全自动琼脂糖凝胶电泳系统检测血红蛋白A_2诊断β-地中海贫血

目的:分析全自动琼脂糖凝胶电泳系统检测血红蛋白A2(HbA2)在β-地中海贫血(β-地贫)筛查和诊断中的应用价值。方法:使用SH-2020全自动琼脂糖电泳系统对5 208例标本进行Hb电泳分析,测定Hb A、Hb F、Hb A2和异常Hb含量,并对可疑病例进行基因检测。结果:5 208例中检出β-地贫177例,Hb H病12例,β-地贫合并Hb E病10例,Hb G 5例,Hb D 2例,Hb CS 1例。结论:全自动琼脂糖凝胶电泳分辨率较高,能准确分析出Hb A、Hb F、Hb A2、Hb E、HbG、Hb D、Hb H和Hb CS,能较好地诊断地中海贫血(地贫),特别是对β-地贫筛查有很好的诊断价值。     

琼脂糖火箭电泳法测定唾液溶菌酶活性

采用琼脂糖火箭电泳法测定唾液溶菌酶活性,将酶学方法和电泳技术结合,使溶菌酶在电场中泳动,在通过含有作用底物的凝胶时与溶壁微球菌发生水解作用,形成透明的溶菌峰,根据峰值与溶菌酶浓度的对数成正比的关系,求得样品溶菌酶含量。该方法简便,快速、稳定性好、灵敏度高,结果准确可靠。在本实验条件下最低检出量为1-25μg/ ml ,在5-0 ～100-0μg/ ml 范围内呈良好的浓度- 峰高的线性关系,r =0-9947 ,P< 0 .001 ,CV批间= ,4-15 % ,CV 批阅= 7-42 % ,平均回收率为95 % ～114 % 。     

琼脂糖火箭电泳法测定唾液溶菌酶活性

本文采用琼脂糖火箭电泳法测定唾液溶菌酶活性,将琼脂扩散方法和电泳技术结合一起,使溶菌酶在电场中泳动,在通过含有作用底物的凝胶时与溶壁微球菌发生水解作用,形成可见的溶菌透明峰,根据峰值与溶菌酶浓度的时数值成正比的关系求得样品溶菌酶含量。该方法简便、快速、稳定性好,灵敏度高,结果准确可靠。在本实验条件下最低检出量为1.25 μg/ml,在5.O-100.0μg/ml范围内呈良好的浓度-峰高的线性关系,r=O.9947,P<0.001,批内重复变异系数CV=4.15％,批间重复变异系数CV=7.42％,平均回收率为95％～114％。     

全自动琼脂糖凝胶电泳检测地中海贫血7500例结果分析

目的:探讨全自动琼脂糖凝胶电泳仪在地中海贫血(简称地贫)筛查中的应用。方法:采用全自动琼脂糖凝胶电泳仪对7500例标本进行Hb电泳,测定异常Hb、HbA2及HbF含量,其中439例同步做地贫基因检测。结果:7500例中检出β地贫615例,异常Hb245例;439例电泳对比基因检测结果显示β地贫、HbH病的电泳检测结果与基因检测结果完全吻合,HbCS的检测结果吻合率达99.77%。以HbA2≤2.55%诊断α1地贫,敏感度和特异度分别为88.9%和73.3%,以HbA2≤2.65%诊断α2地贫敏感度和特异度分别为81.3%和66.3%。结论:全自动琼脂糖凝胶电泳分辨率高,能准确分析出HbA2、HbH、HbCS、HbF异常增高及其它异常Hb,能很好诊断β地贫、HbH病和HbCS。     

糖化血红蛋白自动化琼脂糖凝胶电泳法检测

糖化血红蛋白的水平与测定前体内2个月左右的血糖水平有关，因此，可作为控制糖尿病的指标，同时还是评价治疗效果的一项指标。HbA1c是糖化血红蛋白的重要亚组分，目前测定HbA1c的方法有比色法、层析法、微柱法、等电聚焦法、毛纪管电泳法等多种，其中高效液相色谱（HPLC）法是HbA1c测定的参考方法。而自动化琼脂糖凝胶电泳法操作简便、灵敏度高、适于低浓度蛋白的分析。本参照献[2]对样本中的HbA1c检测进行了探讨。     

琼脂糖凝胶荧光环法在DNA定性及半定量中的应用

琼脂糖凝胶荧光环法在ＤＮＡ定性及半定量中的应用军事医学科学院放射医学研究所（北京１００８５０）刘耀清，杨景庚聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在微生物诊断和生物制剂中应用的重要性和意义已被公认，但往往由于临床样品处理中是否提取到目的ＤＮＡ而使ＰＣＲ扩增带有盲...     

