PEG—BCA显色法检测循环免疫复合物

BCA（4，4’－二羧酸—2，2’—二喹啉）为一种高灵敏度蛋白是色剂[1]。其呈色反应可不受PEG（聚乙二醇）的影响，对不同蛋白质的吴色力基本一致[1]。本文以BCA替代LOWRY氏试剂，用于PEG沉淀法检测循环免疫复合物（CIC），结果满意，现将试验方法与结果报告如下：1材料与方法1．1试剂①0．1mol／LpH8.4用酸盐缓冲被（BB液）。②70P／LPEG（分子量6000）溶液：以PHS．4BB液配制，内含EDTANa；80mmol／L，用10mol／LNaOH调正到PH为8．4。＠359／LPEG（分子量6000）溶液：以gHS．4BB液配制。＠100mm／L蛋白标准液。⑤be…     

Sysmex系列血细胞分析仪所用试剂的研制与应用

日本生产的Sysmex系列血细胞分析仪所用的稀释液和溶血剂与清洗液，价格非常昂贵。作者研制的上述三种试剂，价格很便宜，使用效果也很满意。每份标本所用的试剂成本比日本产的要降低35.2倍，而两者测定结果又完全相同，现报告如下。1材料与方法1．1仪器日本SysmexF－820血细胞分析仪．1．2试剂①稀释液。109．15mmol／NaCl，16．17mmol／LH3BO3，786.5μmol／LNa2B4O7，483.5μmol／LEDTA－Na2．②溶血剂：89．08mmol／LKCN，3．69mmol／LNa2Fe（CN）5NO，100ml／L乳化剂OP．③清洗液：128．3mmol／NaCl，0．629mmOI／LNa…     

质粒DNA简单快速提取及纯化回收

质位DNA提取的方法较多，每种方法都有各自的优点及局限，由于费时仅力以及议钠等条件的限制使得实验者不甚满意．本文介绍一种简单快速提取及统化回收质位的方法．1材料与方法1．1仪器①电泳仪；②DNA回收相（南京大学生化系产）；③紫外线透射仪，④台式高速高心机．1．2试剂①LB培养基（tryl）tO。10yL，yysttX－tract5g几，NaCI109／L调PH7．4后高压灭菌），②溶液1（50mmol／Lglucose，25mmol几Tris－HCIpHS．0，10mmol／LEDTApHS．0）；③溶液！（0．2mol／LNa0H，1％SDS）④溶液三（3mol／LNaAcpH4．8）；⑤异丙四…     

西安地区回族中性粒细胞NA抗原基因分型

NA（neutronhilantigen）是人类粒细胞中最常见的中性粒细胞特异性抗原之一，分为NA_1和NA_2。其分型对研究民族遗传特性及粒细胞相关疾病有重要意义。国外目前对NA抗原多态性及其与疾病相关性的研究较多[2-7]。而国内所见文献报道甚少。我们参照国外文献，采用多聚合酶链反应一序列特异性引物（PCR－SSP）方法在DNA水平对中国西北地区回族人NA基因抗原多态性分布进行研究，现报道如下。1材料与方法1．1选择对象随机选取回族无血缘关系健康个体104例。1．2仪器与试剂PCR仪（UKHYBAID公司Omn－E自动扩增仪）；紫外照射仪（上海…     

P^53,mdm2和neo基因探针的制备与应用

为研究P53和mdm2基因在肿瘤细胞中的表达意义。本文将克隆于质粒载体中的P53、mdm2和neo基因分别用双酶切割得到P53、mdm2cDNA和neo基因片段，采用地高辛标记制备P53、mdm2、cDNA和neo基因探针，用于DNA和RNA斑点杂交及肿瘤细胞中P53和mdm2的检测。1材料和方法1．1材料1．1．1主要试剂：TE液（1mmol／LTris－HCI；1mmol几EDTA，pH8．0）、EcoRI、BamH！、Sal！、fundl、Xbal、lug－11－duTP（均购自德国BoeheringerMannbeim公司）。1．1．2重组质粒：PDOR－P‘’、PDOR－mdm。、pBCMGSNeo（本室保存）。1．1．3细胞系…     

