P物质受体在人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控

目的考察P物质受体(Neurokinin1R,NK1R)在正常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特征。方法培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK1R在两种细胞中的表达;采用RTPCR方法检测NK1R在两种细胞mRNA水平的表达特征,并采用流式细胞术定量检测在不同刺激因素及药物作用下两种细胞中NK1R的表达调控情况。结果NK1R在HaCaT细胞及真皮成纤维细胞中均有表达,阳性部位位于细胞膜及细胞质。NK1RmRNA在HaCaT细胞上的表达水平要高于在真皮成纤维细胞上的表达。P物质和IFNγ可以上调NK1R在两种细胞上的表达,而LPS抑制了NK1R的表达;抗组胺药盐酸西替利嗪和P物质受体特异性拮抗剂SpantideI可以降低两种细胞上NK1R的表达。结论皮肤角质形成细胞和真皮成纤维细胞在细胞、蛋白及mRNA水平均有NK1R的表达,而且这种表达可被过敏炎症因子调控,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与了皮肤免疫调控,神经肽P物质可能在皮肤过敏性炎症中起重要作用。     

盐酸西替利嗪对IgE诱导的皮肤三相过敏反应 P物质表达的影响

目的研究盐酸西替利嗪对IgE诱导的皮肤三相过敏反应中神经肽P物质表达的影响。方法采用BALB/c小鼠尾静脉注射anti-DNP IgE单克隆抗体，以2,4-二硝基氟苯(DNFB)激发，建立皮肤三相过敏模型。口服给予不同剂量的盐酸西替利嗪，于激发后特定时间点取小鼠双耳，进行病理学检查与免疫组化分析。采用放射免疫法测定皮肤中P物质的含量变化。结果BALB/c小鼠耳皮肤在DNFB激发后1 h,24 h,7 d分别出现速发相(IPR)、迟发相(LPR)、超迟发相(vLPR)三相过敏反应，P物质在三相过敏反应中的表达逐渐增强。高、低剂量的盐酸西替利嗪均能显著抑制皮肤速发相反应引起的耳肿胀，而对超迟发相反应无明显影响，且盐酸西替利嗪可降低皮肤三相过敏反应中P物质的含量。结论神经肽P物质参与了皮肤过敏反应的病理过程，盐酸西替利嗪抑制P物质的表达可能是其抗过敏的作用机制之一。     

西替利嗪抑制组胺诱导角质形成细胞IL-8表达

目的:考察西替利嗪对组胺诱导角质形成细胞系HaCaT细胞IL-8表达的影响。方法:采用RT-PCR方法研究组胺H1受体mRNA表达,组胺及西替利嗪对IL-8mRNA表达的调节作用,并用ELISA法对分泌的IL-8进行定量。结果:HaCaT细胞有组胺H1受体mRNA表达,(1×10-5)mol/L组胺刺激细胞5h,显著增强IL-8mRNA表达;(1×10-6)-(1×10-4)mol/L组胺作用细胞24h则显著地诱导了IL-8产生;1×10-6、1×10-5mol/L西替利嗪抑制了组胺的诱导作用。结论:西替利嗪可通过抑制组胺诱导HaCaT细胞IL-8表达而具有H1受体依赖的抗炎作用。     

西替利嗪干预组胺诱导的真皮成纤维细胞IL-8和MCP-1产生

目的　探讨真皮成纤维细胞组胺H1 受体(histamineH1 receptor,H1R)表达及西替利嗪(cetirizine,CET)对组胺(histamine,HIS)诱导炎症因子的干预作用,寻找CET抗皮肤过敏炎症的作用靶点。方法　采用RT- PCR和免疫组化技术检测真皮成纤维细胞H1RmRNA和蛋白表达;用HIS处理细胞为模型组,ELISA检测HIS诱导IL 8和MCP -1的蛋白分泌及CET的干预作用。结果　真皮成纤维细胞有H1RmRNA和蛋白表达; 10-6 ~10-4 mol·L-1 HIS显著地诱导了真皮成纤维细胞IL -8蛋白分泌(P<0 .05vs对照组),10-5 mol·L-1 HIS明显地诱导了MCP 1分泌(P<0 .01vs对照组),加入10-6、10-5 mol·L-1 CET共同培养24h,抑制了HIS诱导的IL- 8和MCP -1表达(P<0 .05vs模型组)。结论　CET可能通过抑制真皮成纤维细胞趋化因子的表达而发挥抗皮肤过敏炎症作用。     

丹皮酚对TNF-α诱导真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响

目的通过研究丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响,探讨丹皮酚抗皮肤炎症的可能机制。方法采用RT-PCR法考察正常人真皮成纤维细胞中MMP-9 mRNA表达情况以及丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA表达的影响。采用ELISA法测定丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞表达IL-1β、IL-6及IL-8的影响。结果MMP-9在正常真皮成纤维细胞上表达极弱,TNF-α可以诱导MMP-9 mRNA的表达,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导引起的MMP-9 mRNA表达的上调。成纤维细胞可分泌少量的IL-1β、IL-6及IL-8,TNF-α可以明显增加成纤维细胞IL-1β和IL-8的分泌量,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导的IL-1β和IL-8的产生,但对IL-6的分泌无影响。结论丹皮酚可以抑制TNF-α诱导真皮成纤维细胞引起的MMP-9 mRNA及炎症因子IL-1β和IL-8表达水平的上调。     