Sebia电泳仪的工作原理和医学应用

本文详细讲述电泳分析的物理原理、医学应用,介绍Sebia HYDRASYS LC电泳仪的工作原理、系统组成与内部结构,讲解仪器的操作使用和故障检修。     

两种不同溶血方法对Hb电泳分辨率的影响

目的探讨两种不同溶血方法对Hb电泳分辨率的影响。方法采用常规的四氯化碳法（CCL4）和美国Helena公司提供的进口REP溶血试剂法制备Hb液,用Helena公司REP型全自动琼脂糖凝胶电泳仪进行血红蛋白（Hb）电泳,比较两种溶血方法对Hb各区带分辨率的影响。结果检测临床标本189例,正常成人Hb电泳区带HbA2,REP法明显浅于四氯化碳法且区带扫描不清,定量不准;异常Hb区带如HbH,HbBat＇s,传统四氯化碳法区带清晰明显,REP法区带不明显。对HbH检出率四氯化碳法为90％．REP法为10％,经非参数检验中的麦克内马尔检验,两者之间有显著差异。结论用四氯化碳法制备Hb,电泳后的区带分辨率明显优于REP溶血试剂法,对异常血红蛋白病,如α-地贫、β-地贫等,应使用四氯化碳法制备Hb液。     

两种不同溶血方法对Hb电泳分辨率的影响

目的探讨两种不同溶血方法对Hb电泳分辨率的影响。方法采用常规的四氯化碳法(CCL4)和美国Helena公司提供的进口REP溶血试剂法制备Hb液,用Helena公司REP型全自动琼脂糖凝胶电泳仪进行血红蛋白(Hb)电泳,比较两种溶血方法对Hb各区带分辨率的影响。结果检测临床标本189例,正常成人Hb电泳区带HbA2,REP法明显浅于四氯化碳法且区带扫描不清,定量不准;异常Hb区带如HbH,HbBat's,传统四氯化碳法区带清晰明显,REP法区带不明显。对HbH检出率四氯化碳法为90%,REP法为10%,经非参数检验中的麦克内马尔检验,两者之间有显著差异。结论用四氯化碳法制备Hb,电泳后的区带分辨率明显优于REP溶血试剂法,对异常血红蛋白病,如α-地贫、β-地贫等,应使用四氯化碳法制备Hb液。     

肾脏病患者尿蛋白电泳测定及其病理活检对比分析

[目的]评价十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)技术进行非浓缩尿蛋白电泳测定的临床意义。[方法]应用SDS-AGE技术对60例肾脏病患者非浓缩尿液样本蛋白组分进行分析,并与同时作肾活检的病理结果作对比。[结果]60例肾脏病患者非浓缩尿液样本根据尿蛋白电泳图谱可以区分为正常生理性蛋白谱带、单一中分子蛋白谱带、中小分子蛋白谱带、中高分子蛋白谱带、混合型(小、中、高)分子蛋白谱带。与肾活检病理结果相符。[结论]非浓缩尿蛋白电泳法敏感性好,快捷简便,可根据尿蛋白组分的分布判断肾脏损伤的部位和程度,有重要的临床诊断意义。     

急性脑外伤组织双向凝胶电泳分析

目的利用蛋白质组学方法，寻找急性脑外伤组织的特异蛋白质。方法提取脑外伤患者伤灶组织及正常组织的总蛋白质，通过双向凝胶电泳分离蛋白质，经生物质谱鉴定由图像分析软件所得出的具有表达差异的蛋白质点。结果2组蛋白斑点总体分布相似，主要分布在等电点p13—8，分子量Mr14．4—75kD，分析发现脑外伤组与正常组相比，有18个蛋白质上调和20个蛋白质下调，进一步质谱鉴定，其中7个蛋白质分别为NSFL1辅助因子、硫氧还蛋白、泛素羧基末端水解酶同工酶L1、血小板活化因子乙酰基水解酶IB—r亚单位、谷氨酸脱氢酶前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2和微管蛋白。结论脑外伤组与正常组相比蛋白质的表达具有差异。推测，这些蛋白质的变化可能与脑外伤的发展变化具有密切的关系。     

高血压大鼠肝阳上亢证的下丘脑双向凝胶电泳分析

目的通过双向凝胶电泳建立高血压肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑分辨率高、重复性好的蛋白质表达图谱,并分析其差异蛋白质。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果两种状态下的大鼠下丘脑图象平均匹配率达92%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点pI3-8,分子量M r14.4~75kD范围。高血压肝阳上亢大鼠下丘脑约有777±27个蛋白质点,正常大鼠下丘脑约有780±31个蛋白质点。与正常大鼠比较肝阳上亢大鼠有22个点表达上升2倍及以上,有25个点表达下降2倍及以上。结论在肝阳上亢状态下有22个蛋白质表达明显增加,还有25个蛋白质表达明显减少。这些蛋白质的变化可能与高血压肝阳上亢的形成有关。     

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。     

乙醇脱水干燥法彗星实验琼脂糖凝胶片保存时间的研究

单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤具有很高的灵敏度 ,已广泛用于职业危险因素引起的人群健康效应研究[1 ] 。因为多数现场与实验室距离较远 ,或不具备荧光显微镜和图像存储设备 ,所以限制了该技术的应用和推广。虽然国外研究中已有使用乙醇脱水干燥法保存凝胶片的报道[2 ] ,但还未见该方法的稳定性以及随保存时间变化的系统性研究。我们通过测定彗星损伤指标 (尾长和olive尾矩 )的变化 ,进行了琼脂糖凝胶片乙醇脱水干燥法保存时间的研究。一、材料与方法1 仪器 :OLYMPUSIX5 0型荧光倒置显微镜、KodakDC2 90数码照相机和北京六一仪器厂D…     

