磷脂酶A2研究新进展

磷脂酶AZ（PhosphohPaseAZEC3．豆．14,简称PL入）是一类热稳定、亲脂而依赖钙的蛋白酶,因其特异的化学结构和复杂的生理功能,使其成为研究脂代谢、生物膜磷脂结构和酶系、脂蛋白间的相互作用,以及凝血和溶血机制等方面的重要工具酶卜1。PL人存在动物各组织的细胞膜和线粒体膜上。它除了能使甘油磷脂第二位脂酸键水解,生成溶血磷脂和脂肪酸（大多为花生四烯酸）,且在激素信号传递、生物膜的稳衡过程、脂质介体（如血小板激活因子）的产生等生物学过程中发挥着重要作用卜］。因此,pL人业已成为生物界和医学界令人瞩目的研究热点…     

中华眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2的提纯

目的:探索从中华眼镜蛇蛇毒中快速分离提纯磷脂酶A2(PLA2)的方法方法:应用ARG-CY仿生配基,用亲和层析一步法从中华眼镜蛇蛇毒粗毒中纯化PLA2,用SDS-PAGE进行纯度鉴定及相对分子质量测定,并测定其溶血活性.结果:纯化后获得的PLA2电泳图谱呈单一区带,相对分子质量为14 000,活性为182 μmol/(min·mg).产物具有溶血活性.结论:仿生亲和层析法提纯LPA2操作简单,纯度高,为一高效实用的方法.     

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化和性质研究

目的广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化和性质研究.方法分离纯化采用SephadexG-75,CM-SepharoseCL-6B和DEAE-SephadexA-50柱层析法;通过电泳,磷脂酶A2活力测定,氨基酸组成测定,N端序列分析及药理实验进行性质研究.结果从广西眼镜王蛇毒中分离到一种酸性的磷脂酶A2(命名为APLA2-1),相对分子质量为14600u,等电点5.4,酶的比活力为108μmol/mg*min-1,N端序列为NLIQFGNMIQCTVPGF.它对实验用小白鼠有致死性(LD506.6mg/kg),具有肌毒性,心脏毒性,抗血小板聚集活性,能诱导水肿形成.结论APLA2-1生化和药理性质的研究,为阐明蛇毒PLA2结构和功能关系,及蛇伤中毒机制,打下了良好基础.     

蛇毒Ⅰ型和Ⅱ型磷脂酶A2基因密码使用的比较和分析

目的：通过比较和分析蛇毒中Ⅰ型和Ⅱ型磷脂酶Az（phospholipaseAz,PLAz）基因编码的特点,了解蛇毒中两类PLA2分子,圭物学的信息。方法：从国际基因库中搜寻所有蛇毒PLA：基因信息（mRNA）,对于符合研究条件的基因,利用CodonW分析软件和计算机进行分析,计算出两类PLA2的同义密码相对运用值（RelativeSynonymousCodonUsage,RSCU）,编码区鸟嘌呤／胞嘧啶（GC）含量和GC在三联体密码子中第3位置上所占的百分比（GC3S）含量,以及4种类型的碱基的含量。结果：眼镜蛇科Ⅰ型PLA2和蝰蛇科Ⅱ型PLA2基因编码区GC含量明显不同,蝰蛇科Ⅱ型PLAz的GC含量和GC3S含量分别为53．05％和65．53％,明显高于眼镜蛇科的Ⅰ型PLA。的49．48％和49．68％;RSCU值显示眼镜蛇科Ⅰ型PLA2对29个密码子具有偏好性,蝰蛇科Ⅱ型的有27个密码子,两类PLA2偏好使用的密码有明显不同;蝰蛇科Ⅱ型PLAz的RSCU相对较高;在可以选择密码子的19个氨基酸中,两类PLA。在12个氨基酸有着不同的偏好性;终止密码子具有特殊的偏好性,RSCU值均很高。结论：眼镜蛇科和蝰蛇科的两类PLA2基因在密码子使用上有明显不同的偏好性,蝰蛇科的PLAz偏好程度更强些,这可能与蝰蛇科的PLAz基因位于Gc丰富的区域有关。     

长白山白眉蝮蛇毒磷脂酶A2的提纯

应用ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换层析法，从长白山白眉蝮蛇毒中分离出２个具有磷旨酶Ａ２（ＰｈｏｓｐｈｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）活性的蛋白质组分。其中之一再经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＡ－５２离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤进一步纯化，经两种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定均为单一条带，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤呈单一对称的峰形。     

磷脂酶A2-ⅡA在直肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨磷脂酶A2-ⅡA(PLA2-ⅡA)在直肠癌患者中的表达和临床意义.方法:采用免疫组化检测45例直肠癌标本、34例基本正常的直肠黏膜、32例直肠腺瘤组织中PLA2-ⅡA的表达水平,并观察PLA2-ⅡA表达水平与临床病理特征之间的关系.结果:直肠癌组PLA2-ⅡA表达水平明显高于直肠腺瘤组、正常组,差异有统计学意义(P＜0.05);直肠腺瘤组PLA2-ⅡA表达水平高于正常组,但差异无统计学意义(P=0.677);PLA2-ⅡA阳性表达水平随着肿瘤浸润程度加重、分化程度降低、TNM分期升高、脉管侵犯而明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PLA2-ⅡA在直肠癌癌组织中高表达,与肿瘤浸润程度、分化程度、TNM分期、脉管是否侵犯、神经束是否侵犯有关,其可能在直肠癌的发生、发展中起重要的作用.     

