淫羊藿甙对耐药与非耐药HL－60细胞增殖分化的作用

目的：探讨ICA对ATRA耐药或非耐药HL－60细胞的作用。方法：剂量弟增法诱导HL－60细胞对ATRA耐药性;MTT法测定HL－60细胞体外增殖性;NBT法及细胞表面分化抗原检测HL－60细胞分化性;流式细胞仪测定HL－60细胞凋亡发生率。结果：ICA明显抑制HL－60细胞或ATRA耐药HL－60细胞体外增殖,并诱导两组细胞发生明显的分化与凋亡。结论：ICA具明显的诱导HL－60细胞分化与凋亡作用,并与ATRA无交叉耐药性。     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

苦参碱对白血病细胞诱导分化作用和机理研究

为了解苦参碱对人粒系白血病细胞系HL－60细胞的诱导分化作用并探讨其机制,采用MTT法,光镜观察、S－AP免疫组织化学法、硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验,流式细胞仪检测,逆转录酶／多聚酶链反应（RT－PCR）检测,观察苦参碱对HL－60细胞的增殖抑制作用,分化诱导作用及其对细胞周期移行和癌基因表达的影响,结果表明：苦参碱明显地抑制HL－60细胞的增殖,并诱导其向成熟粒系分化;苦参对HL－60细胞的诱导分化作用与其下调c-myc基因表达,阻滞细胞在G1期有关。     

冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用

目的研究冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用。方法以人急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的骨髓原代细胞为研究对象,以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的白血病细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡。结果冬凌草甲素体外可明显地抑制白血病原代细胞的增殖,并能诱导细胞发生凋亡,而且呈现出明显的量-效与时-效关系。结论冬凌草甲素能有效地抑制APL细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,是一种潜在的抗白血病药物。     

全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株(HL60细胞)凋亡及其分子机制。方法 HL60细胞经ATRA诱导不同时间，用活细胞记数法检测细胞增殖情况；用流式细胞术(FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变；用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化；用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变；用Western blot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果 ATRA诱导HL60细胞第3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞，开始出现凋亡，第5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例，核酸电泳发现DNA“梯带”现象；对照组细胞在透射电镜下核大而圆，折光性低，染色质均匀；而ATRA处理5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第3天开始表达增加，相应地与细胞凋亡相关的酶——半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)也表达增加，而磷酸化的Erk／STAT水平明显下调。结论 ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡，其机制可能为：ATRA诱导细胞后，RAR信号途径被激活，导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase3表达上调)，而与细胞增殖相关的信号途径被阻断(p-Erk／p-STAT水平下降)，引起细胞增殖阻滞，发生凋亡。     

HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

人参多糖对人早幼粒白血病细胞株(HL-60)增殖的影响

目的：探讨人参多糖（GPS）对人粒单系造血祖细胞（CFU－GM）和人早幼粒白血病细胞株（HL－60）增殖分化的影响。方法：采用造血细胞 外培养,形态学观察,免疫细胞化学,流式细胞术等实验血流学技术,结果：GPS在体外能抑制HL－60细胞增殖,而同等剂量的GPS能明显促进正常粒单系造血祖细胞的增殖分化;在本实验条件下未见GPS对HL－60细胞有明显的诱导分化作用,结论：GPS可能通过阻止HL－60细胞从静止期（G60期）进入增殖周期（S／G2＋M）期,抑制DNA的合成等途径进而抑制细胞的增殖;提示GPS有可能成为既能促进正常造血,又能抑制人白血病等肿瘤细胞的增殖的天然诱导剂。     

ATRA对NB细胞增殖抑制及诱导分化作用的研究

目的；通过对神经母细胞瘤（NB）细胞系SH－SYT6和SMS－KCNR的体外实验，探讨全反式维甲酸（ATRA）对NB细胞增殖抑制的可能分子机制及脑源性神经营养因子（BDNF）－TrkB信号转导途径在NB细胞分化中的作用。方法：通过台盼蓝拒染计数活细胞，用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果：5μmol/L ATRA抑制NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞增殖，而5nmol/L ATRA无此作用；ATRA可诱导SMS－KCNR细胞分化成熟，对SH－SY5Y细胞诱导分化作用极弱；BDNF可使经ATRA处理的SY5Y细胞发生显著形态学分化。结论：5μmol/L ATRA对人NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞的体外增殖有抑制作用；ATRA能诱导人NB细胞系SMS－KCNR细胞分化成熟，ATRA与BDNF共同作用可使1SH－SY5Y发生显著形态学分化；BDNF－TrkB信号转导途径的激活可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。     

ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的：探讨PML基因及蛋白在白血病中的表达和细胞内分布定位。方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL－60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright‘s染色及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PMLmRNA表达采用RT－PCR法。结果1,ATRA处理后,NB4和HL－60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经雄黄处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2．ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白恢复定位,HL－60、K562钠PML蛋白定位分布无变化;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL－60及K562细胞,PML发生相似改变。3．ATRA、雄黄处理后各组织细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论在不同诱导剂刺激下,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。     

环氧化酶-抑制剂对白血病HL-60细胞的影响

研究环氧化酶 2（COX 2）抑制剂塞来考昔（Celecoxib）对急性白血病HL 60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法：以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL 60细胞，MMT法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，应用Hoechst 33258 荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化，并对细胞凋亡前后的Caspase3活性进行检测。 结果：COX 2抑制剂 Celecoxib可显著的抑制细胞的生长，并诱导细胞发生凋亡，在细胞凋亡过程中Caspase3活性显著升高，并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：COX 2抑制剂 Celecoxib对HL 60细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用，升高Caspase3活性可能是其重要作用机制之一，这为COX 2抑制剂进一步用于临床治疗白血病提供了有利的实验依据。     

As2O3诱导NB4、HL-60细胞凋亡的机制研究

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)在体外抑制急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia, APL)细胞NB4、HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制。方法 通过WST-8法检测上述两个细胞株的增殖抑制曲线;用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞的凋亡;用Real time PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、p53、C-myc、Survivin在As₂O₃处理前后的表达变化,同时用Westernblot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、P53在As₂O₃处理前后的表达变化。结果 As₂O₃能够显著抑制两种细胞增殖, Westernblot检测及Realtime PCR结果显示,As₂O₃处理引起了两种细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8 、Caspase-9基因表达水平增加,且蛋白表达水平上都出现了活性形式的Caspases。NB4细胞中Survivin、C-myc、Bcl-2的基因表达水平都显著降低,突变型p53蛋白在细胞内的量同样显著下降;HL-60细胞的C-myc表达水平显著降低,但Survivin、Bcl-2表达水平无明显变化。结论 As₂O₃能在药物临床浓度范围内有效抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60、NB4的细胞增殖, 但方式不同;1.5μmol/L浓度的As₂O₃对NB4细胞生长的抑制体现在诱导细胞分化并诱导细胞凋亡,对HL-60细胞生长的抑制只体现在诱导细胞分化。HL-60细胞中高表达的Survivin、Bcl-2抑制了细胞的凋亡。NB4、HL-60细胞株中P53基因的细胞遗传学变异的不同可能是As₂O₃对这两种细胞增殖抑制机制差异的主要原因之一。     

Effect of arsenic trioxide on cytokine expression by acute promyelocytic leukemia cells

Objective To detect the expression of cytokines by acute promyelocytic leukemia (APL) cells before and after exposure to arsenic trioxide. Methods Diagnoses were performed according to the FAB cytological classification criteria and cytogenetic criteria. Bone marrow or blood samples from APL patients were collected in heparinized tubes,then primary APL cells were separated by traditional Ficoll-Hypaque density centrifugation and purified after adherence to plastic surfaces. IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα and G-CSF levels in the leukemia cell culture supernatants were detected by ELISA. At the same time, nitro blue tetrazolium (NBT) reduction test was used to detect the differentiation of APL cells. Results After 96 hours exposure to arsenic trioxide, 10(-6) mol/L in vitro or 10 mg/d in vivo, APL cells showed a significant increase of IL-1β(P<0.05) and G-CSF(P<0.05) production, and a significant decrease of IL-6 (P<0.05) and IL-8 (P<0.05). However, there was no obvious variation of TNFα when compared with APL cells without exposure to arsenic trioxide. On the other hand, the proliferation ratio of APL cells in vitro was statistically correlated to the IL-1β secretion ratio or G-CSF secretion ratio. The cell number ratio in patients with detectable IL-1β or G-CSF was higher than that without detectable IL-1β or G-CSF.Conclusion IL-1β and G-CSF secretion may play an important role in the proliferation of APL cells after exposure to arsenic trioxide.     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化前后蛋白表达差异分析