快速检测不完全抗体方法的临床应用

我们在文献（林妈利．输血医学．台北：立正黑白制版有限公司，1992：188）提出的手工凝聚胺试验技术的基础上，通过实验改良，研制了一种组合试剂，快速检测不完全抗体，并作为常规技术用于临床，现将应用情况报告如下：1材料与方法1·1血型抗体红细胞请细胞，抗人球蛋白血清，菠萝员均购自成都中国医学科学院输血研究所．1．2组合试剂A液参照文献[1]，B液称取硫酸鱼精蛋白0．25g，血清白蛋白1．25g，聚乙二醇（分子量6000）1.25g加入灭菌蒸馏水250ml；C液称取柠檬酸三钠2．5g加入灭菌蒸馏水250ml。1．3方法取待检血清2滴，加人洗涤三次…     

石蜡组织提取DNA 4种方法的比较

目前，从石蜡包埋组织中提取DNA在数量和质量上都不能令人满意^[1]。而按常规酚一氯仿法抽提DNA，过程长，有毒性，用于PCR扩增，成功率较低。我们应用4种不同方法从石蜡包埋人胃癌组织中提取DNA，用于PCR扩增，从中摸索出一个简便，经济，实用的方法，现报道如下。     

聚合酶链反应检测真菌感染的临床评价

用聚合酶链反应 (PCR)检测真菌 ,已有较多报道[1 2 ] ,我们也曾报道过初步研究[3 ] 。为给临床提供快速、灵敏、非创伤的真菌感染诊断方法 ,本文就采用真菌通用引物PCR检测真菌DNA的灵敏度、特异性、可检测真菌范围及临床适用性作进一步评价。1　材料和方法1 1　引物　真菌 18S亚基rRNA多拷贝基因的保守序列通用引物序列为 5′ ATTGGAGGGCAAGTCTGGTG 3′和 5′ CCGATCCCTAGTCGGCATAG 3′ ,扩增产物大小因真菌病原体而异 ,为 4 82～ 5 0 3bp[4] ,白色念珠菌为 4 90bp。由北京赛百盛生物工程公司合成。1 2　临床无菌性…     

6400-A型火焰光度计雾化器的调修

雾化器是火焰光度计的关键部件之一，进气喷嘴和吸样毛细管位置直接影响到雾化效率的稳定等、对此有关文献[1，2]介绍不一，作者在临床实践中摸索出使用K 、Na 标准液调节雾化器的方法，现介绍如下：1材料与方法1.1仪器与试剂6400－A到火焰光度计由上海分析仪器厂生产，编号。SFI·674·002HG；K ／Na 标准液由北京中生公司提供，K ＝5．0mmol／L，N ＝140mmol／L，批号：921106。1．2定值血清由卫生部上海生物制品研究所提供，批号：930234。1．3方法开机预热20min后，调整火焰至最佳状态，量程开关K “3”档，Na “2”档；以蒸馏水…     

144例HBV感染者血清PCR-HBV-DNA与Pre-S_2相关性观察

HBV感染期间，血清HBV－DNA、HBeAg是代表HBV复制的指标．我们应用聚合酶链式反应（PCR）检测了144例乙型肝炎病人血清中HBV－DNA，同时用ELISA法测定了Pre－S：，旨在证实HBeAg、HBV－DNA、Pre－S：三个病毒复制指标的相关性，以了解HBV感染者病毒复制情况．1材料和方法1．1血清标本来源1994年1月～9月我院住院的144例乙型肝炎病人血清．其中52例HBeAg（＋）／抗MBe（－），44例HBeAg（－）／抗一HBe（＋）；48例HBeAg（－）／抗，ute（－）．1．2HBV—M检测ELISA法：试剂盒由上海市传染病医院提供．1．3Pre—…     