磷脂酶A2及其功能概述

本文结合近年采的一些实验报道，论述了磷脂酶A2(Phospholipase A2，PLA2)来源、分类，理化性质及结构特点，以动物为例分析了其生理功能，在科学研究和实际生产中的广泛运用，以及应用分子生物学方法研究这类酶的进展，以为其进一步的研究和应用提供基本资料。     

ⅡA分泌型磷脂酶A_2与动脉粥样硬化的相关性研究

ⅡA分泌型磷脂酶A2(sPLA2-ⅡA)是磷脂酶超家族中的一员,主要是通过介导炎性反应,产生大量脂类介质参与动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程,其表达受白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α等炎性因子的调节。sPLA2-ⅡA可能是通过有丝分裂原激活蛋白激酶等相关信号通路导致AS的发生。在血管平滑肌细胞表面存在sPLA2-ⅡA致AS作用的受体,阻断这些受体后,致AS的炎性因子表达减少。这些研究可能为AS诊疗提供新的思路。     

ⅡA分泌型磷脂酶A2与缺血性脑卒中的相关性研究

ⅡA分泌型磷脂酶A2(ⅡA-sPLA2)是来源于正常动脉壁平滑肌细胞的一种既能分解磷脂、又在血液循环和动脉壁均有促动脉粥样硬化(AS)作用的磷脂酶,可修饰及水解脂蛋白,产生大量脂质介质及引发一系列慢性炎症反应,最终使细胞内脂类蓄积,导致AS.抑制ⅡA-sPLA2活性可能有抗AS的效应.在缺血性卒中的发病风险及预防性治疗上,ⅡA-sPLA2是一个新的有待研究的因子,本文就ⅡA-sPLA2与缺血性脑卒中的关系进行综述.     

蛇毒磷脂酶A2的两种测定方法比较

蛇毒富含磷脂酶Ａ２，磷脂酶Ａ２具有许多重要的生理功用和广泛的药理学效应。测定磷脂酶Ａ２的活性由于采用的测定方法不同，差别很大，本文用酸碱滴定和电位滴定方法对长白山白眉蝮蛇毒磷脂酶Ａ２进行测定，并对两种方法的准确度、重复性进行了比较。１　材料与方法１．１　材料：长白山白眉蝮蛇毒由本室提供；ＤＩ－２型自动电位滴定仪为上海第二分析仪器厂产品；所用化学试剂均为国产分析纯。１．２　方法１．２．１　底物溶液的配制：称取卵磷脂５００ｍｇ，溶于１０ｍｌ乙醚中，加少量水混匀。５０℃保温２０ｍｉｎ，冷至室温后加入１…     

乳腺癌患者血清磷脂酶A2活性变化的研究

目的探讨乳腺癌患者血清磷脂酶A2(PLA2)活性的变化及其在临床上的应用价值.方法采用[3H]-油酸标记生物膜法连续监测良、恶性乳腺肿瘤患者和健康人血清PLA2活性.结果46例乳腺癌患者血清PLA2活性为(25.7±4.2)%,健康人活性为(8.4±2.0)%,二者间差异显著(P＜0.05);良性乳腺瘤患者PLA2活性为(11.6±2.3)%,与健康人比较差异不显著(P＞0.05).对患者PLA2动态观察结果表明,乳腺癌治疗后与治疗前比较PLA2活性差异非常显著(P＜0.01).结论乳腺癌患者血清PLA2活性的变化,对良、恶性乳腺肿瘤的鉴别及疗效观察均有一定的临床意义.     

