低氧肺微血管内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞的作用

慢性阻塞做肺病作为临床上的常见病，严重危害人们健康，对其病理进程已有多年研究，认识到低氧可以导致肺血管平滑肌细胞增生，肺腺泡及微血管的构型改建。既往人们注意到肺内皮细胞可以分泌一些物质调节一滑肌细胞增生。关于肺做血管内皮细胞（pulmonarymicrovascularendotheliacell，PMEC低氧状态下与平滑肌细胞的关系研究甚少，然而，肺做血管内皮细胞却是最早感受低氧的细胞之一。本研究通过离休培养的大鼠PMH：和大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecellPASMC），从细胞相互作用的角度研究低氧对PASMC的作用…     

缺氧内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞表型的影响

用细胞培养和形态定量分析方法观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞表型的影响。结果显示，缺氧性内皮细胞条件培养液组肺动脉平滑肌细胞的二倍体细胞和α－ｓｍ－ａｃｔｉｎ含量均少于常氧性内皮细胞条件培养液组（Ｐ＜０．０５），尤以肌丝成份减少最明显；粗面内质网和线粒体却显著增多。而直接缺氧组与常氧组无明显差异。提示：缺氧可促使内皮细胞产生和释放某种促平滑肌细胞表型转化的物质或因子，从而改变了肺动脉管壁细胞之间的正常调控关系，导致平滑肌细胞肥大，合成细胞外基质增多。     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞合成胶原的影响

本实验采用胶原酶消化法分离、培养兔主动脉内皮细胞(EC)及平滑肌细胞(SMC),以[~3H]-脯氨酸掺入SMC合成的[~3H]-羟脯氨酸中的量作为测定胶原的指标,观察了兔主动脉内皮细胞条件培养液(EC-CM)对动脉SMC合成胶原的影响,结果发现融合的EC-CM能促进SMC的胶原合成,但SMC数无明显变化;1:2稀释的EC-CM促进SMC合成胶原的作用最大。可见EC通过促进SMC的胶原合成而参与了动脉粥样硬化过程。     

缺氧对肺微血管内皮细胞释放ET-1的影响

缺氧对肺微血管内皮细胞释放ＥＴ－１的影响第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所（重庆６３００３７）谢崧钱桂生杨晓静目的：本文研究了肺微血管内皮细胞缺氧条件下对ＥＴ－１的影响。方法：取第三代汇合成细胞单层的大鼠肺微血管内皮细胞（ＲＰＭＥＣｓ）随机分为常氧组...     

爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞损伤作用的病理学观察

目的 :通过观察爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞的损伤 ,了解伤后微循环功能变化的病理学基础。方法 :采用爆炸冲击波对兔损伤动物模型以及对培养肺微血管内皮细胞损伤体外模型 ,从光镜、电镜水平上观察内皮细胞病理学变化。结果 :光镜下的主要表现为肺泡出血、肺泡隔断裂、肺大泡形成以及肺间质水肿 ,电镜下可见肺微血管内皮细胞肿胀致使血管腔狭窄 ,内皮细胞间裂隙增宽 ,核肿胀、异染色质增多 ,以及线粒体肿胀、嵴排列混乱等病理变化。体外实验主要表现为爆炸冲击波对培养的肺微血管内皮细胞的剥脱性损伤。结论 :爆炸性冲击伤后肺微内皮细胞的损伤严重且广泛 ,是伤后肺微血管通透性变化与肺微循环功能障碍发生的重要病理基础。     

缺氧对培养的肺动脉内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞作用的初步研究

作者建立了小牛肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉乎滑肌细胞(PASM)体外培养细胞系,观察了缺氧条件下细胞生长特性和蛋白质含量的变化,直接测定了缺氧时PAEC的血管紧张素转换酶(ACE)的活性,动态观察了缺氧时PAEC和PASM内钙释放和cAMP含量的改变。主要结果和结论如下:1.体外培养的PAEC和PASM具有不同的生长特性。PAEC的生长代谢较PASM旺盛。培养的PAEC和PASM都能在缺氧状态     

