硒性白内障α—晶体蛋白的分子伴侣特性

目的：研究硒性白内障α－晶体蛋白的分子伴侣特性。方法：制作SD大鼠亚硒酸钠性白内障模型,分离纯化正常和白内障晶状体α－晶体蛋白。观察α－晶体蛋白对过氧化氢酶（CAT）热凝聚的抑制作用。结果：正常和硒性白内障幼鼠晶状体α－晶体蛋白与对照蛋白比较,具有特异性抑制CAT热凝聚的作用;αH较αL－晶体蛋白伴侣功能降低;硒性白内障α－晶体蛋白的掏作用下降,正常和白内障晶状体αH和αL－晶体蛋白伴侣功能两者之间分别比较均有显著性差异。结论：硒性白内障α－晶体蛋白抑制AT热凝聚的分子伴侣活性下降是导致白内障形成的重要环节。     

高相对分子质量α-晶体蛋白分子伴侣活性在年龄相关性白内障中的变化

目的研究年龄相关性白内障高相对分子质量α晶体蛋白(αH晶体蛋白)的分子伴侣功能。方法101只白内障晶状体取自年龄相关性白内障(ARC)患者眼,26只透明晶状体取自意外死亡的健康青壮年角膜移植供体眼,使用SephacrylS300HR分离透明和混浊晶状体皮质和核αH晶体蛋白。采用αH晶体蛋白抑制过氧化氢酶(CAT)、βL晶体蛋白的热凝聚,以及糖基化和加热诱导CAT的失活作为分子伴侣的观察指标。结果年龄相关性白内障晶状体含大量αH晶体蛋白,αH晶体蛋白的作用较αL晶体蛋白弱,对CAT和βL晶体蛋白热凝聚的抑制作用相似。透明晶状体与ARC、65岁以上组与65岁以下组、Ⅱ级与Ⅳ级核之间αH晶体蛋白分子伴侣功能差异具显著性。αH晶体蛋白可保护果糖和加热诱导CAT的失活。结论人αH晶体蛋白具有分子伴侣活性。但活性较αL晶体蛋白低。晶状体在老化过程中受翻译后修饰(PTM)的严重影响,形成大量αH晶体蛋白聚合物,导致分子伴侣功能下降,可能是白内障发病的关键因素之一。     

老化过程中α-晶体蛋白分子伴侣活性的变化

目的：研究老化过程中α-晶体蛋白的分子伴侣功能。方法：使用Sephacryl S-300HR分离幼年、中年和老年兔晶状体皮质和核α-晶体蛋白。测定α-晶体蛋白对加热(60℃)诱导过氧化氢酶(catalase，CAT）和β-晶体蛋白凝聚，果糖(37℃)和加热(60℃)诱导CAT失活的保护作用。结果：四种评估伴侣功能的方法有类似的结果。不同年龄兔晶状体皮质α-晶体蛋白的保护作用较核强，αH-晶体蛋白的伴侣功能均较αL-晶体蛋白降低；随着老化晶状体皮质αH-和αL-晶体蛋白的伴侣功能无显著性降低，但核αL-晶体蛋白伴侣功能的降低具有显著性。结论：晶状体核α-晶体蛋白年龄依赖性伴侣功能的降低，可以参与老年性白内障的形成。     

翻译后修饰对α—晶体蛋白分子伴侣活性的影响及白内障形成机制

翻译后修饰（post translational modification,PTM）是蛋白质翻译后通过酶的催化或酶控制下的反应而发生修饰，包括糖基化、氨甲酰化、氧化、磷酸化、乙酰化、脱酰胺和切除作用等。白内障和老化被认为是一类结构性疾病（conformational disease）。PTM可造成蛋白质结构改变。α－晶体蛋白作为晶状体主要的结构蛋白质，具有分子伴侣（molecular chaperone）活性，可抑制蛋白质的凝聚和酶的失活。PTM可诱导α－晶体蛋白分子内部或分子之间的交联，导致其分子伴侣活性降低，加速白内障形成。赖氨酸基因PTM最敏感，封闭赖氨酸的ε－氨基基团，可阻止和延迟蛋白质交联。寻找抑制或阻断PTM的因子，有助于药物治疗此类疾病方法的突破。     