应用脉冲场凝胶电泳分型技术溯源副溶血弧菌食物中毒

目的应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对副溶血弧菌食物中毒进行分析。方法采用限制性内切酶NotⅠ,对一起广州市某餐厅副溶血弧菌食物中毒中30株副溶血弧菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version4．0软件（复选Dice相关系数和UPGMA方法）进行聚类分析。结果分离的30株副溶血弧菌特异性toxR基因均为阳性,毒力基因tdh阳性,而trh阴性。30株副溶血弧菌PFGE型别相同。结论PFGE分型可揭示人、食品和公用具分离的副溶血弧菌菌株之间的流行病学联系,为疫情溯源提供分子流行病学证据和支持。     

福氏志贺菌4c型暴发和散发菌株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区福氏志贺菌4c型暴发菌株和散发菌株的分子分型特征。方法对2003和2005年杭州地区的2次食物中毒暴发分离的福氏志贺菌菌株（暴发1和暴发2,菌株数分别为13株和12株）和2005年1例散发腹泻患者分离的福氏志贺菌4c型离株（1株）进行生化鉴定和血清分型,PCR检测侵袭性抗原基因ipaH,改良Kirby-Bauer纸片法检测菌株的耐药谱及脉冲场凝胶电泳（pulse field gel electrophoresis,PFGE）进行分子分型。结果暴发1中分离的13株菌株均为福氏4c型,但检测的6株菌株间的PFGE图谱存在着相当的差异,Dice系数为0．78至0．92。暴发2中分离的菌株有10株福氏4c型和2株福氏x型,所有菌株的PFGE图谱几乎完全一致。暴发2分离株和暴发1的部分分离株可能存在着一定相关性（Dice系数大于0．8）,而散发菌株与2起暴发的绝大部分菌株间的距离较远（Dice系数小于0．8）。暴发1、暴发2的分离株和1株散发菌株对14种抗生素的耐药谱略呈差异,暴发2中分离的福氏4c型和x型菌株的耐药谱一致。结论PFGE能够很好地辨别福氏志贺菌4c型的两起暴发菌株和1株散发菌株。福氏志贺菌4c型菌株具有易变性,可在暴发流行过程中产生PFGE图谱的差异、血清亚型的转换、耐药谱的变化等。     

脉冲场凝胶电泳在一起慕尼黑沙门菌食源性暴发中的应用研究

目的 脉冲场凝胶电泳(PFGE)在食源性疾病病原菌诊断中的应用.方法 采集19例患者和18名厨师的肛拭子、9份自制冷饮、2份井水以及5例患者的急性期和恢复期血清.同时采集未发病学生大便10份,血清5份,作为正常人对照.用传统的方法进行致病菌的分离和表型鉴定,对所分离的菌株参照美国疾病预防控制中心(CDC)的实验方法用PFGE进行DNA分子分型,使用BioNumerics软件进行聚类分析.方法 从19份食物中毒患者肛拭子中分离出14株慕尼黑沙门菌、从9份可疑食物中分离出3株慕尼黑沙门菌、从18名厨师肛拭子中分离出7株慕尼黑沙门菌,所分离菌株生化结果一致、耐药性相同,患者恢复期血清比急性期血清对所分离的菌株抗体有4倍以上增长.23株分离株的PFGE型完全一致.结论PFGE能直观判断肠道致病菌的亲缘关系,及时确定传染源、传播途径和流行范围,是有效控制食源性疾病大面积暴发的早期预警手段.     

用脉冲凝胶电泳和分子标记研究鲍曼不动杆菌菌株亲缘性

目的 通过对宁波二院鲍曼不动杆菌菌株亲缘性的分析,对比耐药基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法.方法 采用耐药基因扩增和PFGE技术研究我院临床分离的27株鲍曼不动杆菌基因型,对检测结果作菌株亲缘性聚合分析.结果 27株鲍曼不动杆菌用PFGE分型分为4个亚型,用耐药基因分型分为2个亚型,聚合分析结论有区别.结论 两种方法的适用范围不同,研究中选择合适的检测方法非常重要.     

彗星试验琼脂糖凝胶片保存方法研究

单细胞凝胶电泳技术检测环境因素致ＤＮＡ损伤具有很高的灵敏性 ,已在国内外广泛用于职业危险因素引起的人群健康效应研究[1 ] 。国内多数现场与实验室距离较远 ,不具备荧光显微镜和图像存储设备 ,因此极大地限制了该技术的应用和推广。湿片在保存和运输方面困难较大 ,并且储存时间越长 ,ＤＮＡ扩散的可能性就越大 ,结果越不稳定。找到一种稳定可靠的凝胶片保存方法 ,是将该方法推广应用于现场工作的迫切需求。国内有文献报道使用冷冻法保存凝胶片 ,但只能保存 2～ 3天。国外已有研究使用甲醇脱水干燥法和乙醇脱水干燥法保存凝胶片 ,但尚没…