阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血CD55、CD59测定

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种获得性克隆性造血干细胞疾病,临床表现为全血细胞减少、血管内溶血、反复静脉血栓形成[1],PNH是由于各种原因造成骨髓损伤,导致糖化肌醇磷脂-锚(PIG-A)基因突变,使糖基磷酯酰肌醇(GPI)锚连蛋白合成障碍,患者血细胞呈现多种锚连接蛋白的减少或缺失,其中包括衰变加速因子(DAF,CD55)和反应性溶血膜抑制物(MIRL,CD59)的缺失[2].作者测定了PNH患者外周血CD55、CD59的表达,以探讨CD55、CD59检测对PNH诊断及鉴别诊断的意义.     

流式细胞术检测CD55、CD59对阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断价值的探讨

目的探讨患者外周血细胞膜上CD55和CD59缺陷对阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnalhemoglobinuria,PNH)的诊断价值。方法采用流式细胞术对CD55-PE及CD59-FITC标记的患者外周血中性粒细胞和红细胞进行检测。对2009年1月～2012年3月来我院就诊的13例PNH患者、13例再生障碍性贫血(aplasticanemia,AA)、21例骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者、12例缺铁性贫血(irondeficient anemia,IDA)患者与同期80例健康体检者进行回顾性分析。结果 PNH患者中性粒细胞及红细胞膜表面CD55、CD59较AA、MDS、IDA及健康体检者均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用流式细胞术检测贫血患者外周血红细胞及中性粒细胞膜上CD55和CD59缺陷,是临床鉴别诊断PNH与AA、IDA、MDS可靠而敏感的指标。     

CD55、CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断中的作用

目的：探讨衰变加速因子(CD55)、反应性溶血膜抑制物(CD59)在阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)诊断中的意义。方法：用流式细胞仪检测CD55、CD59的表达量(％)。结果：PNH组CD55、CD59明显低于AA—PNH组和AA组、对照组。结论：检测患者外周血粒细胞膜表面抗原CD55、CD59可作为PNH的早期确诊指标,其中CD59是较敏感指标,CD55是特异性指标。     

流式细胞术检测贫血患者血细胞CD55和CD59的表达及临床意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜表面抗原CD55和CD59的表达情况并探讨其临床意义。方法应用流式细胞术检测贫血患者及健康对照组外周血红细胞和粒细胞的表面抗原CD55、CD59的表达水平。结果正常人CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞的百分率均〈5%。阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者均〉20%;部分再生障碍性贫血患者〉5%,但均〈15%;部分缺铁性贫血患者CD55-、CD59-红细胞〉5%,但均〈15%,而中性粒细胞的结果全部正常;少部分巨幼细胞性贫血患者CD55-、CD59-血细胞〉5%,但均〈10%;自身免疫溶血性贫血患者的CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞百分比均正常。结论利用流式细胞术同时检测外周血中红细胞和中性粒细胞CD55和CD59的表达是目前诊断和鉴别诊断PNH的最可靠、最敏感的方法,也可作为判断疗效的手段。     

流式细胞仪检测CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的应用

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)系获得性红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血.近年来,利用流式细胞术(FCM)检测和计数缺乏CD59的血细胞,被认为是诊断PNH更敏感、更特异的方法[1].本文采用流式细胞术测定红细胞CD59表达,探讨该方法在PNH诊断中的意义.     

贫血患者外周血CD55^＋和CD59^＋细胞检测结果及其临床意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜糖基磷脂酰肌醇（GPI）连接的补体调节蛋白CD55和CD59表达情况,探讨其临床意义。方法应用流式细胞仪测定40例健康人、6例阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）、20例再生障碍性贫血（AA）、35例缺铁性贫血、15例巨幼细胞性贫血、8例自身免疫溶血性贫血及8例造血系统肿瘤伴有贫血患者的外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋表达的百分率。结果健康人外周血中红细胞和中性粒细胞膜上CD55^＋和CD59^＋均大于95%;PNH患者在31.20%～72.34%;部分再障、溶贫患者小于95%,但均大于80%;其他均大于95%。结论利用流式细胞仪检测外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55＋和CD59＋是目前诊断PNH最可靠和最敏感的方法。     

粒细胞上CD59分子缺失表达在PNH特异性诊断指标的价值分析

目的 研究膜反应性溶解抑制物(MIRL,CD59)分子在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者和其他类型贫血患者粒细胞膜表达情况,分析CD59分子缺失表达的诊断价值.方法 使用藻红蛋白(PE)荧光素标记针对CD59分子单克隆抗体,应用流式细胞术检测CD59在16例PNH、7例再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿症(AA-PNH)、33例再生障碍性贫血(AA)、29例骨髓增生异常综合征(MDS)、11例多发性骨髓瘤(MM)、10例系统性红斑狼疮(SLE)、10例急性淋巴细胞白血病(ALL)、11例急性成髓系细胞性白血病(AML)、28例巨幼红细胞性贫血(MA)、66例缺铁性贫血(IDA)和13例自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者粒细胞上表达水平.CD59-表达数据通过一维变量方差分析.结果 CD59-细胞在30例正常对照组粒细胞上表达百分比平均为1.9%,在PNH组和其他贫血组粒细胞上缺失表达百分比平均数分别为43.6%(PNH)、29.3%(AA-PNH)、17.7%(AA)、14.6%(MDS)、12.1%(MM)、12.1%(SLE)、11.7%(ALL)、33.6%(AML)、11.6%(MA)、8.0%(IDA)和11.2%(AIHA).与正常对照组比较,PNH、AA-PNH、AA、MDS、MM、SLE、ALL、AML、MA、IDA以及AIHA组粒细胞上CD59缺失表达均有增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 CD59在PNH和其他不同类型贫血患者粒细胞上都有不同程度表达缺失,CD59分子表达降低可能不是PNH特异性诊断指标.     

