粒细胞集落刺激因子对CD34+骨髓干细胞在心肌内归巢的影响

目的:观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对CD34+骨髓干细胞(BMSC)在心肌内归巢的影响. 方法:成龄杂种犬17只,随机分4组. A组5只:接受10 μg/(kg·d),5 d皮下注射和实验性心梗;B组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d皮下注射和假手术;C组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d生理盐水皮下注射和实验性心梗;D组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d生理盐水皮下注射和假手术,对每只动物股动脉插管至主动脉根部,左颈浅静脉插管至冠状静脉窦,分别于造型前后抽血5 mL(抽复管),裂解红细胞,分离单个核细胞,流式细胞仪测定CD34+细胞数,数据分析用SPSS 10.0统计软件包. 结果:4个实验组CD34+ BMSC心肌内归巢数分别为:(183.0±9.2)×104个/L,(71.1±9.2)×104个/L,(82.3±9.5)×103个/L和(78.5±9.8)×103/L,除C,D组之间差别无统计学意义(P=0.912)外,其余各组间均有统计学意义(均为P=0.000). 结论:G-CSF不仅能动员BMSC大量释放入外周血,同时还能增加CD34+ BMSC在心肌内的归巢.     

人肝细胞再生刺激因子对实验性肝纤维化大鼠的保护作用

肝细胞再生刺激因子（ＨＳＳ）的发现已有２０余年的历史，有关其分离纯化和生物学性质的报道较多［１，２］。但由于其在组织中含量少、纯化难度大，未见有将其纯化到同质的报道。本研究利用分子筛层析，弱阴离子纤维柱高效液相色谱和毛细管电泳分离技术，获得了人肝细胞...     

骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中肝细胞相关转录因子的表达

目的 观察体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中肝细胞相关转录因子的表达和分布.方法 从大鼠骨髓中分离间充质干细胞,体外诱导分化为肝细胞.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 比较肝细胞分化过程中转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)、CCAAT增强子结合蛋白α和β(C/EBPα和C/EBPβ)在诱导分化组和对照组中的表达水平;免疫荧光染色方法 检测HNF4α在细胞中的表达定位.结果 在肝细胞分化成熟过程中,转录因子HNF4α和C/EBPα的mRNA表达水平在诱导分化早期的细胞中显著高于对照组细胞,而C/EBPβ mRNA表达水平在分化成熟的细胞中显著高于对照组细胞(P<0.05).免疫荧光染色结果 显示,HNF4α定位于分化细胞核内.结论 在肝细胞分化过程中,转录因子HNF4α、C/EBPα和C/EBPβ呈特征性时序表达,表明骨髓间充质干细胞在向肝细胞分化时,肝细胞相关转录因子的表达与细胞分化的启动和维持密切相关.     

粒细胞集落刺激因子对骨髓干细胞动员的研究进展

粒细胞集落刺激因子（Granulocyte-colony stimulating factor G-CSF）已经在医学实验中被证实为安全、有效的动员剂,然而这个过程的分子机制和影响因素目前尚不完全清楚。此动员过程主要通过影响造血干／祖细胞和骨髓微环境、细胞凋亡等方面起作用。     

肝细胞生长刺激因子生物学活性研究

应用人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞系和大鼠 肝原代培养细胞，利用［＾３Ｈ］ＴｄＲ掺入的方法观察从人胎肝中提取的肝细胞生长刺激物质对肝源性细胞ＤＮＡ合成的影响。     

抗肝细胞刺激因子抗体对促肝细胞生长素疗效的影响

目的探讨抗肝细胞刺激因子抗体(HSS-Ab)对促肝细胞生长素疗效的影响.方法采用金标免疫斑点法检测慢性乙肝患者的HSS-Ab,阳性的慢性乙肝患者,与HSS-Ab阴性的慢性乙肝患者应用促肝细胞生长素治疗前后肝功能、病死率进行比较.结果两组经促肝细胞生长素治疗后,转氨酶、一分钟胆红素及总胆红素均降低,与治疗前相比均有显著性差异(P＜0.05),但是HSS-Ab阳性组较HSS-Ab阴性组下降慢,病死率高,两组相比有显著性差异.结论HSS-Ab可拮抗外源性的HSS,从而影响PHGF的疗效,对HSS-Ab阳性的患者是否可加大PHGF的剂量以增进疗效,有待一步的临床探讨.     