目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果.     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

核转录因子κB与三氧化二砷耐药的关系

目的 研究核转录因子κB与急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞对三氧化二砷(As_2O_3)敏感性降低的关系.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行半数抑制浓度(IC_(50))测定以评估细胞对药物的敏感度;免疫细胞化学检测NF-κB p65的核转位;免疫组织化学染色法鉴定核转录因子KB抑制剂MG-132对耐药细胞p-gp表达的影响.结果 对照组比药物处理组的IC_(50)高6.4倍;药物处理组P-gp的表达阳性率为10.17%,对照组的p-gp的表达阳性率为30.43%,两者相比较差异显著(P<0.05).结论 用As_2O_3,治疗APL的同时可能会促进NF-κB p65的核转位和NF-KB的活化.抑制NF-κB的激活有助于增强As_2O_3,对急性早幼粒细胞性白血病细胞的杀伤效应;NF-κB抑制剂MG-132可以明显抑制As_2O_3引起的P-gp的表达以及NF-κB的活化,从而显著提高急性早幼粒细胞性白血病细胞对As_2O-3的敏感性.     

Berbamine selectively induces apoptosis of human acute promyelocytic leukemia cells via survivin-mediated pathway

Background Currently, resistance and relapse are still major problems in acute promyelocytic leukemia （APL） cases. Thus, new agents that override the resistance are crucial to the development of curative therapies for APL. In this study, we investigated the effects of berbamine on the proliferation of APL cell line NB4 and its possible mechanisms. Methods NB4 cells were treated with berbamine at different concentrations （0-64 μg/ml） for 72 hours. MTT assay was used to determine proliferation inhibition of NB4 cells. Cell apoptosis was evaluated by both flow cytometry （FCM） and morphological examination. PML/RAR-α and survivin mRNAs were measured by nested-RT-PCR and RT-PCR, respectively. Activated-caspase 3 was determined by FCM. Results Berbamine greatly inhibited the proliferation of NB4 cells in dose- and time-dependent manners, and its IC50 value was 3.86 μg/ml at 48 hours. Both morphological observations and FCM results showed that berbamine induced apoptosis of NB4 cells with concomitant increase of activated caspase-3 and decrease of survivin mRNA. After treatment with berbamine at 8 μg/ml for 48 hours, the percentage of apoptotic cells increased from 2.83% to 58.44% （P〈0.01）, and the percentage of cells with activated-caspase 3 elevated from 2.06% to 70.89% （P〈0.01）, whereas, level of survivin mRNA was reduced to 38.24% of control （P〈0.01）. However, no significant change was observed in PML/RAR-α mRNA. Conclusions Berbamine induces caspase-3-dependent apoptosis of leukemia NB4 cells via survivin-mediated pathway, suggesting that berbamine may be a novel potential agent against APL with a mechanism distinct from that of all-trans retinoic acid （ATRA） and arsenic trioxide （ATO）.     

In vitro study on arsenic sulfide(realgar)-induced apoptosis of retinoic acid susceptible or resistant acute promyelocytic leukemia cell lines

Objective: To further understand the possible mechanisms of arsenic sulfide (realgar) in the treatment of acute promyelocytic leukemia (APL). Methods: All-trans retinoic acid (ATRA)-susceptible APL cell line (NB4 cells) and ATRA-resistant APL cell line (MR2 subclone) were used as models in vitro. At various times after incubated with various concentrations of realgar, NB4 and MR2 cells were observed by cell viability , cell proliferation and cell morphology; cell cycle and the expression of Annexin V were assayed by flow cytometry. Results: Cell viability and proliferation of NB4 and MR2 cells were inhibited after the treatment, to some extent, in a dose and time dependent manner. 177 - 711g/L of realgar treated NB4 and MR2 cell presented morphologically some features of apoptotic cells such as intact cell membrane, chromatin condensation and nuclear fragmentation, apoptosis body could be found by electron microscopy as well. Sub-Gl cells and cell cycle arrest were observed by flow cytometry. The proport     

