脱氢表雄酮调节HepG2/GFP-HBx细胞p16基因甲基化及其与细胞周期和凋亡的相关性

目的 探讨HBx与p16基因甲基化的关系,研究脱氢表雄酮(DHEA)对p16基因甲基化以及细胞周期和细胞凋亡的调节作用.方法 以HepG2、HepG2/GFP和HepG2/GFP-HBx三种细胞为材料,采用MTT法检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;MSP-PCR检测p16基因甲基化水平.比较分析HBx与p16基因启动子甲基化、DHEA与各检测指标的关系.结果 HepG2/GFP-HBx细胞与HepG2细胞和HepG2/GFP细胞相比,细胞的增殖速度提高(P<0.05),G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子呈现高水平甲基化, HepG2和 HepG2/GFP细胞呈现高水平非甲基化.100 μmol/L的DHEA使三种细胞的增殖速度降低(P<0.05),G0/G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05),凋亡率提高(P<0.05).DHEA可下调HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子甲基化水平,但对HepG2和HepG2/GFP细胞的p16基因启动子甲基化水平不产生影响.结论 HBx引起肝癌细胞p16基因甲基化,并缩短细胞周期抑制细胞凋亡;DHEA可明显下调HBx引起的p16基因甲基化水平,延长细胞周期促进细胞凋亡,在无HBx基因整合的情况下,DHEA对肝癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响不通过p16基因甲基化的途径实现.     

癌痛消对SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞体外抑瘤作用和细胞周期影响的实验研究

[目的]观察癌痛消对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞的体外抗癌作用。[方法]运用细胞培养技术,MTT法从细胞水平评价癌痛消对肝癌细胞增殖的抑制作用。并采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,观察癌痛消对肝癌细胞周期的影响。[结果]癌痛消剂量在25 mg/ml,50 mg/ml,75 mg/ml,100 mg/ml范围内对人肝癌细胞Bel-7404,SMMC-7721的增殖具有抑制作用,能使人肝癌细胞SMMC-7721及Bel-7404 G-G1期比例增加,同时降低G2/M期细胞数目,呈浓度依赖性,其作用强度与浓度呈正相关。[结论]癌痛消在体外对肝癌细胞有抑制增殖作用,能使人肝癌细胞停留在G0-G1期,其抑瘤效果呈浓度依赖性,作用强度与药物浓度存在正相关。     

槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的作用.方法 MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡;流式细胞仪检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果 槲皮素对HO-8910细胞有增殖抑制作用,呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果分析,实验组G1/G0期上升,S期和G2/M期下降,细胞凋亡率上升;流式细胞术结果显示,槲皮素使Bel-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论 槲皮素在体外能抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,阻止细胞由G1/G0期向S期和G2/M期移行并诱导细胞凋亡,其诱导HO-8910细胞凋亡的机制可能与上调促调亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bel-2表达有关.     

转HBx基因肝癌细胞增殖与抗凋亡特性研究

:【目的】研究转HBx基因肝癌细胞增殖与拮抗凋亡特性 ,探讨肝癌恶性表型的分子基础。【方法】以携HBx基因重组逆转录病毒感染QGY770 1肝癌细胞 ,G418筛选 ,PCR与RT PCR鉴定 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞增殖周期 ;用阿霉素诱导细胞凋亡 ,FCM定量检测。【结果】QGY770 1肝癌细胞经HBx基因转染后 ,G418筛选 4～ 6周获阳性克隆株QGY/HBx ,PCR与RT -PCR分别证实细胞有HBx基因整合与HBxmRNA表达 ;细胞周期分析结果表明 ,QGY/HBx细胞的细胞周期进程明显加快 ,并可明显抵制阿霉素的凋亡诱导作用。【结论】HBx基因可加速肝癌细胞周期的进程 ,并增强肝癌细胞的抗凋亡能力。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用

目的研究荔枝核总黄酮(TFL)对大鼠肝星状细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法应用不同浓度(20、40、80、160 mg/L)TFL(药物组)对生长状态稳定的大鼠肝星状细胞株HSC-T6进行处理,并设置空白对照组。MTT法检测不同浓度TFL处理不同时间后,HSC-T6细胞增殖情况,并根据抑制率计算TFL的半数抑制质量浓度(IC50);吖啶橙染色观察经不同浓度TFL处理后HSC-T6细胞凋亡情况;流式细胞术检测不同浓度TFL处理后HSC-T6细胞周期的变化情况。结果 MTT结果显示,TFL对HSC-T6具有增殖抑制活性(P<0.05),其处理24、48、72 h的IC50分别为116.44、101.98、129.69μg/mL。吖啶橙染色显示,药物组细胞中出现核浓缩、核碎裂及致密浓染亮绿色凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞G1期细胞比例为(47.68±2.92)%,G2期为(19.58±2.93)%,S期为(32.75±2.09)%;药物组经TFL处理后,G1期细胞数量增加,而G2期细胞显著减少(P<0.05)。结论 TFL在体外能抑制大鼠肝星状细胞增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制大鼠肝星状细胞的增殖。     