098ApoE基因型的PCR检测

[英]／ReymerWA…∥ClinChem．-1995，41（7）．-1046ApoE是极低密度、中密度、高密度脂蛋白微粒中主要的蛋白质之一，由肝脏合成。血浆中存在三种异形体（ApoE2、E3和E4）。ApoE在动脉粥样硬化病因学中起着重要的作用。近年发现，ApoE4等位基因与Alzheimer病的晚期发作有很大的关系。作者介绍了一种快速、可靠PCR法分析ApoE基因型。方法：从白细胞中分离的DNA溶于pH8.0、10mmol／LTirs溶液中（含1mmol／LEDTA），4℃贮存。取待检液100～500ng，引物0.5μmol／L，dNTP100μmol／L，牛血清白蛋白0.2g／L，整个反应在标准的PC…     

一种增强核酸分子杂交信号的方法

核酸分子杂交已成为分子病理学和分子生物学研究中的基本技术之一，并逐渐应用到临床基因检测中。实验中常遇到的问题是杂交信号往往较弱，影响了结果的评价。我们在实践中摸索到一种简便易行、质高价廉的增强核酸杂交信号检测的方法。现报告如下。1材料与方法1．1核酸提取按文献[1]介绍的方法从卵巢癌组织及正常卵巢组织中提取核酸DNA，在UV－754型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）上分别测定每份标本的OD值，计算其核酸含量［核酸含量=OD260×稀释倍数×（50／1000）]，然后置-20℃的冰箱备用。1．2点膜将预先浸过6XSSC的…     

应用聚合酶链反应检测真菌性角膜炎

目的:探讨应用聚合酶链反应(PCR)快速检测临床疑似真菌性角膜炎(FK)的方法。方法:以源于医学机会性致病性真菌18srDNA保守区的一对寡核苷酸序列B2F(5'-ACTTTCGTAGGATAG-3')和B4R(5'-TGATCGTCTTCGATAAATA-3')为通用引物,对临床疑似FK的标本进行PCR,并与培养进行对比。结果:在687bp处出现DNA扩增带者为阳性。30份临床标本的真菌培养率为23.3%,而经扩增阳性率为50%。结论:真菌通用引物PCR反应检测真菌性角膜溃疡有较好的敏感性和特异性。     

用铁氰化钾消除胆红素对HDL-c酶法测定的干扰

胆红素对应用Trinder反应的高密度脂蛋白胆固醇（HDL－c）酶法测定有显著的干扰，我们从文献（蒋兴良．国外医学临床生物化学与检验学分册，1994，15（1）：40〕中得到启示，设计了一种用铁氰化钾氧化胆红素消除干扰的简单有效的方法．1材料与方法1．1试剂①HDL－c酶法测定试剂盒（东瓯试剂）。②40mmol／L铁氰化钾溶液。③1．29mmol／L胆固醇标准液。④0．3mol／L抗坏血酸。1．2方法待测黄泣血清0．3ml，加40mmol／L铁氰化钾15叫混匀，室温sndn后加沉淀剂0·3ml混匀，15min后离心，分别取上清波0．Zml于测定Uf和佯品空白Ua管中，U。…     