美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移影响的初步研究

目的:考察美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移的影响,探讨其在创面修复中的作用机制。方法:采用酶消化法体外分离培养小鼠真皮成纤维细胞,建立体外细胞划痕创伤模型,加入0,1,5,20mg生药.mL-1提取物,培养24,48h,观察细胞迁移。结果:培养24h后,0,1,5,20mg生药.mL-1提取物各组细胞迁移率分别为:42.31%±4.41%、87.29±9.23%、72.22±6.59%、32.18±3.45%,1,5mg生药.mL-1提取物可明显促进细胞迁移(P0.01)。结论:美洲大蠊提取物可促进创面的愈合,其机制与促进参与创面修复的成纤维细胞迁移有关。     

不同来源胶原蛋白对人真皮成纤维细胞生长的影响

目的:探讨不同来源胶原蛋白对体外培养人真皮成纤维细胞(HDF-a细胞)生长的影响.方法:用不同浓度、不同来源胶原蛋白的培养基培养HDF-a细胞,考察样品对体外HDF-a细胞生长的影响.结果:12批不同来源胶原蛋白中,4批样品能抑制HDF-a细胞生长,其他8批样品则能促进HDF-a细胞的生长.结论:胶原蛋白对HDF-a细...     

盐酸西替利嗪片的有关物质和含量测定方法研究

随着现代工业的发展,空气污染日益严重,外界有害物质如种种有害气体、粉尘、致敏微生物和致敏原直接吸入肺部,使呼吸系统疾病(特别是过敏性鼻炎和哮喘)发病率和死亡率都在增加.     

苦参碱对P物质诱导HaCaT细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

目的:研究苦参碱对P物质诱导表皮角质形成细胞系HaCaT细胞表达IFN-γ和IL-10的影响。方法:采用ELISA法测定P物质诱导HaCaT细胞分泌IFN-γ和IL-10的时效关系与量效关系。以P物质刺激HaCaT细胞,加入不同剂量的苦参碱共孵育24 h,测定苦参碱对IFN-γ和IL-10表达的影响。结果:以1×10-8mol/L P物质刺激HaCaT细胞24 h,可以显著增加HaCaT细胞IFN-γ和IL-10的分泌量,不同浓度的苦参碱均可以促进HaCaT细胞分泌IFN-γ,其中50μg/mL和100μg/mL的苦参碱均可以显著增加IFN-γ的分泌量;但苦参碱对P物质诱导的IL-10的分泌无显著影响。结论:苦参碱可能通过促进抗炎因子IFN-γ的分泌而发挥抗皮肤变态作用。     

西替利嗪对皮肤细胞炎症中单核趋化蛋白-1表达的干预作用

目的考察西替利嗪(CET)对皮肤细胞炎症模型中单核趋化蛋白-1(MCP-1)表达的干预作用。方法组胺(HIS)和IFN-γ刺激真皮成纤维细胞(DF)和人角质形成细胞株HaCaT细胞，采用RT-PCR和ELISA法考察两种细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较，HIS(10 μmol·L^-1)和IFN-γ(20 ng·mL^-1)组显著上调两种细胞(DF和HaCaT) MCP-1 mRNA表达，同时分别使DF的MCP-1蛋白分泌量增加3.5倍和8.4倍，对HaCaT细胞也有相似的影响趋势； CET (1和10 μmol·L^-1) 显著地抑制了它们对细胞MCP-1蛋白产生的增强作用。结论CET可能通过抑制MCP-1的表达而发挥抗皮肤炎症作用。     

Effect of matrine on the expression of substance P receptor and inflammatory cytokines production in human skin keratinocytes and fibroblasts

Matrine is a kind of alkaloid found in certain Sophora plants, which has been extensively used in China for the treatment of viral hepatitis, cancer, cardiac diseases and skin diseases (such as atopic dermatitis and eczema). It also has been confirmed that substance P (SP) and its receptor (neurokinin-1 receptor, NK-1R) are involved in the pathogenesis of inflammatory skin disorders. So the present study was designed to investigate the effect of matrine on the expression of NK-1R and cytokines production induced by SP in HaCaT cells (a human epidermal keratinocyte cell line) and dermal fibroblasts. In addition, cell viability was also evaluated. The results showed that matrine inhibited the expression of NK-1R in HaCaT cells and fibroblasts. SP induced the production of interleukin (IL)-1beta, IL-8, interferon (IFN)-gamma, and monocyte chemotactic protein (MCP)-1 in both cell types. Matrine 5-100 microg/mL had little effect on cell viability. It inhibited SP-induced IL-1beta, IL-8 and MCP-1 production in HaCaT cells and fibroblasts, while it increased the production of IFN-gamma in HaCaT cells. Both SP and matrine had no effect on the secretion of IL-6. These findings suggest that matrine may have potential treatment function on SP related cutaneous inflammation by inhibition of the expression of substance P receptor and regulation of the production of inflammatory cytokines.     

