氯沙坦阻断血小板源生长因子诱导的系膜细胞增殖活性的研究

目的探讨氯沙坦对系膜细胞增殖的影响以及对血小板源生长因子(PDGF)所诱导的细胞增殖作用。方法取传代培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的PDGF、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦,用BrdU掺入法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的情况。结果PDGF和AngⅡ明显促进系膜细胞的生长(P<0.01);氯沙坦(10-7~10-5mol/L)有抑制系膜细胞增殖的作用(P<0.01),与维拉帕米联合使用则抑制作用更为明显;PDGF组加入氯沙坦后,系膜细胞增殖明显减弱,与单纯PDGF组比较,有显著差异(P<0.01)。结论PDGF具有明确的促进大鼠肾小球系膜细胞增殖作用。氯沙坦则抑制系膜细胞增殖活性,可能是通过阻断PDGF的诱导增殖作用而介导的。     

肾衰宁灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生纤维连接蛋白的影响

目的 :观察肾衰宁 (SSN)灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生纤维连接蛋白 (FN)的影响 ,以便从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭 (CRF)的作用机制。方法 :采用 4甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和双抗夹心酶联免疫吸附 (EL ISA)法 ,观察 SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和 FN生成的影响。结果 :SSN大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生 FN,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系 :即随药物浓度的增加 ,对系膜细胞增殖和产生 FN的抑制率也相应增加。结论 :SSN对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生 FN有明显的抑制作用 ;SSN灌肠液抑制肾小球系膜细胞增殖和 FN产生是预防肾小球硬化发生发展的重要机制之一。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）表达影响及姜黄素的干预作用

目的探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞增殖及其LPA3（edg-7）表达和姜黄素的干预作用。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,同步后采用高浓度的葡萄糖（30mmol/l）联合不同浓度姜黄素进行干预处理。应用MqT测量高糖及不同浓度姜黄素干预后肾小球系膜细胞增殖活力。应用RT-PCR检测正常培养及高糖作用后大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）的表达及不同浓度姜黄素对其表达的影响。结果高糖促进大鼠系膜细胞增殖,上调LPA3（edg-7）的表达。姜黄素可抑制高糖刺激引起的系膜细胞增殖,下调LPA3（edg-7）表达。当姜黄素浓度大于或等于10／μmol／L时,系膜细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05）,且表现为浓度依赖性。在基础状态下,系膜细胞表达一定量的LPA3（edg-7）,经高糖刺激后,LPA3（edg-7）基因表达上调;姜黄素可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）mRNA高表达,当姜黄素浓度为20μmol／L时能明显下调高糖刺激引起的系膜细胞LPA3（edg-7）基因表达（P〈0．05）,且随其浓度增高,抑制作用有增强趋势。结论姜黄素能抑制高糖刺激大鼠肾系膜细胞增殖并可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）基因表达。LPA3（edg-7）基因表达与肾小球系膜细胞增殖成正相关,下调LPA3（edg-7）表达,可能为姜黄素抑制肾小球系膜细胞增殖的作用途径之一。     

脂多糖对肾小球系膜细胞白细胞介素12分泌的影响

目的探讨脂多糖 (LPS)对体外培养的肾小球系膜细胞白细胞介素 12 (IL 12 )分泌的影响。方法应用不同浓度的脂多糖对系膜细胞培养 ,采用ELISA法检测培养细胞上清液IL 12的分泌。结果5 %FCSRPMI 16 40基础培养条件下的系膜细胞未检测到IL 12蛋白分泌。不同浓度LPS(0 .1,1,5 ,10 μg/ml)刺激下 ,系膜细胞分泌大量的IL 12 ;其浓度分别为 (9.87± 0 .77) pg/ml,(16 .45± 1.0 3) pg/ml,(2 5 .0 8±2 .0 1) pg/ml,(38.33± 1.71)pg/ml。结论LPS可诱导体外培养的系膜细胞分泌IL 12。     