湖北地区汉族人群动脉硬化性脑梗死与载脂蛋白（a）5’调控区（TTTTA）n基因多态性的关系

背景：载脂蛋白(a)具有促进动脉粥样硬化斑块形成的作用，在载脂蛋白(a)5’存在一个五核苷酸重复序列(pentanuclotide repeats，PNR)，对研究遗传和预测动脉硬化性脑梗死(atheroselerosis cerebral infarction，ACI)的危险性具有一定的价值，但在不同人种中与ACI的关系尚处在探索阶段，载脂蛋白(a)PNR基因多态性在汉族人群ACI发病中的意义如何?目的：研究载脂蛋白(a)PNR基因多态性与ACI的关系。设计：以湖北地区汉族ACI患者和正常人群为研究对象的病例一对照研究。单位：一所大学医院的检验科。对象：选择1998—02／1999—03武汉大学中南医院和武汉大学亚太医院神经内科确诊的ACI患者82例(ACI组)及健康体检者153例(对照组)，均为无血缘关系的湖北地区汉族人。方法：对所有受试者分别检测血清脂蛋白(a)、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL—C)、低密度脂蛋白胆固醇(1igh densituy lipoprotein cholesterol，LDL—C)、三酰甘油、载脂蛋白AI及载脂蛋白B水平。同时采用聚合酶链反应结合高压聚丙烯酰胺凝胶电泳检测载脂蛋白(a)5’调控区五核苷酸重复序列基因多态性，并加以对照分析。结果：ACI患者脂蛋白(a)[(239．9&;#177;225．4)mg／L]、总胆固醇【(4．76&;#177;0．74)mmol／L】、三酰甘油[(1．74&;#177;0.60)mmol／L]、LDL—C[(2．84&;#177;0．63)mmol／L]水平明显高于对照组[(133．5&;#177;97．7)mg／L，(4．29&;#177;0．72)mmol／L．(1．05&;#177;0．52)mmol／L，(2．84&;#177;0．63)mmol／L]，HDL-C水平[(0．88&;#177;0．17)mmol／L]明显低于对照组[(1．03&;#177;0．35)mmol／L]，差异均有显著性意义(t=3．65—9．18，P均&;lt;0．01)，载脂蛋白AI[(1．13&;#177;0．15)和(1．25&;#177;0．19)mmol／L]、载脂蛋白B[(0．93&;#177;0．12)和(0.89&;#177;0．15)mmol／L]，与对照组比较差异无显著性意义；ACI组中重复序列数为5的等位基因频率(0．098)明显高于正常对照组(0．026)，差异有显著性意义(χ^2=5．62，P&;lt;0．05)，重复序列数为9的等位基因频率(0．073)明显低于对照组(0．213)，差异有显著性意义(χ^2=7．83，P&;lt;0．01)，且重复序列数为5的等位基因还与血浆TC下降和Lp(a)升高有关联。结论：提示Apo(a)PNR基因多态性与人群易感ACI有关，可能在一定程度上参与ACI的发生和发展过程。     

HBV—DNA检测中血清裂解处理效果探讨

待检样品中的DNA是聚合酶链反应（PCR）的模板，能否有效提取是决定PCR检测阳性率高低的关键步骤。我们在采用PCR法检测HBV－DNA时，按试剂盒要求裂解条件是煮沸100℃15min，但我院地处高原地区，海拔1630m，煮沸只能达到95℃，为了探讨裂解效果，提高检测的阳性率，选用了三种裂解方法进行血清裂解处理；并对血清做了乙型肝炎标志物检测。结果报告如下。1材料和方法1．1仪8＊＊R9801D型扩增仪，紫外透射分析仪（西安开元公司）；DY－600型中压电泳仪（广东汕头医用设备厂）【高速离心机TGL－16B（上海安亭科学仪器厂）。1．2试…     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立及应用

[目的]建立和应用半巢式聚合酶链反应法（PCR）检测慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）。[方法]根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列，设计3个相对保守的引物，建立HBV cccDNA半套式PCR，并用该法检测96例慢性乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA。[结果]96例慢性乙型肝炎患者中，35例HBV cccDNA阳性，阳性率为36．5％。HBV cccDNA阳性组的HBeAg、HBV DNA、ALT和AST水平均明显高于阴性组（P〈0．05），但两组的HBsAg水平无显著差异（P〉0．05）。HBV DNA≥10^5组的HBV cccDNA检出率为58．3％（35／60），明显高于HBVDNA〈10^5组（0％，0／36）（P=0．000）；HBeAg阳性组的HBV cccDNA检出率为50．9％（28／55），明显高于HBeAg阴性组（7／41，17．1％）（P=0．001）。[结论]半套式PCR方法简便，可用于测定血清中HBV cccDNA，以评价抗病毒治疗慢性乙型肝炎的疗效。     

