超声诱导细胞凋亡的研究与进展

目的:回顾近年来B超诱导细胞凋亡的实验研究结果,介绍用凋亡作为超声安全性研究的生物学指标的研究进展。资料来源:应用计算机检索medline数据库1998-01/2004-01期间的相关文章,检索词“Ultrasound;Apoptosis,并限定语言种类为“English”。计算机检索中文期刊全文数据库1998-01/2004-01期间的相关文章,检索词“超声;细胞凋亡”,并限定语言类型为中文。资料选择:选择符合关键词的文章,并查看每篇文献后的引文,纳入标准:B超诱导细胞凋亡的基础及临床研究方面的文章,共查得相关文献165篇,其中中文35篇,英文130篇。资料提炼:对检索到的B超诱导细胞凋亡的基础及临床研究方面文献中相关信息进行综述,不排除非随机对照及非盲法的文献。资料综合:实验研究表明,超声的不同生物学效应均可诱导细胞凋亡,但在不同超声条件下,其细胞水平的生物学效应表现有差异。根据资料对超声诱导细胞凋亡的生物学效应、作用机制及临床意义三方面进行综述。结论:B超可诱导细胞凋亡,其生物学效应取决于超声剂量;诊断剂量超声照射人体后是否引起凋亡及其是否对胚胎组织细胞构成损伤有待进一步研究。     

诊断超声对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的研究

目的 检测诊断超声不同时间照身后对大鼠睾丸组织细胞凋亡的影响。方法 应用ＨＰ８５００彩色多普勒诊断仪（探头频率７．５ＭＨｚ,超声输出功率６．８Ｗ,空间平均时间平均声强（Ｉｓａｔａ）３．４ｍＷ／ｃｍ＾２）固定特续照射大鼠睾丸组织,分为５分钟组、１０分钟组、２０分钟组,３０分钟组和空照组。照射后２４小时取睾丸,应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测上述各组凋亡细胞。结果 超声持续照射５     

诊断超声对睾丸生精细胞凋亡的影响

随着实时高频超声和彩色多普勒技术的发展，阴囊超声检查已成为临床诊断阴囊疾病的常规手段。而诊断超声作为一种外来刺激是否会对睾丸生精功能造成损害，长期以来一直是人们关注的问题。近年来，有学者以细胞凋亡作为超声生物效应的观察指标，观察了大鼠睾丸细胞凋亡的情况。现就诊断超声对睾丸生精细胞凋亡影响的实验研究状况作一综述。     

诊断超声与大鼠角膜细胞凋亡

目的：探讨诊断超声对大鼠角膜细胞凋亡的影响。方法：４０只ＳＤ雄性大鼠随机分为５组：对照组为空照组、超声照射后即刻取材组、１２小时取材组、２４小时取材组、４８小时取材组。应用ＨＰ８５００彩色多普勒超声诊断仪对大鼠眼球进行３０分钟的持续照射,２４小时后经动物取角膜进行凋亡检测。结果对照组和即刻组大鼠角膜上皮细胞、基质细胞和内皮细胞的凋亡率无差异,１２小时凋亡细胞增加,２４小时增加最多,４８小时凋亡数下     

诊断超声对不同发育阶段大鼠睾丸组织凋亡的研究

目的探讨诊断超声对不同发育阶段大鼠睾丸组织生精细胞凋亡的影响。方法３６只ＳＤ雄性大鼠随机分为６组。应用ＨＰ８５００彩超仪对大鼠睾丸进行３０ｍｉｎ持续照射,２４ｈ后取睾丸进行凋亡检测。结果不同年龄组生精细胞均有不同程度的细胞凋亡,以出生后３０ｄ凋记细胞数最多,随着龄增长凋亡细胞数有减少趋势,超声照射３０ｍｉｎ后各实验组凋亡细胞数均有显著增加。结论不同发育阶段大鼠睾丸生精细胞凋亡率不同,超声照射３０ｍ     

诊断级超声诱导早孕绒毛细胞凋亡

目的通过研究诊断级超声诱导早孕绒毛细胞凋亡的可能性来评价孕期超声诊断的安全性.方法采用电镜技术、流式细胞分析技术研究超声对绒毛细胞的凋亡诱导.结果①流式细胞仪分析可见实验组有较高的凋亡峰(M1峰),凋亡率随辐照时间增加而显著上升(P＜0.005);②电镜观察绒毛细胞有凋亡的特征染色质浓缩、边聚、核裂解,内质网扩张、空泡化.结论孕早期接受一定剂量的超声辐照能够诱导绒毛细胞凋亡.     