紫外线辐射对α-晶状体蛋白分子伴侣活性的作用

目的 研究在老化和白内障形成过程中紫外线（UV）辐射对α-晶状体蛋白分子伴侣活性的作用。方法 新生Sprague-Dawley大鼠皮下注射亚硒酸钠诱导硒性白内障（SC），采用SephacrylS-300HR分离幼年和老年兔晶状体皮质和核以及SC大鼠α-晶状体蛋白。以α-晶状体蛋白对过氧化氢酶热凝聚的抑制作为分子伴侣活性指标，观察UV-B（300nm)辐射α-晶状体蛋白蛋白后，其伴侣活性的变化。结果 UV辐射新生和老年兔晶状体核αL-晶状体蛋白后30h，与辐射前比较伴侣活性降低约18%和14%，而皮质的变化不显著；至100h时，老年兔皮质，核和新生兔核αL-晶状体蛋白比αL-晶状体蛋白敏感，UV辐射可进一步降低硒性白内障α-晶状体蛋白的分子伴侣活性。     

离体氨甲酰化诱导α-晶体蛋白分子伴侣活性的丧失

目的:研究氨甲酰化作为晶状体蛋白质重要的翻译后修饰,对α-晶体蛋白分子伴侣活性的作用。方法:分离牛晶状体αL和βL-晶状体蛋白。αL-晶状体蛋白分别与不同浓度的[14C]氰酸钾温育1至7 d,采用三氯醋酸沉淀法测定αL-晶状体蛋白与[14C]氰酸基团的结合率。αL-晶状体蛋白分别与50和100 mmol.L-1氰酸钾37℃温育3至7 d,测定αL-晶体蛋白抑制βL-晶状体蛋白热凝聚的分子伴侣活性,高效液相色谱法(HPLC)分析αL-晶状体蛋白的氨甲酰化作用。结果:αL-晶状体蛋白与[14C]氰酸基团的结合率和离体氨甲酰化诱导的α-晶状体蛋白伴侣活性的降低呈剂量和时间依赖性。伴侣活性的降低与较高氰酸基团的结合相一致。与对照相比,100mmol.L-1氰酸钾温育7 d导致αL-晶体蛋白伴侣活性几乎殆尽。.HPLC结果提示与氰酸钾温育3 d后可发生剂量依赖性αL-晶体蛋白的凝聚。结论:离体氨甲酰化通过高分子量凝聚物的形成修饰α-晶体蛋白,氨甲酰化诱导α-晶体蛋白的凝聚可能导致其伴侣活性的丧失。     

翻译后修饰对α-晶体蛋白分子伴侣活性的影响及白内障形成机制

翻译后修饰 (posttranslationalmodification ,PTM)是蛋白质翻译后通过酶的催化或酶控制下的反应而发生修饰 ,包括糖基化、氨甲酰化、氧化、磷酸化、乙酰化、脱酰胺和切除作用等。白内障和老化被认为是一类结构性疾病 (conformationaldisease)。PTM可造成蛋白质结构改变。α 晶体蛋白作为晶状体主要的结构蛋白质 ,具有分子伴侣 (molecularchaperone)活性 ,可抑制蛋白质的凝聚和酶的失活。PTM可诱导α 晶体蛋白分子内部或分子之间的交联 ,导致其分子伴侣活性降低 ,加速白内障形成。赖氨酸基团对PTM最敏感 ,封闭赖氨酸的ε 氨基基团 ,可阻止和延迟蛋白质交联。寻找抑制或阻断PTM的因子 ,有助于药物治疗此类疾病方法的突破。     

α-晶体蛋白分子伴侣活性在白内障发病中作用的研究进展

α－晶体蛋白是晶状体中重要的成份蛋白质，是由αＡ和αＢ亚基组成的四聚体蛋白。长期被认为其功能主要是维持晶体的结构和屈光性，自１９９２年Ｈｏｒｗｉｔｚ证实α－晶体蛋白具有分子伴侣（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ）作用之后，大量的研究表明α－晶体蛋白能够抑制其它晶状体蛋白和酶的化学性修饰和热凝聚而保护其活性，对长期维持晶体状体的透明性具有重要作用。αＡ亚基Ｃ－端序列和αＢ亚基Ｃ－端的伸展的变化     