小肠脂肪酸结合蛋白基因多态性与冠心病患者血脂水平关系的研究

目的探讨小肠型脂肪酸结合蛋白（FABP2）外显子2第54位密码子的基因多态性与不同民族冠心病患者血脂水平的关系。方法收集人选人群的空腹外周血标本,全血用于提取DNA,血清用于检测血脂。采用聚合酶链反应（PCR）,DNA限制性内切酶酶切（RFLP）等技术,分别对病例组（汉族冠心病组60例,蒙古族冠心病组60例）和对照组（汉族对照组51例,蒙古族对照组51例）54A／TFABP2基因型进行分析。结果（1）汉族冠心病组人群54T等位基因频率为0．542,54A等位基因频率为0．458;蒙古族冠心病人群54T等位基因频率为0．708,54A等位基因频率为0．292;汉族对照组人群54T等位基因频率为0．284,54A等位基因频率为0．716;蒙古族对照组人群54T等位基因频率为0．353,54A等位基因频率为0．647;与对照组相比：汉族及蒙古族冠心病组人群突变型54T等位基因频率明显增高,且差异均有统计学意义（统计值分别为：X2=14．967,P〈0．05;x2=28．083,P〈0．05）;蒙古族冠心病人群突变型54T等位基因频率较汉族冠心病人群增高,且差异有统计学意义（X2=7．111,P〈0．05）。（2）与FABP2Thr54（-）者相比,冠心病组FABP2Thr54（＋）者的空腹血浆TG[汉族冠心病：Thr54（-）人群为（1．89±0．57）mmol／L,Thr54（＋）人群为（3．92±1．63）mmoL／L,P=0．001;蒙古族冠心病组：Thr54（-）人群为（2．23±0．13）mmol／L,Thr54（＋）人群为（4．03±1．14）mmol／L,P=0．035]、低密度脂蛋白胆固醇[汉族冠心病：Thr54（-）人群为（3．09±0．92）mmol／L,Thr54（＋）人群为（4．05±1．14）mmol／L,P=0．025;蒙古族冠心病组：Thr54（-）人群为（4．26±0．08）mmol／L,Thr54（＋）人群为（5．104-0．56）mmol／L,P=0．045]水平升高。结论（1）内蒙古自治区呼和浩特市市区蒙古族及汉族人群中存在FABP2外显子2第54位密码子的基因多态性。（2）FABP2基因多态性是冠心病患者脂质代谢异常的影响因素,可能与冠心病发病风险有关,携带FABP2Thr基因的蒙古族个体冠心病发病风险增高。     

真菌DNA提取方法的建立和比较燃

目的：DNA的提取效率，尤其是DNA的纯度严重影响实验结果，同一标本采用不同方法或不同标本采用相同方法提取DNA，其纯度和提取率有很大差异。以丝状真菌为材料，进行DNA提取，对真菌DNA的提取方法进行优化，探讨其最佳DNA提取方法。 方法：实验于2004—06／2006—12在吉林大学基础医学院真菌实验室进行。以临床常见致病真菌标本为材料，采用玻璃珠-盐析法、CTAB法、Gene TLE^TM法3种不同方法提取DNA，通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取DNA的效率。 结果：同等菌体量下，A260和A80的比值采用Gene TLE^TM法获得的样品最高，表明其蛋白质含量相对最少。3种提取的基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图都在相应的多重PCR体系中扩增出目的片段，Gene TLE^TM DNA抽提法带型最清楚、明亮。 结论：Gene TLE^TM法提取DNA效率高、质量好，操作简单，适于DNA的提取.     

钙离子浓度对大鼠精子自发性顶体反应的影响

[目的]研究钙离子浓度对大鼠精子自发性顶体反应的影响。[方法]不同钙离子(Ca^ )浓度的EKRB改良培养液含0．3％牛血清白蛋白于37℃5％CO2的培养箱中培养精子，用金霉素染色法检测不同时间精子获能和自发性顶体反应的百分率。观察孕酮和钙离子载体A23187诱导精子顶体反应的情况。[结果]在不同Ca^2 浓度的EKRB培养液中，Ca^2 浓度为0．7mmol／L时，大鼠B型精子和自发性顶体反应的百分率均较低；1.0mmol／L时，其B型精子百分率较高，自发性顶体反应的百分率较低；1.3mmol／L时，其B型精子和自发性顶体反应的百分率均较高。[结论]EKRB改良培养液中钙离子浓度为1．0mmol／L时，既能使精子较好地获能，又能使自发性顶体反应的百分率较低。