赤芍总苷对人黑色素瘤A375细胞迁移及侵袭活性的影响

目的观察赤芍总苷(total paeonyglucosides,TPG)对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,探讨TPG抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的相关机制。方法体外培养黑色素瘤细胞,分别加入5、15、20、25 mg/LTPG,细胞划痕实验测定迁移力;Transwell小室侵袭实验测定侵袭活性。RT-PCR和Western bolt方法检测黑色素瘤细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-2 mRNA和蛋白的表达。结果 TPG能显著抑制黑色素瘤A375细胞的迁移和侵袭,与对照组比较,TPG组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达明显下降,TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论 TPG可通过下调MMP-2、MMP-9,上调TIMP-2,调节MMP-TIMP平衡,发挥抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的作用。     

赤芍总苷联合卡铂对黑色素瘤细胞生长的抑制及相关机制研究

目的研究赤芍总苷(total paeonyglucosides,TPG)联合化疗药物卡铂(CBP)对人黑色素瘤A375细胞生长的抑制作用及相关机制。方法用TPG和CBP作用于体外培养的黑色素瘤细胞,SRB法检测药物对黑色素瘤细胞生长的作用,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21 mRNA的表达情况;Western blot法检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21蛋白表达水平。结果 CBP处理组OD值较对照组明显降低,TPG联合CBP导致OD值进一步下降(P<0.01);CBP处理组黑色素瘤细胞PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平均较对照组显著降低(P<0.01),而P21 mRNA和蛋白水平则明显升高(P<0.01);TPG联合CBP作用于黑色素瘤细胞,PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组下降更为明显;P21 mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组升高更加显著。结论 TPG和CBP联合用药效果优于CBP单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制,与降低PCNA和cyclin D表达、升高P21表达有关。     

赤芍总苷对人黑色素瘤细胞A375血管生成因子VEGF和Ang-2的影响

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素-2(Ang-2)表达的影响。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200mg/LTPG,对照组加入等量生理盐水,孵育24h、48h后,MTT方法测定生长抑制率;RT-PCR、Western blot分别测定TPG处理48h后VEGF和Ang-2 mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示TPG对黑色素瘤细胞增殖有显著抑制作用;RT-PCR、Western blot结果显示,TPG可显著抑制人黑色素瘤细胞VEGF、Ang-2 mRNA水平及蛋白水平的表达。结论 TPG具有显著的抗黑色素瘤瘤血管生成的作用,其机制可能与下调VEGF、Ang-2的表达有关。     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变.结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性.光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多.结论 苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

赤芍总苷治疗缺血性脑血管病作用及其机制

在以往工作的基础上,系统观察了赤芍总苷(Total paeony glycoside,TPG)对血液系统功能的影响,并通过建立整体和体外脑缺血样损伤等模型,从不同研究层次全面分析赤芍总苷治疗缺血性脑血管病作用及其机制。 1 TPG整体给药对血液流变学系统的影响应用多项血液流变学检测方法和小鼠体内血栓形成模型来研究TPG对微循环、血液粘度、血小板聚集、血栓形成和内外源性凝血系统功能的影响。结果表明,小鼠一次性分别灌服TPG 40 min后,耳廓微循环检测即发现小鼠耳廓微循环中毛细血管开放数量增加,微动脉和微静脉口径增大。     

红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375侵袭的影响

目的 探讨红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375侵袭的影响.方法 采用细胞培养技术培养的人皮肤黑色素瘤细胞A375,经不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00、100.00 μg/mL)红景天苷处理后,应用结晶紫染色法,检测人皮肤黑色素瘤细胞A375对基膜黏附的影响;应用transwell小室模型,观察人皮肤黑色素瘤细胞A375在药物影响下侵袭、迁移能力的改变;采用细胞黏附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察红景天苷对B16-BL6细胞生长、黏附、侵袭、运动及转移能力的影响.结果 与对照组比较,红景天苷各浓度组能显著抑制黑色素瘤细胞与基膜的黏附,抑制其迁移和侵袭,差异显著,有统计学意义(P＜0.05),并且药物组之间随药物浓度的增高其抑制作用增强,组间差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375具有抑制侵袭的功效.     

赤芍总苷对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫机理研究

在临床上常用赤芍治疗肿瘤及血瘀证，但尚无免疫药理学研究报道，本文选用荷瘤小鼠作为研究对象，观察了赤芍总苷(TGC)对CD4、CDs分子的表达，探讨TGC的抗肿瘤效应的免疫学机理，以期获得TGC对免疫系统调节作用的全面认识，为TGC的临床应用提供理论依据。     

赤芍总苷的生产工艺条件研究

赤芍以70％乙醇回流提取，减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用20％乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩得赤芍总苷，收率为5．0％，其中芍药苷的含量占本品的75％以上。     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞浸润及增殖的影响

目的探讨白芍总苷（TGP）对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制是否与抑制肾脏巨噬细胞浸润及增殖有关。方法采用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,随机分对照组、模型组与TGP给药组[50,100和200 mg.kg-1.d-1],8周后应用免疫组化及免疫双染技术检测各组大鼠肾组织巨噬细胞浸润、增殖情况。结果 TGP呈剂量依赖性降低糖尿病大鼠24 h尿清蛋白排泄率。模型组大鼠肾脏PCNA＋细胞数、浸润巨噬细胞数及PCNA＋巨噬细胞数明显高于对照组（P〈0.01）;TGP组大鼠肾脏PCNA＋细胞数、浸润巨噬细胞数及PCNA＋巨噬细胞数明显低于模型组（P〈0.05,P〈0.01）。结论 TGP可明显改善糖尿病大鼠早期肾损害,其机制可能部分与调节肾脏固有细胞增殖,抑制肾组织内巨噬细胞的浸润及增殖有关。     