肝纤维化小鼠骨髓源性肝干细胞动员及确定

目的 建立小鼠四氯化碳性及酒精性肝纤维化模型并初步探讨干细胞动员情况,确定骨髓源性肝干细胞的表面标记.方法 四氯化碳皮下注射和酒精灌胃法使小鼠形成肝纤维化,分别取其骨髓干细胞,采用流式细胞仪检测肝纤雏化模型中不同干细胞标记的细胞群体包括c-kit Lin-,Thy1.2 Lin-,CD34 Lin-,Sca 1 Lin-的数量变化,寻找可能的肝干细胞动员情况.结果 与对照组相比,两组纤维化模型小鼠骨髓内c-kit Lin-细胞显著增高,其他干细胞类型细胞数量变化小.结论 c-kit Lin-细胞的数量在肝纤维化模型小鼠中存在明显动员情况,可能参与肝脏的修复,并成为肝干细胞的标记物.     

自体骨髓单个核细胞心肌内移植的实验研究

目的：观察自体骨髓单个核细胞（BMMNC）在动物模型心肌微环境中的存活和分化情况，探索该方法应用至临床的可行性。方法：选取成年新西兰兔共20只，随机分为四组。无菌状态下取胫骨骨髓15ml，采用改进后的密度梯度离心法分离出BMMNC，荧光染料CFSE作细胞标记后备用。正中切口进胸，心肌内注入上述备用细胞悬液。于术后1、2、4、8周先后处死四组动物，取心脏标本冰冻切片在共聚焦显微镜下观察局部含荧光细胞的存活发育情况。结果：移植后4周可观察到与心肌纤维平行的荧光带，部分标本血管内壁中观察到了荧光细胞。结论：自体BMMNC心肌内移植可在心肌微环境的诱导下分化为心肌样细胞及血管内皮细胞。改进后的BMMNC分离纯化方法过程简便、可靠，处理过程无毒性，获得的细胞纯度和活性较高，该方法可应用于临床研究。     

肝刺激因子对非酒精性脂肪性肝炎保护作用的初探

目的 通过油酸(oleic acid,OA)诱导人肝癌细胞系BEL-7402建立非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的细胞模型,探讨肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)对NASH的保护作用.方法 采用25、50、100、200、400 μmol/L浓度OA处理BEL-7402细胞24 h后,再采用噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测OA对细胞存活率的影响,使用脂质检测试剂盒测定细胞中三酰甘油(triglyceride,TG)的含量,以最适实验条件作用于转染空载体和稳定转染HSS的BEL-7402细胞,检测细胞内TG的含量及细胞上清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,油红O染色观察细胞内脂质堆积情况以及使用caspase-3/7活性测定试剂盒检测细胞凋亡情况,综合观察稳定转染HSS保护肝细胞免受损伤的能力.结果 用200和400 μmol/L浓度的OA作用于BEL-7402细胞24 h可以使细胞活力显著降低.OA浓度为100 μmol/L时,BEL-7402细胞内的TG含量最多.与转染空载体的细胞相比,稳定转染HSS细胞内的TG含量和胞外ALT含量均显著下降,用油红O染色可以观察到细胞内红色脂滴沉积减少.结论 HSS对OA诱导的NASH肝损伤起保护作用.     

自体骨髓干细胞移植治疗晚期肝硬化的近期临床观察

目的评价自体骨髓干细胞移植治疗肝炎后肝硬化的近期临床疗效。资料与方法回顾分析我院就诊R8例晚期肝硬化患者行自体骨髓干细胞移植后,患者乏力、纳差、腹胀等症状的改善情况及不良反应发生的情况,并于术后1月、3月复查肝功,了解肝功特别是总胆红素、白蛋白等变化情况。结果8例患者在肝动脉灌注过程中均很顺利,无明显不良不适;白蛋白较术前明显增高、总胆红素较前降低均有统计学意义。结论自体骨髓干细胞移植治疗晚期肝硬化近期效果较满意,其长期疗效有待进一步随访观察。     

细胞外基质对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察细胞外基质对MSCs贴壁、增殖和分化的影响，以期为MSCs建立一种更为理想的培养体系。方法用贴壁法分离纯化大鼠骨髓MSCs，所用培养皿预先用细胞外基质(明胶)处理过夜，以普通培养皿做对照，镜下观察细胞的生物学形态，计数细胞贴壁数目并描绘细胞生长曲线，观察细胞外基质对MCSs生长的影响。结果用细胞外基质处理过的培养皿MSCs，细胞的贴壁、增殖和分化速度都较普通组快，且细胞形态、活力和长势较普通组活跃。结论细胞外基质能明显促进MSCs的分离纯化，使体外扩增培养Mscs更为简单高效。     