诊断超声对大鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的探讨诊断超声对大鼠卵巢细胞凋亡状况的影响.方法健康SD雌性大鼠30只,鼠龄出生后80～85 d,体重(230±5)g,随机分为5组,应用Siemens Sonoline Prima超声诊断仪,探头频率 7.5 MHz,超声输出功率 3.9 mW,空间峰值时间平均声强(ISPTA)为13 mW/cm2,对SD大鼠卵巢持续辐照3 0 min,分别于辐照后12 h(Ⅰ组)、24 h(Ⅱ组)、48 h(Ⅲ组)取材;超声输出功率 2.0 mW,ISPTA为7 mW/cm2,对SD大鼠卵巢持续辐照30 min,辐照后24 h取材(Ⅳ组).对照组为空照组.进行常规石蜡包埋,切片,TUNEL技术检测上述各组凋亡细胞,光学显微镜进行形态学观察,透射电子显微镜观察超微结构.结果对照组和各辐照组大鼠卵巢组织细胞凋亡率差异有显著性意义(P <0.01),12 h细胞凋亡率增加,24 h增加最多,48 h细胞凋亡率下降.光学显微镜和透射电子显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变染色质致密,固缩聚集于细胞核核膜,呈境界分明的块状或新月形小体,细胞核裂解.结论诊断超声辐照大鼠卵巢可诱导细胞凋亡增加,但存在一定的可复性,且细胞凋亡率与超声输出功率呈正相关.     

细胞凋亡与疾病

细胞凋亡与疾病刘海峰，刘为纹（第三军医大学西南医院消化科，重庆６３００３８）ＡｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＤｉｓｅａｓｅｓＬｉｕＨａｉｆｅｎｇ；ＬｉｕＷｅｉｗｅｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｕｓｔｒｏｅｎｔｅｒｌｏｌｇｙ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ...     

诊断超声辐照大鼠睾丸组织对Fas＼FasL蛋白表达的影响

目的探讨诊断超声对大鼠睾丸组织生精细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ蛋白表达的影响。方法３２只ＳＤ雄性大鼠随机分为４组：Ⅰ组（对照组）、Ⅱ组（辐照１０ｍｉｎ组）、Ⅲ组（辐照２０ｍｉｎ组）和Ⅳ组（辐照３０ｍｉｎ组）。应用ＨＰ８５００彩色多普勒超声诊断仪对大鼠睾丸组织分别进行不同时间的持续辐照,２４ｈ后外死动物,取睾丸组织应用免疫组织化学方法观察标本中Ｆａｓ／ＦａｓＬ表达情况。结果正常对照组睾丸组织同时表达Ｆａｓ和     

细胞凋亡与血液病

细胞凋亡与血液病张之南潘华珍细胞凋亡的原词Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ由两个拉丁字组成，Ａｐｏ指离开，ｐｔｏｓｉｓ是落下，意思是细胞凋亡有如秋天落叶，到一定时候，失去生命力，遂即脱落。凋亡是细胞自然死亡的一种主要形式，在胚胎发育过程中，一些细胞应该消失，出生之...     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡，增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;细胞增殖率降低（P〈0．05）,细胞周期检测表明细胞停滞于S期（P〈0．05）。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。     

诊断超声对不同龄大鼠睾丸组织P53和Bcl—2蛋白表达的影响

目的探讨诊断超声对不同龄大鼠睾丸组织生精细胞Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白表达的影响。方法３６只ＳＤ雄性大鼠根据生后不同天数随机分为６组：Ⅰ组（出生后３０ｄ组）、Ⅱ组（出生后３０ｄ对照组）、Ⅲ组（出生后４５ｄ组）、Ⅳ组（出生后４５ｄ对照组）、Ⅴ组（出生后６０ｄ组,即性成熟组）、Ⅵ组（出生６０ｄ对照组）。应用ＨＰ８５００彩色血流超声诊断仪对大鼠睾丸对大鼠组织进行３０ｍｉｎ的持续辐照,２４ｈ后外死动物取睾丸进     