脱氧核酶对人食管癌细胞增殖的影响

目的 :探讨针对增殖细胞核抗原 (PCNA)基因起始密码AUG的脱氧核酶 (DNAzyme)对人食管癌细胞(EC970 6 )增殖的影响。方法 :设计合成DNAzyme ,应用脂质体转染法将其转入体外培养的hEC。采用流式细胞仪测细胞周期 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法分析hEC增殖活性。采用免疫组化 (SABC法 )检测PCNA蛋白表达。结果 :2 .0 μmol/LDNAzyme干预EC970 6 3d后 ,MTT比色吸光度值低于对照组 (P <0 .0 1)和反义寡聚核苷酸 (ASODN)组 (P<0 .0 5 )。DNAzyme和ASODN对吸光度值的抑制呈剂量依赖性。细胞干预 2d后 ,DNAzyme和ASODN均减少细胞核中棕黄色颗粒的表达 ;DNAzyme、ASODN和对照组的G0 /G1期细胞的比率分别为 72 .5 %、6 6 .8%和 5 6 .7%。结论 :针对PCNA的DNAzyme能调控细胞周期 ,有效抑制EC970 6的体外增殖。     

半夏总生物碱对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from pinellia ternate,TATP)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对MDA-MB-435S细胞株的生长抑制作用。应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致MDA-MB-435S细胞的DNA损伤情况。结果人乳腺癌细胞MDA-MB-435S经TATP处理后,其体外增殖能力受到明显抑制且与药物剂量、作用时间呈正相关,经TATP作用24、48、72h后的半数抑制浓度分别为:98.37μg/ml、52.16μg/ml、33.63μg/ml。单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组有统计学差异(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养条件下,TATP能明显抑制MDA-MB-435S细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。     

蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法:人黑色素瘤细胞株A375细胞体外培养,将对数生长期的A375细胞以不同浓度的蛇床子素处理,MTT法检测A375细胞增殖;流式细胞术检测A375细胞凋亡;RTPCR法检测A375细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达水平;Western blotting检测A375细胞IκB-α、p-NF-κB、NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:蛇床子素可降低A375细胞增殖率以及Bcl-2 mRNA、p-NF-κB和Bcl-2蛋白表达水平,呈浓度依赖性;同时增加A375细胞凋亡率以及Bax mRNA、IκB-α、Bax蛋白表达水平,呈浓度依赖性,但对NF-κB表达无明显影响。结论:蛇床子素能诱导A375细胞增殖抑制和凋亡,呈浓度依赖性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析不同浓度川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肾癌细胞系（786-O）增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液（0.5mmol/L、5mmol/L）及溶剂组（DMSO组）作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果 随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。     

赤芍总苷逆转黑色素瘤细胞株多药耐药的效果及机制研究

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法采用不同剂量TPG(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)处理体外培养的黑色素瘤A375细胞,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞多药耐药基因1(MDR1)、生存素(Survivin)、拓扑异构酶Ⅱ同工酶(TOP2α)、多药耐药相关蛋白(MRP1)mRNA的表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1蛋白表达水平。结果TPG对人黑色素瘤细胞有明显的抑制作用;TPG组较对照组细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1 mRNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 TPG可抑制黑色素瘤细胞生长,通过调节多药耐药因子的表达逆转MDR。     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞增殖及Fas蛋白表达的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养恶性黑素瘤A375细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法 设置溶剂对照及ATRA不同浓度组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ATRA不同浓度、作用不同时间各组细胞存活和生长情况,分析量效、时效关系;Western blot检测10 μmol/L ATRA作用不同时间Fas蛋白的表达.结果 ATRA在0.01～0.1 μmol/L浓度对A375细胞增殖抑制作用不明显;在1～100 μmol/L浓度有抑制作用;药物作用72 h时各浓度组的细胞抑制率均达到高峰,以100 μmol/L浓度组抑制率最高;10 μmol/L ATRA可上调A375细胞Fas蛋白的表达.结论 ATRA对A375细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖关系.ATRA可能通过Fas信号转导途径诱导A375细胞凋亡.     

反义PCNA基因片断抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的 研究反义PCNA基因片断对胶质瘤细胞株U251的细胞增殖的抑制作用。方法 用脂质体介导寡核苷酸转染培养的U251胶质瘤细胞，以MTT法检测细胞增殖活性，RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学方法分别检测相关基因和蛋白的表达，通过流式细胞仪检测细胞周期和TUNEL法检测细胞凋亡。结果 不同浓度的反义寡核苷酸对肿瘤细胞的增殖活性均有抑制作用，且有一定的剂量依赖性。PCNA反义寡核苷酸能够诱导胶质瘤细胞凋亡，且与反义寡核苷酸浓度和作用时间有关。结论 反义PCNA寡核苷酸片断能有效地抑制胶质瘤细胞的体外增殖，且能够诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

博来霉素对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖的影响

目的 观察博来霉素在体外对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖的影响,为临床化疗提供参考.方法 体外培养A875细胞,分别给予不同浓度的博来霉素(0.5～32 μg/ml)、不同时间(24 h或48 h)作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测不同浓度的博来霉素作用不同时间对A875细胞增殖的影响.结果 博来霉素使贴壁细胞密度下降,变圆、变形的漂浮细胞增多;博来霉素对A875细胞的生长增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性.结论 博来霉素能有效抑制人皮肤恶性黑素瘤A875细胞的增殖.