生长激素受体基因突变与非生长激素缺乏性矮身材的相关研究

目的了解生长激素受体（GHR）基因突变与非生长激素缺乏性矮小的相关性,以及GHR基因突变患儿的临床特点。方法（1）选择47例（男33例,女14例,年龄2—16岁）非生长激素缺乏而又显著矮小的患儿作为研究对象;80例身高正常的儿童（男49例,女31例,年龄1—17岁）作为对照组。（2）应用PCR-SSCP和基因测序技术检测GHR突变。（3）通过家系成员和正常对照人群的基因分析以及氨基酸同源序列分析等,推测突变基因的性质。结果（1）在47例矮小患儿中有5例、4种不同的GHR基因突变：H56R、G148E、IVS6-30,-31CA〉TG和IVS8＋10G〉C。5例患儿均为杂合突变,杂合突变个体的检出频率为10．6％（5／47）。（2）对照组的基因分析显示这些突变非多态性改变,初步认为H56R和G148E突变可能对蛋白功能产生影响。（3）确定了1种多态性突变：G168G（GGA〉GGG）。该位点基因频率的分布在矮小儿童组和正常对照组之间的差异无统计学意义,但与西方白种人之间的差异有统计学意义。提示该突变可能是单核苷酸多态性改变,与身高没有相关关系。但该位点的等位基因存在人种的差异。结论非生长激素缺乏性矮身材患儿存在GHR基因杂合突变。     

α地中海贫血的诊治进展

近年来单管多重PCR和基因芯片技术的应用,使α地中海贫血(简称α地贫)的三种缺失类型———α3.7、α4.2及αSEA可以快捷地同时检出。产前筛查及超声诊断可以有效减低该病患儿的出生率。高输血疗法、铁螯合剂治疗及脾栓塞治疗使中间型α地贫的预后大为改观,而造血干细胞移植成为重型α地贫根治的惟一方法。该文就其诊断及治疗进展作一综述。     

支气管哮喘患儿PTEN基因突变分析

目的探讨10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)与儿童支气管哮喘(哮喘)的相关性及其与嗜酸性粒细胞(EOS)的关系,为哮喘的发病机制及治疗提供理论依据。方法 30例哮喘复发患儿(临床缓解期)作为哮喘组,30例健康儿童设为健康对照组,2组儿童均于清晨空腹留取外周静脉血1 mL,制备血涂片后提取全基因组DNA,应用聚合酶链反应及克隆、基因测序等方法分析2组儿童PTEN基因第5、第8外显子基因型。并于高倍镜下进行其外周血EOS计数。结果哮喘组患儿PTEN基因第8内含子(intron 8)发现突变,突变率为86.7%(26/30例),健康对照组未发现基因突变。哮喘组患儿外周血EOS计数明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001);发生基因突变的哮喘患儿外周血EOS计数高于无突变的哮喘儿童,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTEN基因在哮喘儿童中存在突变,可能通过影响RNA的选择性剪切及抑制EOS的活化和趋化在哮喘的发病中发挥作用。     

DNA芯片技术在小儿遗传病中的诊断及应用前景

DNA 睛技术是近年来新兴的一项生物学技术，可在基因组水平上高通量地对基因的表达、突变和多态性进行快速、准确的检测，使研究者得以自动、快速、平衡地对大量的生物学信息加以分析。应用DNA芯片技术进行小儿遗传病的诊断具有快速、简洁、准确等优点，并可解释遗传病发生的分子机制，对于早期诊断和积极预防某些小儿遗传病具有十分重要的意义。本文就DNA芯片技术的原理及其在结小儿遗传病诊断中的具体应用进行综述。     