CD55、CD59在诊断再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征中的应用

目的研究CD55、CD59在再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿(AA-PNH)综合征中的诊断价值。方法用流式细胞仪对19例AA-PNH综合征进行CD55及CD59的检测,同时做酸化血清溶血试验(Ham试验),比较二者的阳性检测率。结果红细胞CD55异常者17例(89.4%),粒细胞CD55异常者19例(100%);红细胞CD59异常者18例(94.7%),粒细胞CD59异常者19例(100%)。Ham试验异常率为26.3%。红细胞和粒细胞CD55、CD59的异常率明显高于Ham试验(P<0.05)。结论CD55、CD59有助于提高AA-PNH综合征的诊断。     

六类贫血患者外周血CD55^-和CD59^-细胞检测结果及其意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜表面的糖化磷脂酰肌醇（GPI）连接的衰变加速因子（DAF，CD55）和膜反应性溶血抑制物（MIRL，CD59）的表达情况，探讨其临床意义。方法采用荧光标记的CD55和CD59单克隆抗体，流式细胞仪检测42例正常人、8例PNH、36例AA、22例MDS、10例AIHA、32例IDA、25例巨幼贫患者CD55^-和CD59^-的红细胞和中性粒细胞的百分率。结果正常人CD55^-和CD59^-红细胞和中性粒细胞的百分率均〈5％，PNH患者均〉25％，部分AA、MDS、AIHA患者〉5％（均〈20％），巨幼贫和IDA患者的红细胞和中性粒细胞CD55^-和CD59^-百分率均正常。采用流式细胞仪检测外周血CD55^-和CD59^-的红细胞和中性粒细胞是目前诊断PNH的最可靠、最敏感的方法。也是临床鉴别PNH和其他贫血的较好方法。     

外周血细胞膜上CD55和CD59缺陷对鉴别诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿与贫血的意义

目的 探讨患者外周血细胞膜上CD55和CD59缺陷对鉴别诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿(parosysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)与贫血(anemia)的意义.方法 采用荧光素标记的CD55和CD59单克隆抗体,流式细胞术检测30例正常人、32例再生障碍性贫血(AA)、28例阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)或AA-PNH综合征、38例小细胞低色素性贫血(IDA)、24例巨幼细胞性贫血(MA)、12例自身免疫溶血性贫血(AIHA)患者外周血中红细胞及中性粒细胞CD55-和CD59-的百分率.结果 CD55-、CD59-正常人红细胞和中性粒细胞的百分率均＜5%;PNH或AA-PNH患者均＞20%;部分再障患者＞5%(均＜15%).约有40%的小细胞低色素贫血患者CD55-、CD59-红细胞＞5%(均＜20%);但中性粒细胞CD55-、CD59-百分率均＜5%.巨幼贫、自身免疫溶血性盆血患者的CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞均＜5%.结论 利用流式细胞术同时检测患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜上CD55和CD59缺陷是临床鉴别诊断PNH、AA-PNH及再障、小细胞低色素性贫血、巨幼贫及自身免疫溶血性贫血可靠,较敏感的方法.     

CD55CD59CD34对PNH早期诊断研究应用

目的:探讨CD55、CD59、CD34抗原在阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征(PNH)的早期诊断中的价值。方法:应用流式细胞仪测定PNH患者CD55、CD59、CD34抗原阳性表达变化,并与非PNH组以及正常对照组CD55、CD59、CD34抗原表达情况进行分析,同时做糖水试验、Ham试验、RC%、NAP积分检测。结果:PNH、AA-PNH患者CD55+、CD59+表达率较正常对照组及其它病组明显减少,差异有显著性(P<0.01);PNH患者CD34+表达率较正常对照组及其它病组明显增高(P<0.01),而AA患者CD34+表达率最低。结论:CD55、CD59、CD34抗原表达率可作为PNH综合征早期诊断最敏感指标,而基础检测对PNH的诊断及病情监控有重要意义,可达到早发现、早鉴别、早诊断、早治疗的目的。     

Phenotypic analysis of affected peripheral erythroid for CD59 in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