缺氧时肺动脉内皮细胞对平滑肌细胞胞浆游离钙的影响

本文应用Ca~(2 ) 荧光探针Fura-2/AM,研究猪肺动脉内皮细胞条件培养液对猪肺动脉平滑肌细胞胞浆游离钙浓度([Ca~(2 )]_i)的影响;同时观察缺氧对肺动脉内皮细胞[Ca~(2 )]_i的直接作用。实验发现:1.常氧培养的内皮细胞培养液可使平滑肌细胞[Ca~(2 )]_i升高,而缺氧培养的内皮细胞培养液较常氧培养的内皮细胞培养液作用显     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素A_2合成酶表达的影响

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素Ａ２合成酶表达的影响同济医科大学病理生理教研室（武汉４３００３０）于江洲王迪浔本研究旨在初步探讨内皮细胞对平滑肌细胞的旁分泌调节作用。我们应用内皮细胞常氧及缺氧条件培养液分别在常氧下培养平滑肌细胞，经分子杂...     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内 …

目的：观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）于缺氧时对细胞内环核苷酸的影响。结果：ＰＡＥＣ和ＵＰＡＳＭ共培养２４ｈ，ＰＡＥＣ细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ〈０．０１），而ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ〈０．０１），二种细胞内ｃＧＭＰ含量显著增加（Ｐ〈０．０１）。缺氧对二种细胞内ｃＧＭＰ含量无显著影响，但能增加ＰＡＳＭ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ〈０．０１），降低ＰＡ     

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的保护作用

为了探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对缺氧损伤神经元的保护作用,本实验将新生的KM小鼠的皮层星形胶质细胞分离、纯化并传代培养第三代第5d后,将星形胶质细胞(Ast)条件培养液,加入到缺氧损伤的神经元细胞培养液中,观测其对缺氧神经元的存活及其合成和释放一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)和胞膜ATP酶(ATPase)的影响。结果显示:10%和20%ACM对神经元存活有明显促进作用;与对照组相比,20%ACM还有效地减少了缺氧神经元NO、LDH的生成和分泌,保护和提高了ATPase的活性。以上结果提示ACM促进缺氧神经元的存活,其机制可能与减少NO、LDH合成释放及保护细胞膜上ATPase的活性有关。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响

目的：观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）于缺氧时对细胞内环核苷酸的影响。结果：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ共培养２４ｈ，ＰＡＥＣ细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１），而ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ＜００１），二种细胞内ｃＧＭＰ含量均显著降低（Ｐ＜００１）。缺氧对二种细胞内ｃＡＭＰ含量无显著影响，但能增加ＰＡＳＭ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１），降低ＰＡＥＣ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１）。ＮＯ合酶抑制剂硝基精氨酸对二种细胞的ｃＡＭＰ含量均无显著影响，但能使常氧培养的ＰＡＥＣ和缺氧培养的ＰＡＳＭ细胞内的ｃＧＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１）。结论：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ的相互作用可引起第二信使系统传递的变化；缺氧可抑制ＰＡＥＣ的ＮＯ合酶活性而诱导ＰＡＳＭ的ＮＯ合酶活性     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响第三军医大学高原医学研究室病理生理教研室（重庆６３００３８）王培勇１刘健２于中和３许蜀闽王俊元孙秉庸血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切，二者的相互作用参与血管舒缩和...     

大鼠肺微血管内皮细胞的培养

目的建立简单有效地获取大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)的培养方法。方法从实验动物、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改进,应用W istar雄性大鼠的肺组织,进行PMVEC的原代培养并传代培养;通过倒置显微镜、扫描、透射电镜观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定。结果体外培养的大鼠PMVEC呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列,获得的血管内皮细胞纯度较高,抗Ⅷ因子阳性反应,成功建立了PMVEC的原代培养方法。结论改进的植块培养法简便、可靠,获得的PMVEC纯度高,生长状态良好,保持了内皮细胞的结构和功能,可用于其功能特性的进一步研究。     

