抑癌基因PTEN诱导人脑胶质瘤SHG—44细胞凋亡

目的 研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG－44凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG－44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养。以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达。采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG－44胶质细胞的凋亡。观察导入入PTEN基因对SHG－44细胞裸鼠致瘤能力的影响。结果 获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG－44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表面。流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰（12．9％）。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特朋的梯状条带。转染空载体及未转染的SHG－44细胞未见的凋亡表现。转染PTEN基因后,SHG－44细胞对裸鼠瘤能力明显降低。结论 将外源必PTEN基因导入SHG－44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一。     

丹参酮ⅡA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞株C6的增殖抑制作用及其作用机理。 方法： 应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对C6细胞的增殖抑制，应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对C6细胞周期的影响，应用琼脂糖凝胶电泳观察C6细胞DNA的变化，应用RT-PCR观察相关基因c-myc表达的变化。 结果： 丹参酮ⅡA对C6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性。细胞周期分析显示：用1.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数7.7%；用2.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数21.6%。琼脂糖凝胶电泳结果显示：一定剂量丹参酮ⅡA作用后，C6细胞具有明显的凋亡特征，细胞核DNA呈梯状降解。RT-PCR结果显示：随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加，c-myc基因的表达被明显抑制。 结论： 丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞系C6的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用，并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2~M期细胞所占比例组明显增高。结论三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

姜黄素诱导永生化人HaCaT细胞凋亡

目的 探讨姜黄素对人永生化上皮细胞凋亡的诱导作用.方法 应用细胞计数、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色、苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜检测经姜黄素诱导处理后人永生化上皮HaCaT细胞的凋亡.结果经7.5mg/L姜黄素诱导处理后,人永生化上皮HaCaT细胞的增殖活动受到明显的抑制,细胞生长抑制率达83.03%;细胞周期检测出现亚二倍体(亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达13.1%,并发生G2/M期阻滞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带;细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果显示,姜黄素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,染色质凝聚,线粒体肿胀,有凋亡小体形成等显著的凋亡特征.结论姜黄素对人永生化上皮HaCaT细胞凋亡有显著的诱导作用,从而为进一步研究表皮细胞衰老、凋亡机理提供了重要基础和研究依据.     

HIV-1 Nef通过Erk/Mapk途径调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达

目的:研究HIV-1Nef基因对内皮细胞ECV304细胞ICAM-1表达的影响及其信号途径。方法:选用Nef基因稳定表达细胞株ECV304-Nef和对照细胞株ECV304pcDNA3.1(+),应用Westernblot分析ECV304-Nef细胞ERK的磷酸化水平,利用ERK磷酸化抑制剂通过Westernblot、流式细胞术分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平与信号分子ERK磷酸化的相关性。结果:Westernblot显示ECV304-Nef细胞ICAM-1和p-ERK蛋白的表达水平均高于对照组;流式细胞术检测结果表明ECV304-Nef细胞和对照组ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01)。加入p-ERK抑制剂PD98059后,ECV304-Nef细胞p-ERK水平被显著抑制,ICAM-1降至对照组水平,ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(11.4±1.1)%和(10.4±1.5)%(P0.05)。结论:HIV-1Nef基因上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达与ERK信号分子磷酸化有关,为HIV-1感染的致病机制及临床治疗提供实验基础。     

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制

目的:探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制.方法:用血清药理学方法,把含不同浓度蟾酥胶囊的血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞,分别孵育24、48 h,显微镜下观察细胞形态学改变;MTT比色检测细胞的存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA条带;免疫细胞化学显色检测Bcl-2蛋白的表达.结果:实验组部分细胞凋亡,形态学改变;细胞存活率降低,增殖受到抑制;流式细胞仪检测,可见凋亡峰;孵育48 h,琼脂糖凝胶电泳呈梯状条带(DNA Ladder);免疫细胞化学检测,Bcl-2表达明显降低.结论:蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞BEL-7402株凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关.     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究

目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVVC)诱导人ECV304细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡过程中Caspase-3,-8,-9活性变化.方法 应用MTT法、Hochest33342/PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响;比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中Caspase-3,-8,-9活性变化.结果 MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0溶血单位(HU)/ml的rVVC作用人ECV304 12 h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5 HU/ml的 rVVC处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0 HU/ml rVVC处理组加40 μmol/L Caspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0 HU/ml rVVC处理组有一定程度降低.浓度为2.0 HU/ml rVVC处理人ECV304细胞0.5 h后Caspase-3活性开始增高,于3 h达高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Caspase-8,-9活性无明显变化.结论 rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性,Caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关.     

小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用机制的研究

目的：研究小檗碱对bFGF活化人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其对肿瘤新生血管形成作用的机制。方法：MTT法检测小檗碱对bFGF活化HUVEC的增殖作用；流式细胞仪检测用药后细胞周期的变化；激光共聚焦扫描显微镜下观察药物对细胞形态、细胞内钙的影响；流式细胞仪检测小檗碱对细胞凋亡的作用。结果：小檗碱能明显抑制bFGF活化的HUVEC增殖，且存在剂量依赖关系；使细胞在G0-G1期的比例明显增多；使细胞核浓缩、甚至裂解成碎块，同时使细胞内钙增多；并诱导活化HUVEC发生细胞凋亡。结论：小檗碱可能通过将bFGF活化的HUVEC细胞周期阻滞在G0-G1期，抑制活化HUVEC的增殖：诱导活化HUVEC细胞发生凋亡等机制，阻止新生血管形成，发挥其抗肿瘤作用。     