成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及其生物学特性研究

目的 建立成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)体外培养和扩增的条件 ,探讨其生物学特性。方法 取正常成人骨髓用含10%胎牛血清的LG -DMEM培养液培养、扩增后 ,进行透射电镜观察 ,流式细胞仪行细胞表面抗原及细胞周期分析检测。结果 培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一 ,增殖能力强 ,细胞扩增至第5代细胞数达 (2～3)×108。该类细胞CD29、CD44、CD166表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、HLA -DR表达阴性。细胞周期以G0/G1 期为主。细胞胞浆具丰富粗面内质网。结论 所建立的分离和培养方法可获取骨髓粘附细胞中一组独特的细胞群 ,具有MSCs的生物学特性。     

人胎肝再生刺激物质对大鼠中毒性肝坏死的治疗作用

本文报道了人胎肝再生刺激物质(h-HSS)、人胎肝胞溶质(h-FLC)对D-氨基半乳精中毒大鼠的存活率和肝功能的影响,和对h-HSS的理化性质及其分子量进行了初步分析与测定。结果发现:h-HSS和h-FLC均能显著提高中毒大鼠的存活率;显著降低其血清OCT和mAST活性,提高HPT-A及促进~3H-TdR掺入肝内DNA的速率。加热95℃、30min,h-HSS仍保留其活性,而经胰蛋白酶处理后,其活性丧失。在SDS-PAGE上,h-HSS显示1条主带和3条次带,各带分子量依次为1.5、2.4、3.4和4.0万道尔顿,主带相对含量占47.57％。     

人骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

目的 探讨骨髓间充质干细胞的体外分离和培养方法。方法 采用密度梯度离心法和贴壁法进行骨髓间充质干细胞的分离，体外培养并观察其形态学特点。结果 细胞呈梭形或星形，4-5代内具有良好的增殖能力。结论 该方法是一种较理想的骨髓间充质干细胞培养方法。     

急诊经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死患者远期心功能的影响

目的评价急诊经冠状动脉自体骨髓单个核细胞(BM-MNC)移植能否改善急性心肌梗死(AMI)患者的远期心功能。方法将20例发病时间<24 h的AMI患者随机分成移植组(10例)和对照组(10例),分别在急诊行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)成功后3 h内经导管注射BM-MNC或安慰剂至梗死相关冠状动脉。PCI术后1周、6个月及4年,随访患者的左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDd)、同位素心肌灌注图像以及患者的生活质量。PCI术后4年,对照组有2例患者失访,移植组有2例患者拒绝继续随访。结果经胸超声心动图检查示,移植组的LVEF由PCI术后1周的0.538±0.092升高至6个月时的0.586±0.099(P<0.05);而对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。对照组的LVDd由PCI术后1周的(50.4±6.0)mm显著增加至PCI术后6个月时的(55.2±7.1)mm(P<0.05);而移植组的LVDd维持不变(P>0.05)。移植组PCI术后4年的LVEF为0.639±0.064,显著高于PCI术后6个月的0.586±0.099(P<0.05);而对照组无显著变化(P>0.05)。移植...     

同种异体骨髓基质干细胞治疗骨缺损的实验研究

目的通过移植大鼠同种异体骨髓基质干细胞,配合免疫抑制剂治疗大鼠颅骨缺损,与对照组进行比较,探索一种治疗骨缺损的新方法。方法选取SD大鼠40只,随机分为四组：同种异体骨髓基质干细胞移植组,同时给以免疫抑制剂治疗;自体骨髓基质干细胞移植组;单纯同种异体骨髓基质干细胞移植组,单纯支架组。四组分别在脑颅骨上造成骨缺损模型后取供体组和自体组骨髓,移植到同步预制骨缺损大鼠模型缺损处,分别于术后8、10、12、13周对骨缺损处进行大体观察,X线摄片,病理取材。结果同种异体骨髓基质干细胞移植组,术后8周观察,骨样组织铺满支架,骨缺损治愈率85%;自体骨髓基质干细胞移植组,术后10周观察,骨样组织铺满支架,骨缺损治愈率82%;未用免疫抑制剂同种异体骨髓基质干细胞移植组,术后12周,只有少量骨样组织形成,骨缺损治愈率0%;单纯支架组骨样组织生长缓慢,术后13周仍未铺满支架。骨缺损治愈率10%。骨缺损治愈率85%。结论应用免疫抑制剂防止移植排斥反应的同种异体骨髓基质干细胞移植效果与自体骨髓基质干细胞移植效果差别很小,具有实用价值。