迷迭香酸对系膜增生性肾炎系膜细胞抗氧化应激的影响

目的探讨在系膜增生性肾小球肾炎(M sPGN)中系膜细胞氧化损伤与抗氧化系统的改变及迷迭香酸的干预作用。方法培养大鼠肾小球系膜细胞,以PDGF刺激系膜增生及RAD干预;另外,用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS),制备大鼠抗THy1.1系膜增生性肾小球肾炎模型,并以迷迭香酸干预。体外及体内实验均设正常对照组、肾炎组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组。利用分光法分别测定培养细胞和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果在抗THy1.1肾炎的肾脏组织及PDGF刺激肾小球系膜细胞中MDA含量升高和SOD减少;迷迭香酸的干预后MDA的产生降低,而SOD增加。结论氧自由基及其诱发的脂质过氧化在系膜增生性肾小球肾炎的致病中起重要作用,而迷迭香酸则能抑制肾炎系膜细胞的上述改变,具有抗氧化活性。     

1,25（OH）2D3对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的探讨1,25一二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠系膜细胞增殖与凋亡及其相关基因Fas表达的影响。方法体外培养的大鼠系膜细胞,分为正常对照组(0 mol/L)和不同浓度1,25(OH)2D3干预组(10-10mol/L;10-8mol/L;10-6mol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪,检测不同作用时间(24 h、48 h)下,系膜细胞增殖及凋亡情况,免疫荧光染色法观察干预24 h后,凋亡相关基因Fas的表达情况并测定各组荧光强度。结果与正常对照组相比,1,25(OH)2D3干预组,可明显抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并呈作用时间依赖性。同时免疫荧光染色证实干预浓度越大,系膜细胞内Fas表达增多,荧光强度增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 1,25(OH)2D3干预大鼠肾小球系膜细胞,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,Fas的表达增多,呈浓度和时间依赖性。     

肝细胞生长素在体外对大鼠肾小球系膜细胞生物活性的影响

目的 观察低分子肝细胞生长素(HPN)对炎症因子刺激下的大鼠肾小球系膜细胞增殖及产生TGFβ的影响。方法 用^3H—TdR掺入法检测肾小球系膜细胞(GMC)增殖变化，用ELISA法检测肾小球系膜细胞培养上清中TGFβ的水平。结果 在无IL-1β存在时，浓度为400u/孔的低分子肝细胞生长素对常规培养的系膜细胞增殖有明显抑制作用(P＜0．01)，而对TGFβ的产生无影响；但它对IL-β刺激下的大鼠系膜细胞增殖和TGFβ产生均有明显抑制作用(均P＜0．01)。低分子肝细胞生长素在100u/孔浓度时无上述作用。结论 高剂量HPN可抑制体外培养的大鼠系膜细胞增殖，降低IL-β刺激系膜细胞产生TGFβ。低分子肝细胞生长素无种属特异性和组织特异性。     

选择性环氧合酶抑制剂NS-398对高糖诱导系膜细胞增殖的影响

目的:研究选择环氧合酶抑制剂NS-398对高糖诱导的系膜细胞抑制作用.方法:空白组,不加任何刺激剂;高糖组,加入30 mmol/L葡萄糖处理;干预组,不同浓度选择性环氧合酶抑制剂NS-398(5、10、20、40μmol/L)加入高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中,分别共同培养0、12、24、48、72 h,用[3H]-亮氨酸掺入法检测细胞蛋白质的从头合成情况,用流式细胞仪分析检测细胞G0-G1周期分布的变化,观察选择性环氧合酶抑制剂NS-398对系膜细胞增殖的影响.结果:高糖刺激的系膜细胞的[3H]-亮氨酸掺入量明显增加,用不同浓度的NS-398共同培养高糖系膜细胞,观察不同时间[3H]-亮氨酸掺入量,选择性环氧合酶抑制剂NS-398在5～40μmol/L浓度范围内,随着时间的延长、浓度的增加,可明显抑制MC[3H]-亮氨酸掺入,且呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪检测干预组细胞G0-G1周期百分比较高糖组差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论:选择性环氧合酶抑制剂NS-398能抑制高糖诱导系膜细胞增殖,促进细胞凋亡.     