2003年北京地区流行的麻疹野病毒株的基因型分析

目的了解北京地区2003年流行的麻疹病毒的优势基因型。方法采集2003年北京地区暴发和散发麻疹临床病例咽喉拭子,使用WHO推荐的Vero／SLAM细胞进行麻疹病毒分离。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增麻疹病毒分离株的核蛋白（N）基因碳末端450个核苷酸。对扩增产物的核苷酸序列进行测定和分析,并与麻疹病毒基因库中参考株进行比较,参考株包括H1a基因型9株,H1b基因型2株,H1c基因型7株,H2基因型1株,A基因型3株。结果从北京的7个行政区县的麻疹患者的咽喉拭子中共分离到8株麻疹病毒,经对分离株的核蛋白（N）碳末端450个核苷酸进行序列测定和分析,并与国内基因库中的22个参考株进行基因亲缘性关系比较,该8株麻疹病毒均为H1a基因型。该8株病毒与H1a参考株Chin9322、H1b参考株Chin9475和H1c参考株Chin9427的平均遗传距离分别为0．004—0．011,0．026—0．031和0．015—0．022;而与H1a参考株中的Anhui01-1,Anhui02-2的平均遗传距离最近,为0．000—0．009。结论2003年北京地区流行的麻疹病毒的优势基因型为H1a基因型,与北京往年的本土流行株存在明显核苷酸差异,H基因型的H1b、H1c以及H2基因型在北京地区可能已经消失。     

人细小病毒B19 VP1独特区基因变异的研究

目的：获取人细小病毒B19(HPV B19)VP1独特区基因,并进行序列测定及变异分析,为研制诊断试剂及预防疫苗创造条件。方法：应用聚合酶链反应（PCR）技术从1例急性特发性血小板减少性紫癜患儿的血清中扩增HPV B 19VP1独特区基因片段,将其克隆至pGEM-T easy载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,测定目的基因的序列。结果：成功地扩增到HPV B19 VP1独特区全长基因,长度为705个核苷酸,测定结果与Genbank中Gallinella G和Venturoli S所发表的HPV B19 VP1独特区全长基因序列比较,有2处核苷酸发生突变,但所编码的氨基酸均未发生变化。结论：（1）HPV B19 VP1独特区有基因变异;（2）构建了HPV B19 VP1独特区基因的重组质粒,所获实验结果为深入研究奠定了基础。     

粘多糖贮积症Ⅱ型IDS基因的1343-TT新突变

目的研究中国粘多糖贮积症Ⅱ型（MPSⅡ）艾杜糖-2-硫酸酯酶（IDS）的基因突变,为产前基因诊断打下基础。方法应用尿粘多糖含量检测、聚合酶链反应．变性高效液相色谱（PCR-DHPLC）对1例MPSⅡ患儿及其父母的IDS基因的突变热点exons9,3,8,进行突变检测,并对PCR-DHPLC检出的突变样品进行直接测序。结果经PCR-DHPLC分析,发现患儿的IDS基因exon9有明显异常峰形;DNA序列分析进一步发现,患儿IDS基因的exon9发生1343-TT新移码突变,突变部位在第407位密码子（TTT）内,即IDS基因cDNA第1343bp的T后缺失了2个T,并在第429位提前遇上终止密码TGA,导致肽链从550个氨基酸缩短至428个。患儿为这一突变的半合子,而其母为这一突变的杂合子。结论新发现的移码突变（1343-TT）导致肽链比正常的少了122个氨基酸,极可能引起酶活性大大降低,因此可能是该MPSⅡ患儿发病的真正原因。     

一例Rett综合征患儿多种组织的线粒体DNA突变分析

一例Ｒｅｔ综合征患儿多种组织的线粒体ＤＮＡ突变分析唐炬包新华戚豫吴希如作者单位：１０００３４北京医科大学第一医院儿科Ｒｅｔ综合征（Ｒｅｔｓｙｎｄｒｏｍｅ）是一种严重影响儿童精神、运动发育的神经系统遗传性疾病。既往有关该病的遗传学研究多集中在Ｘ染色体上...     