全仅式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)对APL细胞组织因子表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞组织因子 (TF)表达的影响。方法　利用复钙时间测定、ELISA和RT PCR等方法 ,分别检测了ATRA和As2 O3 治疗前后APL患者骨髓单个核细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平 ,同时还检测了使用ATRA和As2 O3 处理APL细胞株NB4细胞和NB4 R1细胞以及转染PML RARa融合基因的U937细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平。结果　ATRA和As2 O3 在体内和体外均可以时间依赖的方式下调NB4细胞的促凝活性、TF抗原水平以及TFmRNA的转录。转染PML RARa融合基因的U937细胞与仅转染逆病毒载体的U937细胞相比 ,其TF表达水平显著升高 ;使用ATRA或As2 O3 分别处理转染PML RARa和转染逆病毒载体的U937细胞 ,其TF抗原水平均显著降低。结论　ATRA和As2 O3均可下调APL细胞TF的表达并降低其PCA ,As2 O3在诱导APL细胞凋亡的同时有可能通过下调APL细胞TF的表达而改善APL患者与DIC相关的出血症状。结果还提示APL细胞染色体易位产生的融合蛋白PML RARa可能对TF的异常表达有一定的影响 ,而ATRA和As2 O3对TF的下调作用可能不依赖于对融合蛋白PML RARa的降解。     

耐三尖杉酯碱白血病细胞株HL-60/H的建立及其耐药性和抗凋亡作用的检测

为了建立性能稳定的白血病耐药细胞株用于肿瘤细胞耐药性和促凋亡作用的研究, 通过逐渐增高三尖杉酯碱（Ｈ） 的剂量, 用极限稀释法克隆筛选出耐三尖杉酯碱（Ｈ） 的白血病细胞株ＨＬ－６０／Ｈ, 并用ＦＣＭ、透射电镜、ＤＮＡＬａｄｄｅｒ法、ＳＡＢＣ法对其进行耐药性和抗凋亡作用的检测。结果显示, ＨＬ－６０／Ｈ是亲代细胞ＨＬ－６０ 耐受Ｈ 的８９．２ 倍,ＨＬ－６０／Ｈ 在无药培养基中传代１６代, ＩＣ５０ 没有明显的降低。ＨＬ－６０／Ｈ细胞同时对多种药物产生耐受。Ｐ－１７０ 和ＢＣＬ－２在ＨＬ－６０／Ｈ 细胞的表达明显增多。药物不易在细胞内聚集,Ｈ不易诱导其发生凋亡。分析结果认为ＨＬ－６０／Ｈ是性能稳定的耐药细胞株,对耐药机制的研究和寻找逆转耐药的方法提供有利条件;多药耐药蛋白Ｐ－１７０ 介导的药物不易在细胞内聚集可能是ＨＬ－６０／Ｈ细胞产生耐药的重要机制; ＢＣＬ－２ 的高表达使ＨＬ－６０／Ｈ 细胞不易发生凋亡     

大蒜油诱导HL-60细胞分化的实验研究

目的：观察大蒜油对HL-60细胞的诱导分化作用。方法：MTT法检测大蒜油对HL-60细胞的增殖抑制,Giemsa染色观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期改变,并检测CD11b、CD15的表达。RT-PCR检测bcl-2、c-myc／mad、mpo基因mRNA的表达。同时设ATRA、As2O3为阳性对照,与大蒜油的作用进行比较分析。结果：大蒜油明显抑制了HL-60细胞增殖,使大部分细胞阻滞于G0／G1期,作用强于ATRA和As2O3;诱导细胞成熟分化的能力与ATRA接近,优于As2O3;通过抑制bcl-2、c-mvc和mpo基因的表达,促进mad基因的表达来发挥作用。结论：大蒜油对HL-60细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,有可能成为新的临床诱导分化剂。