迷迭香酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖中氧化应激及炎症介质分泌的影响

目的：观察PDGF—BB诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖过程中氧化与抗氧化系统的改变及炎症介质的分泌变化，并探讨迷迭香酸的干预作用。方法：培养大鼠系膜细胞，以PDGF刺激系膜细胞增殖及迷迭香酸干预。实验设正常对照组、增殖组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组，利用分光法分别测定细胞上清液中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。应用双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TGF～β1，MCP～1及纤维连结蛋白的蛋白分泌量。结果：经PDGF—BB刺激系膜细胞后超氧化物歧化酶活性降低，丙二醛含量升高；而迷迭香酸干预能促进超氧化物歧化酶活性升高而降低丙二醛的产生。PDGF—BB（20ng／mL）同样刺激肾小球系膜细胞分泌TGF—β1与MCP-1，刺激GMC合成FN蛋白。RA则呈浓度依赖性地抑制肾小球系膜细胞中TGF-β1，MCP-1，FN蛋白分泌。结论：氧自由基、脂质过氧化及炎症介质参与了系膜细胞的增生，而迷迭香酸则能抑制系膜细胞的上述改变，具有抗氧化活性。同时在PDGF—BB诱导的肾小球系膜细胞增殖中，抑制肾球系膜细胞分泌TGF-β与MCP-1，并能抑制肾小球系膜细胞合成纤维连结蛋白。     

IL-13等因素对肾小球系膜细胞表达细胞周期调节负控蛋白p27的影响

目的 :探讨IL 13、ET 1、甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞表达细胞周期负控蛋白p2 7的变化。方法 :不同浓度IL 13 (10ng/mL、10 0ng/mL)、ET 1(10 7mol/L)、甲基强的松龙 0 5μg/mL、肝素钠 2 0 0mg/L和10 0 μg/L ,作用于培养的系膜细胞。流式细胞仪检测p2 7表达水平。结果 :IL 13 10ng/mL浓度组和 10 0ng/mL浓度组p2 7表达为 46 74± 3 2 5和 2 3 8± 2 56,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1,P <0 0 5) ,两不同浓度组之间差异有显著意义 (P <0 0 1)。ET 1刺激 14h和 18h后p2 7的表达分别为 14 76± 1 49和 12 18± 1 3 0 ,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5,P <0 0 5)。甲基强的松龙 48h及 72h后p2 7表达为 9 9± 1 0 1和 9 12±0 93 ,与对照组比较明显降低 ,P <0 0 0 1。肝素钠 10 0mg/L浓度组和 2 0 0mg/L浓度组p2 7的表达分别为 2 6 94±1 2 3和 2 8 0 4± 0 99,较对照组明显升高 (P <0 0 5) ,不同浓度组间比较无明显差异。结论 :肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p2 7表达水平不同。p2 7在调节系膜细胞增殖过程中起重要作用     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.     

表皮生长因子对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨表皮生长因子对体外肾小球系膜细胞增殖作用的影响,为进一步研究系膜细胞增殖的发生机制提供依据。方法:通过肾小球系膜细胞体外培养技术,用含有不同浓度表皮生长因子的培养液培养系膜细胞,作用不同时间,以噻唑蓝法检测细胞增殖能力,观察不同浓度、作用时间下系膜细胞增殖情况。结果:表皮生长因子在0～100ng/mL浓度范围内,其促增殖作用随浓度的增加而增大,呈剂量依赖性(P<0.01),当浓度持续增高时,其促增殖能力有所降低(P<0.05)。加入10ng/mL表皮生长因子作用12～24h促增殖能力逐渐提高,24h达到高峰(P<0.05),随后又随着时间的延长而逐渐降低(P<0.05)。结论:表皮生长因子在一定浓度和时间范围内具有促进肾小球系膜细胞增殖的作用。     

黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:从细胞水平观察黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响,拟验证黄芪皂甙对系膜细胞增殖影响与其浓度的相关性.方法:实验于2006-12/2007-07在辽宁医学院生理实验室完成.取高糖培养的第4～7代大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组,黄芪皂甙50,100,200mg/L组4组,分别给予等量的高糖培养液及50,100,200mg/L黄芪皂甙,在给药后培养48 h,用MTT比色法检测细胞增殖程度,流式细胞仪检测细胞周期.结果:①MTT法显示培养48 h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的吸光度值A490nm低于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递减.②流式细胞仪检测显示培养48h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的G0/G1值高于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递增.结论:在一定质量浓度范围(50～200 mg/L)内,黄芪皂甙可抑制肾小球系膜细胞增殖,阻止细胞周期进程.     