DNA多态性分析技术检测异基因造血干细胞移植后植活的证据

目的探讨DNA多态性分析技术检测患者移植后植入状态的可行性及在患者移植的预后和疾病复发的预警作用。方法应用DNA多态性分析技术对66例异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)术中患者移植前、后及供者的基因分型进行检测,并对25例进行追踪监测和动态分析。结果48例Allo-HSCT术后,患者基因分型表现为供者源型,13例表现为受者源型,5例表现为嵌合状态型;通过对25例追踪监测和动态分析,发现2例供者源型转为受/供者嵌合状态型,4例嵌合状态型转为供者源型,其他未见变化。结论DNA多态性分析技术可快速、准确地检测患者移植物的植入状态,为临床移植提供准确、可靠的实验指标,为进一步制定治疗方案提供依据。     

儿童急性淋巴细胞白血病微量残留病细胞的DNA定量研究

目的 探讨定量监测儿童急性淋巴细胞白血病微量残留率细胞ＤＮＡ变化的临床意义。方法 采用５‘端修饰引物,构建内参照竞争模板,建立竞争性聚合酶链反应ＤＮＡ定量法,对７０例ＡＬＬ患儿进行了Ｔ细胞受体Ｖδ２Ｄδ３基因重排定性检测及完全缓解期ＭＲＤ的动态定量研究。     

先天性巨结肠症SIP1基因外显子3和外显子4的突变分析

目的 探讨SIP1基因外显子3和外显子4与散发性先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)的关联性.方法 检测150例HD患儿SIP1基因突变.采用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-degenerating gel gradient electrophoresis,PCR-DGGE)与DNA测序法检测患儿SIP1基因exon3 and exon4的突变.另选取150例正常人(排除家族性顽同便秘及其他先天性消化道畸形史健康儿童)外周血DNA作为对照组.结果 在HD组exon3 PCR-DGGE发现83例异常电泳条带,测序证实67/83例SIP1发生在突变集中区域,为错义突变(ACC→ATC,苏氨酸→异亮氨酸).在HD组exon4发现101例异常电泳条带,测序证实68/101例SIP1发生在突变集中区域,有4种突变(CAC→TAC,组氨酸→酪氨酸;GAG→GAT,谷氨酸→天门冬氨酸;GCC→GTC,丙氨酸→缬氨酸;TGT→TTT,胱氨酸→苯丙氨酸).DGGE检测正常对照组中未发现异常电泳条带,测序未发现突变.结论 SIP1基因为HD的致病基因,突变类型多样,已发现热点突变;提示SIP1基因与HD发病存在一定程度的关联.     

人类白细胞抗原-Ⅰ基因多态性与急性淋巴细胞白血病的相关性

目的对急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿进行人类白细胞抗原(HLA)基因多态性分型,寻找ALL的易感基因。方法采用特异性寡核苷酸探针杂交(PCR/SSO)法,对ALL患儿和健康对照组进行HLA-A、B基因分型。结果ALL患儿HLA-A01基因位点较健康对照组明显升高[χ2=4.947P=0.026,相对危险率(RR)=10.20]、A02基因位点较对照组降低(χ2=4.187P=0.041,RR=3.13)、A33基因位点较对照组降低(χ2=4.403P=0.036,RR=0.21)。结论HLA-A01、A33与小儿ALL有遗传相关性,其中A01为ALL发生的危险因素;而HLA-A33基因对儿童ALL有遗传拮抗作用。     

神经母细胞瘤术前化疗后DNA含量及细胞时相分布的变化

了解术前化疗对神经母细胞瘤增殖活性的影响，并探讨其作用机理。应用图象细胞仪检测术前化疗与一期手术组神经母细胞瘤的ＤＮＡ含量和细胞时相分布百分比并作差异分析。１０例一期手术组近异倍体２例，异倍体８例，ＤＩ＝１．８４±０．６９；术前化疗组二倍体７例，近异倍体１例，ＤＩ＝１．０５±０．１，差异显著（Ｐ＜０．０１）。术前化疗组Ｇ０＋Ｇ１时相比例升高，Ｓ和Ｇ２＋Ｍ时相比例降低。术前化疗具有促使神经母细胞瘤细胞增殖活性降低的积极作用。     