年龄相关性白内障α-晶状体蛋白的分子伴侣功能

目的:研究年龄相关性白内障α-晶状体蛋白的分子伴侣功能。方法:使用SephacrylS-300HR分离健康人透明的和年龄相关性白内障混浊的晶状体皮质和核的αL-晶状体蛋白。采用分光光度计测定αL-晶状体蛋白对过氧化氢酶(catalase,CAT)热凝聚的抑制作用。应用SDS-PAGE分析CAT与αL-晶状体蛋白在热凝聚实验中形成的复合物。结果:人αL-晶状体蛋白可特异性地抑制CAT热凝聚。透明晶状体皮质较核的抑制作用明显;白内障αL-晶状体蛋白的抑制作用明显下降,65岁以下与65岁以上、65岁以上白内障Ⅱ与Ⅳ级核之间αL-晶状体蛋白的抑制作用比较,差异均有显著性;65岁以下Ⅱ与Ⅳ级核之间比较,差异无显著性,但Ⅳ级核的抑制作用降低。SDS-PAGE显示热凝聚实验透明晶状体皮质αL-晶状体蛋白的20kDa带在加热后0、40min和2h可溶部分无显著减少,62kDa的CAT带含量逐渐减少。结论:人α-晶状体蛋白具有抑制CAT热凝聚的分子伴侣功能,白内障晶状体核的α-晶体蛋白具有年龄和混浊程度依赖性伴侣功能的降低,这在白内障形成过程中起重要作用。     

α-晶体蛋白的分子伴娘样作用与白内障

分子伴娘的功能是介导其它蛋白质的正确折叠和装配,但它本身却不是有功能的最终装配产物的组成成分。α晶体蛋白作为晶体中重要的成分蛋白,具有分子伴娘样活性,对各种变性剂包括加热、紫外线照射和化学处理造成的蛋白质非特异性的凝聚具有抑制作用,对糖基化诱导的重要的代谢和抗氧化酶的失活具有保护作用。α晶体蛋白分子伴娘作用的丧失与白内障发病密切相关。本文就其研究现状及前景作扼要综述。     

晶状体蛋白组学与先天性白内障

基因组学研究的深入,使人们认识到蛋白研究的重要性,蛋白组学则是对生命活动进行的系统研究。晶状体蛋白虽在不同情况下表现的蛋白质组不同,但在合成后极少更新,几乎伴随终身。因此,对晶状体蛋白组进行研究,有助于对先天性白内障发病机制的探索。本文就晶状体蛋白组学的研究现状及其与先天性白内障的联系进行了综述。     

Application of proteomic technology in eye research: a mini review

Proteomics is a rapidly growing research area for the study of the protein cognate of genomic data. This review gives a brief overview of the modern proteomic technology. In addition to general applications of proteomics, we highlight its contribution to studying the physiology of different ocular tissues. We also summarise the published proteomic literature in the broad context of ophthalmic diseases, such as cataract, age‐related maculopathy, diabetic retinopathy, glaucoma and myopia. The proteomic technology is a useful research tool and it will continue to advance our understanding of a variety of molecular processes in ocular tissues and diseases.     

眼蛋白质组学

蛋白质组学是对一个细胞、组织或器官的基因组表达的所有蛋白质分析研究，是新世纪生命科学研究的前沿以及功能基因组学的研究重心。蛋白质组学为研究眼部细胞生命活动规律和眼科疾病病变机制提供了一个新的研究平台。本文就蛋白质组学在眼科的应用作一综述。眼科学报2003；19：67-70     

A proteomics view of the molecular mechanisms and biomarkers of glaucomatous neurodegeneration

Despite improving understanding of glaucoma, key molecular players of neurodegeneration that can be targeted for treatment of glaucoma, or molecular biomarkers that can be useful for clinical testing, remain unclear. Proteomics technology offers a powerful toolbox to accomplish these important goals of the glaucoma research and is increasingly being applied to identify molecular mechanisms and biomarkers of glaucoma. Recent studies of glaucoma using proteomics analysis techniques have resulted in the lists of differentially expressed proteins in human glaucoma and animal models. The global analysis of protein expression in glaucoma has been followed by cell-specific proteome analysis of retinal ganglion cells and astrocytes. The proteomics data have also guided targeted studies to identify post-translational modifications and protein–protein interactions during glaucomatous neurodegeneration. In addition, recent applications of proteomics have provided a number of potential biomarker candidates. Proteomics technology holds great promise to move glaucoma research forward toward new treatment strategies and biomarker discovery. By reviewing the major proteomics approaches and their applications in the field of glaucoma, this article highlights the power of proteomics in translational and clinical research related to glaucoma and also provides a framework for future research to functionally test the importance of specific molecular pathways and validate candidate biomarkers.     