甲壳胺对盐酸西替利嗪胶囊药代动力学和生物利用度的影响

目的测定甲壳胺(辅料)对盐酸西替利嗪胶囊(抗过敏药)的药代动力学和生物利用度的影响。方法18名健康志愿者随机交叉单剂量空腹口服盐酸西替利嗪市售片20mg和以甲壳胺为辅料的盐酸西替利嗪胶囊20mg后,用高效液相色谱法研究药物在体内的经时过程,并计算主要药代动力学参数。结果口服2种制剂20mg后,Cmax分别为1302.1、923.3ng·mL-1;t1/2分别为8.27、7.63h;tmax分别为0.82、1.21h;AUC0-t分别为(11.46±1.21)、(7.98±1.17)mg·h·mL-1;AUC0-∞分别为(12.45±1.37)、(8.24±1.32)mg.h·mL-1;其相对生物利用度为150.1%。结论甲壳胺可显著提高盐酸西替利嗪胶囊的生物利用度,明显改善药物的吸收。     

高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪血药浓度及其药动学研究

目的建立高效液相色谱测定血浆中盐酸西替利嗪浓度的方法,并研究其药动学行为。方法18名受试者单剂量口服盐酸西替利嗪10mg后,采用HPLC法测定血药浓度,应用AIC法判别房室模型,并利用DAS软件计算药动学参数。结果血浆中西替利嗪在20．0～1000ng·mL^-1。线性关系良好（r=0．9981）,平均回收率为103．4％,日内RSD≤7．79％．日间RSD≤12．8％。最佳房室模型为二室模型（Wi=1／C^2,AIC=-5．565）,单剂量口服10mg盐酸西替利嗪后的药物动力学参数α为（2．73±7．66）h,β为（0．076±0．049）h,tmax为（0．88±0．34）h,t1/2β为（22．3±26．4）h,Cmax为（268±67．8）ng·mL^-1,AUC036为（1598±395）ng·h·mL^-1,AUC0为（1786±427）ng·h·mL^-1。结论该分析方法简单、快速、准确、精密度高,适用于人血浆中盐酸西替利嗪浓度的测定。盐酸西替利嗪的血浆药动学参数与国内外文献报道基本一致。     

盐酸西替利嗪片的溶出度考察

目的 :考察国产与进口盐酸西替利嗪片的体外溶出度 ,为其质量控制提供参考。方法 :采用转篮法测定溶出度 ,用威布尔 (Weibull)分布模型拟合溶出曲线 ,并对溶出参数m、T50 、Td 等采用方差分析及t检验进行统计。结果 :国产与进口盐酸西替利嗪片的溶出参数差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;国产片 3批号间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,进口片 2批号间差异无显著性(P >0 .0 5 )。结论 :进口片的体外溶出度较国产片为优。国产片及进口片制剂工艺均较稳定     

LC-ESI-MS/MS法测定人血浆中西替利嗪浓度及其咀嚼片人体生物等效性评价

目的建立测定人血浆中西替利嗪浓度的方法,对国产盐酸西替利嗪咀嚼片和进口普通片进行生物等效性研究。方法18名健康男性志愿者按2×2交叉试验方案设计,分别口服受试制剂和参比制剂各10 mg,并采集36 h内动态血标本;采用LC-ESI-MS/MS法测定血浆中西替利嗪浓度,计算药动学参数,并判定2种制剂是否生物等效。结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数ρ_(max)分别为(320.51±44.13)μg·L~(-1)和(325.59±40.02)μg·L~(-1),t_(max)均为(1.3±0.3)h,AUC_(0→36h)分别为(2 811.1±346.3)μg·h·L~(-1)和(2 862.9±427.3)μg·h·L~(-1),AUC_(0→∞)分别为(2 915.3±390.3)μg·h·L~(-1)和(2 959.1±459.3)μg·h·L~(-1),t(1/2)(ke)分别为(7.20±1.44)h和(6.95±1.20)h,两制剂主要药动学参数经对数转换后进行方差分析及双单侧t检验,并计算90%置信区间,表明两种制剂生物等效,受试制剂的人体生物利用度为(99.04±10.59)%。结论国产盐酸西替利嗪咀嚼片和其进口普通片生物等效。     

盐酸西替利嗪凝胶剂的制备及体外透皮特性

目的：制备盐酸西替利嗪凝胶剂,研究其体外透皮特性。方法：以卡波姆940为辅料制备西替利嗪凝胶剂,采用改良Franz扩散池,以离体大鼠皮肤为透皮屏障,采用HPLC法测定西替利嗪的透皮行为。结果：西替利嗪凝胶体外透皮释药方程为Q=110．03t＋17．17（r=0．99）,透皮速率为110．03μg/（cm^2·h）。结论：西替利嗪凝胶具有良好的透皮效果,其体外经皮渗透符合一级动力学过程。