单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。     

二烯丙基二硫对HL-60细胞血管内皮生长因子表达及分泌的影响

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对白血病细胞株 HL-60的生长抑制作用和对 HL-60细胞血管内皮生长因子(VFGF)mRNA 的表达及 VEGF 蛋白分泌的影响。方法采用 MTT 法观察DADS 对体外培养的 HL-60细胞的生长抑制;应用 ELISA 法检测药物作用前后 HL-60细胞培养上清液中 VEGF 蛋白的含量;半定量 RT-PCR 法检测药物作用前后 HL-60细胞 VEGF mRNA 表达水平。结果DADS 对 HL-60细胞具有明显的生长抑制效应,0.625,1.250和2.500μg/ml DADS 作用 HL-60细胞24 h 的细胞生长抑制率分别为(8.19±3.34)%,(16.79±2.07)%,(21.30±2.72)%;作用48 h 的细胞生长抑制率分别为(11.93±3.93)%.(22.81±2.31)%,(30.74±2.03)%;作用72 h 的细胞生长抑制率分别为(16.68±2.37)%,(28.54±3.26)%,(36.59±2.37)%,其对 HL-60细胞的生长抑制率与药物浓度有明显依赖关系(r>0.9,P<0.01),各实验组随作用时间增加抑制率明显增加(r>0.7,P<0.01);0.625,1.250,2.500 μg/ml DADS 作用 HL-60细胞48 h 和72 h 与空白对照相比均能下调HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白的分泌(P<0.01),三个不同浓度 DADS 组间差异均有统计学意义(P<0.01),其下调 HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白的分泌效果与药物浓度呈相关性(r>0.9,P<0.01)。结论 DADS 能明显抑制 HL-60细胞的增殖;DADS 可能通过抑制 HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白分泌发挥抗白血病的效应。     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景:前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号:200410064899X)。目的:观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法:用20,40,80μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果与结论:苏木精-伊红染色及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P<0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

青藤碱对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖和凋亡的影响。方法体外培养的大鼠MC,分为SIN分为高、中、低剂量组和空白对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,碘化丙啶染色后流式细胞术检测凋亡率,吖啶橙/溴乙锭染色后采用荧光显微镜观察细胞凋亡水平。结果MTT实验和流式细胞检测结果显示,与空白对照组比较,SIN高(P<0.01)、中(P<0.05)、低(P<0.05)剂量组MC增殖降低,凋亡增加,吖啶橙/溴乙锭染色结果显示SIN干预的MC出现凋亡的百分率增加。结论青藤碱可抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖并促进其凋亡,可能会使肾脏病理性损害减轻。     

C肽对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨C肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1生长的影响。方法:对照组仅含低糖MEM培养液;实验组:高糖MEM培养液含不同浓度的C肽,分别培养24h,48h,72h,用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞系HBZY-1的增殖情况。结果:高糖诱导大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;不同浓度的C肽对高糖诱导的细胞系HBZY-1增殖影响程度不同。10,50,300nmol/LC肽作用24h可明显抑制细胞增殖(P<0.05),而0.5,900nmol/L作用不显著。结论:C肽可抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;呈时间、剂量依赖效应。C肽可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:观察青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC)凋亡的影响。方法:用不同浓度的青蒿琥酯刺激脂多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,HE染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:青蒿琥酯对系膜细胞凋亡有明显诱导作用,呈一定剂量依赖性。结论:青蒿琥酯能够剂量依赖性地诱导大鼠系膜细胞凋亡。     

中药肾衰宁对体外培养人肾小球系膜细胞增生及产？…

目的：观察肾衰宁（ＳＳＮ）灌肠液对体外培养人肾小球素膜细胞增殖及产生白介素－８（ＩＬ－８）的影响;从细胞生物学水平探讨ＳＳＮ防治慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）的作用机制。方法：采用４－甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法和双抗夹心酶联免疫吸队法（ＥＬＩＳＡ）,观察ＳＳＮ大鼠血清对体系膜细胞增殖和产生ＩＬ－８,ＳＳＮ大鼠因清对ＬＰＳ刺激后大肾小球系膜细胞增殖和产生ＩＬ－８有的抑制作用,其抑制程度与药物浓度呈量效关