芹菜素通过Akt信号途径抑制人肝癌细胞活性

目的 探讨芹菜素(apigenin,API)抑制人肝癌Bel-7404细胞活性作用是否涉及Akt信号传导.方法 体外培养Bel-7404细胞,MTT比色法测定细胞活性;PI染色流式细胞术分析细胞周期;Western Blot分析细胞p-Akt、cyclin D1蛋白表达.结果 API抑制Bel-7404细胞活性,呈浓度依赖性,其IC50值为59.4μmol/L.API阻滞Bel-7404细胞周期于G1期.API与PI3K特异性阻断剂LY294002均能有效下调Bel-7404细胞磷酸化Akt蛋白和cyclin D1蛋白表达.结论 API抑制Bel-7404细胞活性作用与其抑制Akt信号传导有关.     

TRAIL联合放射线对肺癌细胞增殖及凋亡影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合放射线对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度TRAIL对Lewis肺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪检测TRAIL、X射线及两者联合对Lewis细胞凋亡率及细胞周期的影响。结果 TRAIL对Lewis细胞的体外抑制作用与浓度相关(F=9.017～12.465,P<0.05)。TRAIL与X射线联用能够使Lewis细胞的凋亡率及G2/M期比例提高,与对照组及单用TRAIL组和单用X射线组相比,差异有统计学意义(F=203.175、149.276,P<0.05)。结论 TRAIL可抑制Lewis细胞的增殖,并与浓度相关。TRAIL与放射线联用能够提高肿瘤细胞的凋亡率及细胞周期中G2/M期的比例。     

索拉非尼联合紫杉醇对肝癌huh-7细胞的作用

[摘要]：目的 探讨索拉非尼联合紫杉醇(PTX) 对肝癌细胞huh-7的杀伤作用。方法 用MTT法检测索拉非尼、紫杉醇单药及其联合对huh-7细胞的增殖抑制,同时采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果 索拉非尼单药及PTX 单药对huh-7均有明显抑制作用,两药联合具有协同作用( P <0.05)。索拉非尼主要使细胞阻滞于G1期,PTX则使细胞阻滞于G2期和M期。两药联用后同时阻滞于G1 及G2/M期。联合组凋亡率明显高于单药组( P<0.05),差异有统计学意义。结论 索拉非尼和PTX对肝癌huh-7细胞有增殖抑制及促凋亡作用, 两药联合表现为协同或相加作用。     

外源性P27kip1基因转染诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探索前列腺癌基因治疗的新途径。方法　用脂质体介导 p2 7kip1基因转染前列腺癌 PC- 3 M细胞 ,SABC免疫组化法检测癌细胞外源性 p2 7kip1基因表达 ;MTT比色分析检测癌细胞体外生长活性 ;流式细胞仪 ( FCM)分析细胞周期改变 ;DNA L adder、吖啶橙 -溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡。结果　发现外源性 p2 7kip1基因转移后 ,前列腺癌细胞 p2 7kip1蛋白水平显著增强 ( P<0 .0 1) ,体外生长抑制 12 .2 4%～ 3 6.5 2 % ( P<0 .0 1) ,出现 G0 / G1 期细胞周期阻滞及凋亡性“亚 G1期”峰 ,电泳可见典型的“梯状”条带 ,凋亡比率为 18.5 % ( P<0 .0 1)。结论　转染外源性p2 7kip1基因能增强对细胞周期的负性调节 ,显著诱导前列腺癌细胞凋亡 ,是前列腺癌基因治疗的潜在途径     

TNP-470对人肝癌细胞增殖和凋亡的实验研究

目的:研究TNP-470对肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖抑制效应和凋亡诱导作用。方法:采用四氮唑盐还原法(MTT)检测药物对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状条带,流式细胞仪检测细胞凋亡峰和细胞周期变化。结果:MMT法显示TNP-470可显著抑制SMMC-7721细胞体外增殖,DNA电泳显示典型的梯状条带,流式细胞仪检查有明显的凋亡峰出现,细胞周期阻滞在G2/M期,实验用药组细胞凋亡率明显增高,与对照组存在显著性差异(P<0.01)。结论:TNP-470对SMMC-7721体外直接杀伤作用不明显,但可诱导SMMC-7721细胞体外凋亡,诱导凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法：采用MTT、细胞计数检测DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;应用流式细胞仪检测DADS对HepG2细胞周期和细胞凋亡率的影响.结果：DADS使细胞增殖明显受抑制且抑制率呈药物浓度时间依赖性（P＜0.05）,DADS组细胞的倍增时间延长（P＜0.05）.与对照组比较DADS处理组G2/M期细胞比例显著增加,而G0/G1期细胞比例则明显下降,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）.结论;DADS对人肝癌细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.DADS能阻滞细胞周期在G2/M期,并诱导细胞凋亡.     

NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721增殖的影响

目的研究NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的影响。方法常规培养SMMC7721细胞,采用SN50（36μmol/L）阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内p65蛋白水平,MTT比色法检测细胞生长增殖,计算肿瘤细胞生长抑制率,PI染色、流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,观察NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721细胞周期及凋亡的影响。结果肝细胞癌SMMC7721细胞核内存在较高水平的p65蛋白。经SN50阻断后,MTT测定显示细胞的增殖受到明显抑制,并随时间的延长而愈渐明显,24、48、72h后细胞增殖抑制率分别为22.77%、33.33%和38.89%,与阻断前相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测发现实验组G1期细胞比例高于对照组差异有统计学意义（69.5% vs 56.5%,P〈0.05）,S期细胞比例明显降低,与阻断前相比差异有统计学意义（11.1% vs 28.6%,P〈0.05）,而细胞凋亡率在实验组为38.3%,对照组仅为23.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论NF-κB信号通路阻断诱导细胞周期于G1期停滞和细胞凋亡,从而抑制了SMMC7721细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与了肝细胞癌的生长增殖与发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给肝细胞癌带来新的治疗选择。     

EpCAM和CD13在不同肝癌细胞系中的表达和乙型肝炎病毒X蛋白对其表达的影响

目的：探讨肝癌干细胞标记物EpCAM和CD13在不同肝癌细胞系中的表达及乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对EpCAM和CD13表达的影响.方法：Western blot检测正常肝细胞系（LO2细胞）和肝癌细胞系（Huh7,Bel-7404,Hep3B,QSG-7701细胞）中肝癌干细胞标记物EpCAM和CD13的表达情况,同时建立稳定转染HBx基因的Bel-7404 （Bel-7404/HBx）细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测转染后EpCAM和CD13表达情况.结果：EpCAM和CD13在不同的肝癌细胞系中表达水平完全不同;转染HBx基因后EpCAM的mRNA和蛋白表达水平明显上调,分别为对照组的（2.04±0.16）和（2.03±0.25）倍;而CD13的mRNA和蛋白表达水平明显下调,分别为对照组的（69±8）％和（55±7）％.结论：肝癌干细胞可能存在多个干细胞亚群,在不同的肝癌细胞中干细胞标记物的表达水平不同,而HBX对不同亚群的影响也不同.     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

槲皮素对BGC-823胃癌细胞caspase-3、Bcl-2表达影响与抑癌作用研究

目的:研究槲皮素(quercetin,QUE)抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用四甲基噻唑氮蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性,流式细胞术(FCM)对不同浓度的QUE作用24 h的BGC-823细胞进行凋亡检测及其周期分析,用免疫组化法测定Bcl-2、caspase-3的表达率。结果:QUE对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用,在30~120μmol/L范围内可显著抑制BGC-823细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性。FCM检测后,BGC-823细胞周期阻滞于S期,药物浓度呈正相关。经QUE处理后BGC-823细胞株caspase-3蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达降低。免疫组化检测表明,用药组Bcl-2蛋白的表达下降,caspase-3蛋白的表达率增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:QUE诱导BGC-823细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于S期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调Bcl-2、上调caspase-3蛋白的表达有关。     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol,Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用;DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡;用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比,Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖,诱导其凋亡,光镜下可见明显的凋亡细胞;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT—PCR和免疫细胞化学检测显示,Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高,Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用,其机制可能是通过抑制P13K通路,增强诱导其凋亡有关。     

Anti-tumor effect and mechanism of Paeonol on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404]

OBJECTIVE: To investigate the anti-tumor effect of Paeonol (Pae) on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 and its molecular mechanisms. METHODS: Hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 was treated by Pae in various concentrations and different time points respectively; and then the cell proliferation was assayed by light microscope, MTT method. DNA agarose gel electrophoresis and TUNEL were used to detect the apoptosis. The expression of PTEN and Akt were examined by RT-PCR and immunocytochemical ABC method. RESULTS: Compared with the control groups Pae obviously increased the inhibitory and apoptosis rate of hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404. It also showed a typical apoptotic morphology and DNA depicted a ladder pattern characteristic of the apoptosis, indicating the presence of DNA fragmentation. RT-PCR and immunocytochemical ABC assay showed that Pae could increase the expression of PTEN and decrease the expression of Akt. CONCLUSION: Pae can increase the anti-hepatocellular carcinoma effect, and its mechanism may be the increase of apoptosis-inducing effect which is regulated by phosphatidylinositol-3-kinase.     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

低氧条件下三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡作用

目的：探讨低氧条件下三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法：分别在常氧和低氧（CoCl2 200μmol/L）条件下以2、4、8μmol／LAs2O3作用人肝癌Hep岛细胞,24、48、72小时后以MTr法检测细胞增殖抑制率,以AnnexinV／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,分析两种条件下As2O3对细胞增殖抑制率和凋亡率的影响。结果：常氧及低氧条件下细胞增殖抑制率,细胞早期凋亡率均随As2O3浓度增加及作用时间延长而升高（P〈0．05）。相同浓度As2O3相同作用时间,低氧条件下细胞增殖抑制率及凋亡率升高更为明显。结论：在低氧条件下As2O3促进细胞凋亡,抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用显著增强。     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。