COPD合并慢性缺氧患者肺血管对急性缺氧反应变化中肺动脉平滑肌细胞钾通道的作用

目的：以人离体肺动脉环缺氧张力变化为对象研究钾通道在缺氧性肺血管收缩（HPV）发生中的作用。 方法： 从手术室切取人肺动脉环，进行人肺动脉环张力试验，分正常对照组，单纯慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease ，COPD）组和COPD合并慢性缺氧组，分别利用相应的特异性阻断剂观察电压门控性钾通道（KV），钙离子激活的钾通道（KCa）， ATP敏感的钾通道（KATP），在缺氧性肺血管收缩（HPV）的作用。 结果： （1）3组肺动脉环在急性缺氧时血管收缩张力均增加，同时COPD＋慢性缺氧组增加百分比显著低于对照组；COPD组与对照组无显著差异。（2）4-AP阻断Kv后较阻断前，3组肺血管环缺氧张力增加幅度均显著降低（P<0.05），同时正常对照组和COPD组降低幅度明显大于慢性缺氧组。TEA阻断KCa后以及格列苯脲（glybenclamide）阻断KATP后二者较阻断前，3组肺血管环缺氧张力均显著增加（P<0.05），同时COPD＋慢性缺氧组增加的幅度明显大于正常组（分别是P<0.01和P<0.05）。 结论： （1）慢性缺氧可降低肺血管的收缩性及肺血管对急性缺氧的收缩反应；（2）Kv在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起介导作用，慢性缺氧可使此介导作用加强；KCa和KATP在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起调节作用，慢性缺氧可使此调节作用加强。     

缺氧对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞5—羟色胺转载体基因表达 …

目的：探讨无氧（０％Ｏ２＋９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）和低氧（２．５￣３％＋９％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对新生小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）５－羟色胺转载体基因表达的影响。方法：应用细胞培养，核到分子杂交技术。结果：无氧组和低氧组（１．５ｈ、３ｈ、６ｈ）ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮＡ表达显著同于常氧组（Ｐ〈０．０５），而无氧和低氧１２ｈ至４８ｈ对ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮ     

改良大鼠肺微血管内皮细胞原代培养技术及细胞鉴定

目的 改进大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养方法,并对所培养的原代细胞进行鉴定.方法 应用SD大鼠的外周肺组织,进行大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养.从动物选取、取材、肺灌注、植块贴壁、培养基及添加物的选择等方面对肺微血管内皮细胞原代培养技术方法进行改进.从细胞形态学特征,免疫组织化学检测血管内皮细胞表面标志物（CD31抗原和Ⅷ因子相关抗原的表达）,荧光显微镜观察异硫氰酸荧光标记植物凝集素与肺微血管内皮细胞特异性结合情况等方面鉴定所培养的肺微血管内皮细胞.流式细胞仪检测细胞纯度,噻唑蓝测量细胞生长曲线.结果 原代培养肺微血管内皮细胞成多角形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样生长,传代培养后可变为梭形呈漩涡样生长或聚集生长.免疫组织化学显示细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达阳性;异硫氰酸荧光标记植物凝集素结合试验阳性.细胞生长状态良好、细胞纯度达93.2％.结论 改进后的原代培养方法简便、可靠,获得的肺微血管内皮细胞污染少、纯度高,状态良好,保持了内皮细胞的结构和特性.     

缺氧内皮细胞介导肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子mRNA表达

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养的肺动脉平滑肌细胞有ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ弱表达;内皮细胞条件培养液明显增加肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达,两者分别为无血清培养组的１．８倍和１．７倍（Ｐ＜０．０１）,为常氧内皮细胞条件培养液培养组的１．４倍和１．５倍（Ｐ＜０．０１）。结论缺氧时肺动脉内皮细胞可以介导肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ的自分泌,可能在缺氧性肺动脉高压血管构形改建中具有重要作用     

缺氧对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞5-羟色胺转载体基因表达的影响

目的：探讨无氧（Ｏ％Ｏ２＋９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）和低氧（２５～３％Ｏ２＋９２％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对新生小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动肺平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）５－羟色胺转载体基因表达的影响。方法：应用细胞培养，核酸分子杂交技术。结果：无氧组和低氧组（１５ｈ、３ｈ、６ｈ）ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮＡ表达显著高于常氧组（Ｐ＜００５），而无氧和低氧１２ｈ至４８ｈ对ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮＡ表达无明显影响。无氧和低氧（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ）组ＰＡＳＭ５－羟色胺ｍＲＮＡ表达均显著高于常氧组（Ｐ＜００１），结论：推测缺氧早期通过促进ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体基因表达，加强ＰＡＥＣ对５－羟色胺的摄取和降解，随缺氧时间的延长，ＰＡＥＣ的此功能受损。缺氧ＰＡＳＭ５－羟色胺转载体基因表达的持续增加，则可能参与缺氧肺动脉高压的形成。