蛋白质组学及其在增生性玻璃体视网膜病变中的应用进展

蛋白质组学是研究特定时间或特定条件下一个细胞、组织或有机体所有蛋白质表达情况及其动态变化的科学,是在蛋白质水平上对生命体动态的、整体的研究。目前蛋白质组学已广泛应用于生命科学的各个领域。但在眼科的研究刚刚起步,发展尚不完全。现就蛋白质组学在增生性玻璃体视网膜病变中的应用进展做一综述。     

视网膜蛋白质组的研究进展

蛋白质组学是对由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质视为一个整体进行研究,是后基因时代的生命科学研究的重心。蛋白质组学技术为研究视网膜生理活动规律和疾病病变机制提供了一个新的研究平台。我们就蛋白质组学在视网膜领域的应用作一综述。     

增生性玻璃体视网膜病变及蛋白质组学研究

增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是一种复杂的多因素作用的致盲性眼病,与视网膜脱离、糖尿病视网膜病变（DR）等疾病密切相关。蛋白质组学是研究细胞或机体中全部蛋白质组成及其变化规律的科学,并能在大分子水平获得对疾病的发病机制和过程等方面新的认识。对PVR的发病机制及其在蛋白质组学方面的研究进展进行综述。     

蛋白质组学在眼疾病中的应用进展

蛋白质组学是研究细胞、组织和器官内所有蛋白质的组成及其动态变化的科学,是在蛋白质水平上定量的、动态的、整体的研究生物体,可以从更深层次上获得对细胞生理和生物化学过程、调控网络以及疾病过程的广泛而完整的认识。蛋白质组学在眼科尚处于起步阶段,现就蛋白质组学在眼科疾病中的应用进展作一综述。     

三氯乙酸/丙酮蛋白质提取法在白内障晶状体蛋白提取中的应用

目的:比较不同蛋白质提取方法在白内障晶状体蛋白提取中的效果,寻找适合白内障晶状体蛋白质组学研究的蛋白质提取方法。方法:采用裂解液溶解白内障晶状体组织样本,超声裂解离心后分别采用三氯乙酸/丙酮法和ReadyPrep 2D Cleanup Kit对晶状体蛋白样本进行提取、二维电泳,并对电泳后凝胶进行染色、图像采集和图像分析。结果:在2-DE图谱上蛋白斑点的相对分子量在14~97.4kDa之间,等电点在5~9之间,其中高丰度蛋白相对分子量处于20~31kDa范围内,低丰度蛋白斑点相对分子量处于31~43kDa范围内。经TCA/丙酮沉淀法处理的含有透明质酸钠白内障晶状体蛋白样本,二维电泳凝胶图谱背景较清晰,蛋白斑点较清楚,共检测到35~40个左右的蛋白斑点。结论:在人白内障晶状体蛋白质组学研究中,TCA/丙酮法具有较好的纯化效果,为人晶状体组织蛋白质组学的质谱分析研究提供了可靠的二维电泳凝胶图谱。     

Dry eye disease and proteomics

Dry eye disease (DED) is a highly prevalent disease worldwide mostly associated with age, though other factors such as screen use and contact lens wear explain why it is increasingly diagnosed in younger people. DED also disproportionately affects women. Symptoms include eye dryness, burning, pain and sensitivity to light that can significantly affect quality of life. This condition may progress to cause lasting damage to the ocular surface if left untreated. Currently, diagnosis is through assessment of signs and symptoms determined by clinical tests and questionnaires. However, there is considerable overlap between normal and DED result distributions of currently available metrics as signs and symptoms fluctuate over time and with disease severity.Importantly, the non-targeted approach of proteomics means that significant changes in novel proteins may be discovered. Proteomics is a powerful tool that has been applied to the field of DED to understand changes at a biochemical level, uncover new disease biomarkers and determine the success of clinical interventions. While individual proteins may not be sensitive enough when used as single biomarkers, proteomics opens the possibility to uncover several relevant proteins that may be combined in a panel to provide more accurate diagnostic value i.e. parallel testing. In this review we discuss the use of proteomics in DED research and the potential for application of proteomic results in the clinic. We also identify shortcomings and future avenues for research.