Objective To determine whether affected reticulocytes could be a reliable marker for the diagnosis of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH), we analyzed CD59-antigen expression on the membranes of reticulocytes and erythrocytesMethods We studied 10 PNH patients and 5 healthy volunteers by two-color flow cytometry with a membrane permeable fluorescent dye, thiazole orange (TO), and anti-CD59 monoclonal antibodies (MoAb) TO was introduced to gate reticulocytes and anti-CD59 MoAb were used to identify glycosylphosphatidylinositol (GPI)-deficient cellsResults Cells from healthy individuals were only CD59 positive However, in all PNH patients, CD59-antigen expression could be divided into 3 types: type Ⅰ cells (CD59 normally positive), type Ⅱ cells (CD59 partly positive) and type Ⅲ cells (CD59 negative) The majority of reticulocytes belonged to type Ⅲ cells, GPI-deficient cells (610%) In addition, the percentage of affected reticulocytes was higher than that of erythrocytesConclusions Analyzing PNH reticulocytes was important, because most patients had elevated numbers of reticulocytes, which represent more closely the recent erythroid output of BM However, circulating mature erythrocytes were subject to complement- mediated intravascular lysis Therefore, the percentage of abnormal erythrocytes may not accurately reflect the proliferation rate of normal and abnormal erythroid progenitor cells Thus, affected reticulocytes could be a more reliable indicator for the diagnosis of PNH than mature erythrocytes.     

Detection of CD59-deficient granulocytes in a patient with advanced myelodysplastic syndrome

Aplastic anemia （AA）, myelodysplastic syndrome （MDS）, and paroxysmal noctumal hemoglobinuria （PNH） are bone marrow failure disorders closely related to each other. PNH often occurs in the course of AA or MDS-refractory anemia （RA）. Acquired AA patients, particularly with PNH clones, have benefited from the immunosuppressive therapy （IST）. Although the possible immune abnormality was not considered as the core mechanism in MDS pathology,1 MDS-RA cases with PNH clones also reflected a high probability of response to IST. We report here one rare case of advanced MDS with PNH clones diagnosed by flow cytometry （FCM）.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者测定CD55、CD59的意义

本文采用流式细胞技术测定6例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）．11例再障-PNH综合征,10例再生障碍性贫血（AA）患者外周血淋巴细胞膜CD55和CD59标记率。6例PNH患者均表现出CD55和CD59下降（P＜0.01）．11例再障-PNH综合征患者也表现出CD55和CD59下降（P＜0.05）。10例再生障碍性贫血患者中8例CD55和CD59标记率在95％以上．2例标记率在85％以上,与对照组相比无统计学意义。结果表明：血细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”相关蛋白CD55和CD59的缺陷与PNH有密切关系。流式细胞技术测定血细胞膜CD55和CD59可作为诊断PNH的有效方法。     

体外转运富含GPI-蛋白的红细胞囊泡改善PNH溶血的探索

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９ 的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上,以改善ＰＮＨ 溶血,为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨ ＣＤ５９－ 红细胞,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析、流式细胞仪及蛇毒因子溶血实验等检测和分析红细胞与囊泡的结合。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析显示,红细胞囊泡含有ＣＤ５９;流式细胞仪测定表明,ＰＮＨ ＣＤ５９－ 红细胞与囊泡结合后,ＣＤ５９ 的荧光标记率明显增高（Ｐ＜ ０００１）;蛇毒因子溶血实验显示,加入囊泡后ＰＮＨ ＣＤ５９－ 红细胞溶血度也显著下降（Ｐ＜ ００５）。结论　红细胞囊泡上的ＣＤ５９ 可以在体外转运到ＰＮＨ ＣＤ５９－ 红细胞上,并产生抑制补体溶血的作用,使ＰＮＨ ＣＤ５９－ 红细胞在体外受补体攻击时不易溶血     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与正常人CD34+细胞生存、增殖、扩增性能的比较

目的探索阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34CD59细胞体外扩增的方法,并对其与正常人CD34 细胞的生存、增殖及扩增性能进行比较,为PNH患者实现自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)提供重要的实验基础。方法应用免疫磁珠富集纯化CD34 细胞,然后用流式细胞仪分选出PNH患者的CD34 CD59 细胞及正常人CD34 细胞。对两种细胞在不同造血生长因子组合下,进行体外扩增液体培养2周。并对扩增前及扩增不同阶段的细胞进行体外半固体培养。结果(1)PNH患者CD34 CD59 细胞在体外能得到有效的扩增,在细胞因子合理组合作用下,第7天时CD34 CD59 细胞绝对数扩增约23.49倍。2PNH患者CD34 CD59 细胞与正常人CD34 细胞存在部分相同或相似的特性。在体外扩增过程中,对细胞因子的反应有相同的趋势,均为扩增第7天达到扩增高峰,均在SCF IL-3 IL-6 FL Tpo Epo组合条件下达到最大扩增能力。并且扩增后的细胞仍有形成CFU的能力,均能很好地保持CD59抗原,无GPI锚连蛋白的丢失。(3)正常人CD34 细胞在生存、增殖、形成CFU的能力及扩增能力上均明显强于PNH患者的CD34 CD59 细胞。结论(1)PNH患者CD34 CD59 细胞在体外能得到有效的扩增,临床上应用具有一定的可行性,能满足大多数PNH患者ABMT或APBSCT的需要。(2)PNH患者