果以电穿孔转染技术将nm23-H1基因转染T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学和流式细胞结果显示T-24细胞株nm23-H1基因的传染前后表达水平有明显差异;发现转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低。结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

人α1,2岩藻糖苷转移酶基因在猪动脉内皮细胞的表达

目的通过基因工程技术使人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因在猪动脉内皮细胞(PAEC)表达,削减异种抗原αGal的表达。方法构建pcDNA3HTcDNA重组质粒,体外培养PAEC,脂质体转染法将pcDNA3HTcDNA转染PAEC,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,对其用PCR检测重组质粒的整合,流式细胞术(FCM)检测转染细胞H抗原和异种抗原αGal的表达。分别以未转染的PAEC和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。结果重组质粒转染PAEC经筛选得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,FCM检测转染细胞H抗原表达升高,αGal表达明显降低。结论成功构建了pcD NA3HTcDNA重组质粒,并使人HT基因在PAEC表达,抑制了αGal的合成。