原发性肾病综合征相关基因的筛选

目的：比较原发性肾病综合征（PNS）患儿与正常健康儿童外周血单个核细胞（PBMC）的基因表达谱变化，筛选出PNS相关基因，进而为PNS的基因诊断和治疗提供线索。方法：分离初发的PNS患儿和正常健康儿童的PBMC，用TRIzol一步法从PBMC中抽提总RNA，将等量的PNS患者和正常健康儿童的mRNA分别用Cy5和Cy3逆转录荧光标记，制备cDNA探针；将两种探针混合后与代表8096条基因的表达谱芯片杂交，经严格洗涤后，用GenePix4000B扫描仪扫描杂交信号荧光强度，用GenePix3.0软件分析扫描结果。结果：在进入研究的8096条基因中，有418条在PNS患者PBMC中存在差异表达。其中，表达增加的有128条，表达降低的有290条；在肾脏病中曾有相关研究的有29条，其余389条在肾脏病中未发现相关研究。这些基因的功能涉及免疫、细胞骨架与运动、细胞信号转导、细胞周期与细胞增殖、凋亡、物质代谢等多个方面。结论：运用基因芯片技术能有效地筛查出新的PNS相关基因；PNS的发生、发展涉及多个基因的改变，是具有不同功能的多个基因相互作用的结果。     

轮状病毒VP4全基因的序列分析及其在原核系统中的初步表达

目的 研究轮状病毒（ＲＶ）我国地方株ＶＰ４基因特点,并获得高效表达的ＶＰ４。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增ＲＶＰＩＡ型我国地方株（ＣＲ１８８的完整ＶＰ４基因,克隆到原核表达质粒ｐＥＴ２１ａ（＋）中：（１）用末端终止法进行核苷酸序列测定。并与人（ＨＲＶ）标准株作比较分析;（２）重组质粒转化原核表达宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）异丙硫半乳糖甙（ＩＰＴＧ）诱导表达,经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶     

婴幼儿腹泻相关腺病毒的基因型研究

目的 探讨婴幼儿腹泻患者腺病毒 （AdV） 的分布情况及基因型特点。方法 选取3岁以下腹泻患儿380例,提取粪便基因组DNA进行腺病毒PCR检测,并对检测阳性的进行克隆测序和基因型分析。结果 在380例样本中,共检出24例腺病毒,检出率为6.3% （24/380）。阳性病例中以2~3岁患儿为主。阳性标本病毒序列分析显示,肠道腺病毒41型检出率为4.2% （16/380）,非肠道腺病毒检出率为2.1% （8/380）：其中AdV1型2例,AdV2型2例,AdV7型1例,AdV12型2例,AdV31型1例。结论 婴幼儿腺病毒腹泻常见于2~3岁的婴幼儿,AdV41是主要流行优势株。     

儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。     

1例中间型β-地中海贫血的临床诊断和基因检测

目的通过回顾性分析1例中间型β-地中海贫血（地贫）的诊断及基因检测流程,总结中间型地贫的诊断策略。方法分析1例β-地贫合并α-地贫基因型患儿的临床表现,通过地贫基因多重PCR检测及DNA序列测定明确诊断,结合相关文献复习,探讨影响β-地贫表现型的基因因素。结果该地贫患儿基因型为B珠蛋白基因41／42突变的杂合予合并仅仅仅anti3.7基因杂合子。结论中间型地贫的诊断,需要临床表现与基因病变相一致,多重PCR结合DNA序列测定等方法可确诊罕见型基因突变。     

人类白细胞抗原对肾病综合征临床过程的预测价值

为了解人类白细胞抗原（ＨＬＡ）是否对原发性肾病综合征（简称肾病）的临床过程有预测价值，对ＨＬＡ分型为ＤＲ７、ＤＲ９及ＤＲ４的三组肾病患儿共３８例进行了前瞻性研究。ＨＬＡ分型用标准的微量淋巴细胞毒试验方法；对３８例患儿随访１．５～２年。结果表明，ＨＬＡ－ＤＲ４组镜下血尿例数比例较另二组显著增高，应用激素后ＨＬＡ－ＤＲ７组患儿９２．９％在４周内起效，ＨＬＡ－ＤＲ４组７５．０％耐药。ＨＬＡ－ＤＲ９组患儿８８．３％为频复发，该组患儿感染情况与另外二组无显著性差异，未发现激素起效时间与复发次数有关。ＤＲ４组患儿病理变化较严重，缓解率低。提示ＨＬＡ在预测肾病临床过程、帮助判断本病亚型方面有应用价值。