三氧化二砷抑制兔血管平滑肌细胞增殖及诱导凋亡的相关机制

目的 研究三氧化二砷（As2O3）对免血管平滑肌细胞（VSMC）的抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经组织块贴壁法原代培养的兔VSMC,应用3H-胸腺嘧啶胞苷渗入法、透射电镜、TUNEL法、流式细胞术和基因芯片测定As2O3对VSMC的细胞活力、生长、增殖及凋亡.结果 随着三氧化二砷浓度的增加显著抑制了细胞生长,且呈剂量依赖性,透射电镜下可见凋亡小体,TUNEL检测出现了凋亡细胞,流式细胞术出现了典型的凋亡峰.基因芯片扫描杂交结果数据显示其中26条基因表达有差异.结论 As2O3对VSMC具有抑制增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用.     

葡萄糖及游离脂肪酸对人血管内皮细胞凋亡的影响

为了观察葡萄糖、游离脂肪酸（FFAs）对人血管内皮细胞凋亡的影响及葡萄糖与FFAs是否具有协同作用，将培养细胞随机分为五组进行干预：对照组；葡萄糖处理组；FFAs处理组；葡萄糖与FFAs联合作用组；渗透压对照组。通过电镜、DNA片段琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果：高糖、高棕榈酸组见到凋亡小体等典型凋亡改变；高糖和高FFAs使细胞阻滞在G0／G1期，凋亡峰和凋亡率明显增高（P〈0．05），并呈剂量一时间依赖性；两者联用凋亡率明显高于两者单独使用（P〈0．05）；低浓度FFAs组细胞凋亡率与对照组无显著差异（P〉0．05）。高糖和高FFAs诱导内皮细胞凋亡具有时间一效应、浓度一效应关系且具有协同作用，可能参与了糖尿病血管并发症的发病过程。     

鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达

目的：探讨鲨鱼软骨抽提物(SCP)诱导人胃癌MGC80—3细胞调亡的作用机制。方法：以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80—3细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoeehst33342／PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫细胞化学染色法检测Bel-2蛋白的表达。结果：SCP明显抑制(MGC80—3细胞生长,IC50值为1mg／ml;荧光显微镜下可见60％以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder);免疫细胞化学检测显示Bcl-2表达明显降低。结论：SCP诱导人胃癌MGC80—3细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关。     

DMSO诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究二甲基亚砜(DMSO)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度DMSO处理体外培养的MCF-7细胞,应用倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33258/PI荧光染色,用荧光显微镜分析凋亡细胞比率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。结果在倒置光学显微镜下观察1%DMSO处理细胞12h后细胞形态发生变化。约有50%以上的细胞变圆,细胞内有多泡小体形成。随DMSO浓度增加和作用时间的延长,细胞存活率明显下降,经MTT检测其IC_(50)值为1%;荧光显微镜下可见60%以上细胞核染色质凝集,核碎裂等凋亡细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)。结论适当浓度的DMSO能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

氨氯地平抑制氧化型胆固醇诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对人脐静脉内皮细胞凋亡的诱导作用,并观察氨氯地平对氧化型胆固醇诱导内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,利用光镜、电镜、DNA电泳及流式细胞仪测定作为凋亡检测指标。结果:对照及胆固醇组未检测到细胞凋亡,Triol与25-OH处理组光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,电泳示"DNAladder",流式细胞仪检测出现亚二倍体峰,凋亡率分别为32.25%与23.04%,而氨氯地平使其凋亡率分别下降至13.42%与11.77%。结论:氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,而氨氯地平抑制其凋亡诱导作用。     

小干扰RNA下调cyclophilin-D蛋白表达对内皮细胞抗氧化损伤的作用☆

背景：线粒体基质中的Cyclophilin-D蛋白(CypD)在线粒体损伤过程中起着特殊作用。目前对于CypD蛋白与血管内皮细胞功能的关系,以及CypD蛋白在动脉粥样硬化和血管狭窄发生、发展中的作用仍未明确。 目的：观察小干扰RNA基因沉默对内皮细胞CyPD蛋白表达及氧化应激损伤、凋亡的影响。 方法：采用含500 μmol/L H2O2的PBS液处理ECV304细胞,小干扰RNA沉默ppif基因以建立CyPD蛋白缺陷型细胞凋亡模型,空白对照组以单纯PBS液处理。流式细胞仪检测ECV304细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构。 结果与结论：CyPD缺陷模型组细胞凋亡率为(32.51±6.6)%,明显低于500 μmol/L H2O2处理组(52.57±5.84)%,P=0.001。电镜观察结果显示,CyPD缺陷型细胞模型组细胞凋亡数量明显较500 μmol/L H2O2处理组减少,形态改变也较轻,多为早期凋亡特征。提示下调CyPD蛋白水平可明显减轻血管内皮细胞氧化应激损伤和凋亡。关键词：内皮细胞;氧化应激;RNA干扰;cyclophilin-D蛋白;线粒体缩 缩略语注释：siRNA: small interfering RNA,小干扰RNA doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.032     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法:原代培养hUVEC,通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段,流式细胞术检测Annexin V/PI联合标记的细胞凋亡率, Western blot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase 3活性。 结果: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的"DNA ladder"图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase 3活性显著增强。结论: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。