高脂高糖诱导的 2 型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的分析

目的研究分析高脂高糖诱导的2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的变化。方法用高糖高脂饲料(10·0%猪油,20·0%蔗糖,5·0%胆固醇,65·0%常规饲料)喂养SD大鼠诱发胰岛素抵抗,然后用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,诱发2型糖尿病,用TdT介导的脱氧核苷酸切口末端标记法(TdT-mediateddUTPnickendlabel-ing,TUNEL)检测肾脏细胞凋亡,并与常规饮食大鼠(对照组)相比较。结果2型糖尿病大鼠肾脏细胞的凋亡数显著多于对照组(P<0·0001)。结论本研究为2型糖尿病大鼠肾脏细胞的凋亡提供证据,提示凋亡在肾脏进行性损伤中起重要作用,细胞凋亡与糖尿病肾病的发生密切相关。     

不同浓度羟基脲对K562 ATM/ATR基因表达及细胞凋亡与周期变化的研究

目的探讨不同浓度羟基脲对K562细胞ATM（ataxia telangiectasia mutated）／ATR（ATM—Rad3-Related）基因表达的影响及相应的细胞周期变化和细胞凋亡机制。方法以不同剂量的羟基脲作用于K562细胞株，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测ATM／ATR基因表达，流式细胞术检测BCL-2、AnnexinV和细胞周期。结果随药物浓度升高，ATM基因表达量增强而ATR基因表达量降低，BCL-2蛋白表达阳性率分别为38％，33％，30％，28％和18％，0．25与2．0μmoL／L羟基脲作用差异有统计学意义（P〈0．05），细胞凋亡差异有统计学意义；不加入药物的K562细胞ATM和ATR几乎不表达，亚二倍体和G1期细胞数增多，s期和G2／M期细胞减少。结论不同药物浓度下，ATM和ATR基因表达模式的变化与BCL-2水平、细胞周期和细胞凋亡率的改变相关，这提示ATM和ATR途径存在相互调节机制并涉及不同的胞内信号传导途径。     

虫草素调节非小细胞肺癌细胞株细胞周期、凋亡及相关抑癌基因的实验研究

目的 研究虫草素对非小细胞肺癌细胞株H358细胞周期、凋亡及相关抑癌基因的调节作用。方法 培养非小细胞肺癌细胞株H358并分组,空白对照组用不含药物的DMEM处理,虫草素组用含有50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L虫草素的DMEM处理,处理24 h后测定细胞周期分布、细胞凋亡率、抑癌基因表达水平。结果 不同剂量虫草素处理后,H358细胞的S期比率、凋亡率及PTEN、p53、p16及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA表达水平明显高于空白对照组,G2/M期比率明显低于对照组(P <0. 05),且200μmol/L虫草素处理后,H358细胞的S期比率、凋亡率及PTEN、p53、p16及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA表达水平明显高于其他浓度虫草素处理的细胞,G2/M期比率明显低于其他浓度虫草素处理的细胞(P <0. 05)。结论 虫草素处理非小细胞肺癌细胞株能够使细胞周期停滞、细胞凋亡加剧,增加抑癌基因表达是虫草素发挥以上调节作用的分子途径,并呈剂量依赖性。     

H2-B1基因转染对小鼠内皮细胞凋亡与增殖的影响

目的转染pEGFP-N1-H281质粒载体至小鼠血管内皮细胞（VEC）,观察H2-B1基因对小鼠VEC凋亡与增殖的影响,探讨借鉴母胎免疫耐受模型预防心脏移植术后免疫排斥反应的机制。方法0.5μg/ml空质粒、0．5μg／ml H2-B1质粒、1.0μg/ml H2-B1质粒转染小鼠VEC后,采用实时荧光定量PCR、流式细胞仪、酶标仪检测不同时间质粒的转染效率、H2．B1基因mRNA的相对表达量、转染VEC的凋亡与增殖情况。结果荧光定量PCR结果显示,0．5μg/ml、1．0μg／ml H2-B1质粒组的H2-B1基因mRNA表达量均高于对照组（P〈0．05,P〈0．001）。H2-B1基因促进VEC凋亡,转染48h、72h后1．0斗g／mlH2一B1质粒组与空白对照、0．5μg／ml空质粒比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。H2-B1基因抑制VEC增殖,转染24h、48h、72h后0．5μg／ml H2-B1质粒组、1．0μg／ml H2-B1质粒组分别与空白对照组、0．5μg／ml空质粒组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论pEGFP—N1-H281质粒载体转染小鼠VEC后,能够有效促进其凋亡,抑制其增殖,减弱小鼠VEC活性,诱导免疫耐受。     