胰磷脂酶A2对血脑屏障作用的实验研究

研究了胰磷脂酶Ａ２对大鼠血脑屏障通透性的影响，同时用蛇毒ＰＬＡ２作比较；用伊文氏蓝示踪，肉眼和切片观察脑组织ＥＢ蓝染情况，作为ＢＢＢ通透性增高的一般指示剂。结果表明，当血中ＰＬＡ２达一定浓度、作用一定时间后动物脑组织出现ＥＢ颗粒，且其密度和范围随该酶浓度的增加而不断扩大、加深，对照组动物脑组织则未见蓝染；同样浓度的蛇毒ＰＬＡ２作用强于胰ＰＬＡ２。     

磷脂酶A2抗菌作用的研究进展

磷脂酶A2(PhospholipaseA2,EC3.1.1.4),简称PLA2,是一种重要代谢和调节酶类,它广泛的存在于哺乳动物的细胞和体液以及蛇毒、蜂毒中。从1900年研究胰液和蛇毒中的PLA2开始到现在,已近百年[1],但它们在生理过程中的一些重要作用直到近二十年才逐渐被认识。随着研究的不断深入,新的种类、新的作用不断被发现,使PLA2的研究越来越受到人们的关注。近几年来的一个重要发现是PLA2在宿主防御细菌感染中的作用-直接的杀菌作用[2,3]。1　PLA2的类型和一般作用　　目前发现和提纯的PLA2已超过100种[4],根据PLA2氨基酸数目、序列、结构特点和…     

绞窄性肠梗阻血清磷脂酶A2的变化

目的：探讨不同程度肠梗阻与血清磷脂酶A2(PLA2)激活间的关系。方法：采用ELISA法检测不同类型、不同阶段肠梗阻患者血清中PLA2的浓度,并经统计学分析两者之间的关系。结果：血清中PLA2浓度随着肠梗阻程度的增加而升高。肠梗阻患者血清中PLA2浓度明显高于对照组［(1.22±0.66)mg/L vs (0.17 ±0.02 )mg/L, t=9.05,P＜0.001］。绞窄性肠梗阻患者血清中PLA2浓度明显高于单纯性肠梗阻组［(1.72±0.36)mg/L vs (0.57±0.24)mg/L, t=17.89,P＜0.001］。在绞窄性肠梗阻组中,发生肠坏死患者血清中的PLA2浓度与肠缺血组比较,差异也有统计学意义［(1.96±0.14)mg/L vs (1.54±0.37)mg/L,t=5.16,P＜0.001］。结论：血清PLA2对早期判断是否出现绞窄性肠梗阻有积极的意义,可为早期手术治疗提供参考。     

脂蛋白相关磷脂酶A2与脑梗死的关系的研究

动脉粥样硬化是脑梗死的主要病理生理基础,脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp- PLA2)活性是动脉粥样硬化新的炎性反应标志物,血循环中的Lp-PLA2的活性和浓度升高与后来的血管性事件的发生是密切相关的,急性脑梗死患者血浆Lp-PLA2水平升高,其与神经功能缺损程度正相关.     

分泌型磷脂酶A2非酶活性依赖的神经元保护作用

[目的]鉴定中华眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒中的神经保护因子，研究其抗神经元凋亡作用机制。[方法]连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子。用Edman N-末端测序法取得蛋白质一级序列，BLAST软件进行蛋白质鉴定。使用低钾诱导体外培养小脑颗粒神经元凋亡模型，研究其神经元保护作用。[结果]从中华眼镜蛇蛇毒中分离出一种，可浓度依赖性地抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡。神经保护因子(Cobra venom neu-ronal protective factor，CVNPF)此神经保护因子N-末端20个氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSRSWWD-，BLAST序列同源比对确定该保护因子为中华眼镜蛇分泌型磷脂酶A2(secreted phospholipase A2，sPLA2)。进一步发现来源于蜂毒、莫桑比克眼镜蛇(Njaja naja mossambica)蛇毒、西部菱斑响尾蛇(Crotalus atroxalso)蛇毒的sPLA2也对小脑颗粒神经元具有保护作用；其作用不为磷脂酶A2酶活性抑制剂7，7-Dimethyleicosadienoic acid(DEDA)和Manoalide阻断。[结论]CVNPF属于sPLA2。多种sPLA2可以抗神经元凋亡，其保护机制与磷脂酶A2的酶活性无关。     

一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析

目的：克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA，为研究其结构和功能的关系。并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础。方法：从五步蛇蛇腺中提取了总RNA，通过反转录合成第一链cDNA，经PCR扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段，并将其连接到质粒载体扩增，然后进行DNA测序。结果：成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段。此片段全长794bp，包括编码部分的全长为777bp。推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸，其中包括18个氨基酸的信号肽，6个氨基权的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序。TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比，蛋白质一级结构具有较高的同源性。结论：从五步蛇中成功克隆出一 种新的类凝血酶cDNA，并确定了它的DNA顺序。     

磷脂酶A2抑制剂的研究：粉防己碱对U937细胞磷脂酶A2和前？…

探讨粉防己碱对培养的Ｕ９３７我花生四烯酸布系统产生前殂朱素的影响。以Ｕ９３７细胞株为模型加入内毒素处理，以及粉防己碱预处理后再加入ＬＰＳ处理，观察Ⅱ－型磷脂酶Ａ２、胞液型磷脂酶Ａ２、和环氧合酶－２以及前列腺素Ｅ２的变化。