转染VEGF-C cDNA对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响

目的探讨转染血管内皮生长因子(VEGF)-C cDNA 对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞增殖、全反式维甲酸(ATRA)诱导分化及化疗药物介导的细胞凋亡作用的影响。方法采用脂质体法将重组表达载体(pcDNA3.1-VEGF-C)和 pcDNA3.1转染 NB4细胞建立稳定细胞株;采用MTT 法及集落形成实验分析转染 VEGF-C cDNA 对 NB4细胞增殖的影响;NB4/VEGF-C 细胞经 ATRA诱导后涂片经瑞特-姬姆萨染色作形态学分析,实时荧光定量 PCR 检测调控粘细胞分化基因 C/EBPα相对表达水平,同时以流式细胞术检测细胞表面的 CD11b 表达量;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测NB4/VEGF-C 细胞经鬼闩乙叉甙(Vp16)诱导的细胞凋亡;并以实时荧光定量 PCR 检测 bcl-2基因相对表达水平,均以 NB4/pcDNA3.1细胞为对照。结果成功转染获得稳定表达 VEGF-C 的细胞株 NB4/VEGF-C,其增殖能力显著高于 NB4/pcDNA3.1细胞;NB4/VEGF-C细胞对抗 ATRA 介导的早幼粒细胞分化成熟,CD11b 表达量低于对照组,C/EBPα基因含量仅为对照组的1/32;NB4/VEGF-C 细胞经Vp16介导后 bcl-2基因表达约为 NB4/pcDNA3.1细胞的2.28倍,而凋亡的 NB4/VEGF-C 细胞百分率(7.20±2.52)%明显低于凋亡的 NB4/pcDNA3.1细胞的(16.07±3.58)%(P=0.005)。结论 VEGF-C 通过 VEGF 受体3(VEGFR-3)信号途径促进白血病细胞增殖,抑制分化诱导剂介导的 NB4 细胞分化及化疗药物介导的细胞凋亡,推测 VEGF-C/VEGFR-3信号途径在白血病疾病进展中发挥重要作用并可望作为白血病治疗的靶点。     

siRNA诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的　构建抗bcr/ablmRNA的小干扰RNA(smallinterferenceRNA ,siRNA)表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,检测诱导细胞凋亡的变化。方法参照siRNA模板设计原则 ,设计并合成两条siRNA模板序列 ,将其插入质粒pSilencer1.0 U6中得到重组子pBCR6 ,通过限制性酶切和测序鉴定 ,大量制备、纯化 ;以X tremeGENEQ2介导瞬时转染K5 6 2细胞 ,设置空载体作为对照。在转染后不同时间 ,利用原位缺口末端标记法 (TUNEL)、膜联蛋白Ⅴ 碘化丙锭染色法 (AnnexinⅤ /PI)通过流式细胞仪检测K5 6 2细胞凋亡的变化。结果针对bcr/ablmRNA融合区域设计的siRNA模板序列 ,经筛选合成寡核苷酸链后退火形成双链 ,再插入pSilencer1.0 U6 ,经酶切和测序鉴定提示构建成功 ;大量制备、纯化后进行转染 ,在转染后 4 8,72hTUNEL法检测和AnnexinⅤ /PI染色法均显示抗bcr/ablmRNA的siRNA表达载体可有效诱导K5 6 2细胞凋亡 ,且随转染时间的延长凋亡率增高 [转染pBCR6 72h的K5 6 2细胞凋亡率为 (47.80± 1.6 3) % ],与对照组 [(6 .6 7± 0 .37) % ]比较差异有显著性 (P <0 .0 0 0 1)。结论抗bcr/ablmRNA的siRNA表达载体构建成功 ,初步结果显示它可以有效地诱导K5 6 2细胞发生凋亡 ,预期siRNA有望成为慢性髓系白血病分子靶向治疗的一个新工具。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸诱导白血病细胞凋亡的研究

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(As-ODN)抗白血病作用及其机制。方法采用脂质体包裹As-ODN转染入HL-60细胞;用端粒重复序列扩增法(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA）检测HL-60细胞的端粒酶活性变化;用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测凋亡细胞。结果0.1～2.0?μmol/LAs-ODN转染入HL-60细胞,培养1～6?d,HL-60细胞端粒酶活性（A值）由1.043±0.045降至0.063±0.011,且有剂量依赖性和时间依赖性。As-ODN转染的HL-60细胞培养后细胞增殖速度减慢,发生了细胞凋亡。而错义寡核苷酸(Ms-ODN)则无此效应。结论As-ODN能特异性抑制HL-60细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。