肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

背景：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）可诱导不同胃癌细胞株的凋亡，但凋亡的途径尚不清楚。目的：通过研究TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的作用机制，为TRAIL的临床应用提供理论依据。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测SGC-7901胃癌细胞TRAIL受体（TRAILR），包括死亡受体TRAILR1、TRAILR2和诱惑受体TRAILR3、TRAILR4的表达；应用免疫组化法检测SGC-7901胃癌细胞Bcl-2和caspase-3的表达．并观察两者在不同浓度（50ng／ml和500ng／ml）的TRAIL处理后的变化。结果：SGC-7901胃癌细胞仅表达TRAILR1和TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL可引起SGC-7901胃癌细胞Bcl-2阳性表达，不同浓度的TRAIL作用12h、24h、48h其表达无影响；与对照组比较，不同浓度的TRAIL作用24h后SGC-7901胃癌细胞caspase-3表达均有显著增加（P〈0．01）。结论：TRAIL诱导胃癌细胞凋亡是因胃癌细胞仅表达TRAILR1、TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL是通过TRAILR1、TRAILR2增加细胞内caspase-3的表达而导致胃癌细胞凋亡，其诱导胃癌细胞凋亡的作用不受Bcl-2的影响。     

人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定

差异显示技术可用于研究多种组织中ｍＲＮＡ的表达差异。荧光差异显示技术 (ＦＤＤ)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法 ,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因。材料与方法一、细胞系人胃腺癌ＭＫＮ 2 8(高分化 )细胞 ,ＭＫＮ 45 (低分化 )细胞 ,购自日本ＲｉｋｅｎＣｅｌｌＢａｎｋ (ＲＣＢ) ,ＲＰＭＩ 16 40 ,10 %ＦＢＳ常规培养。二、ＲＮＡ提取ＭＫＮ 2 8和ＭＫＮ 45细胞按常规培养至对数生长期 ,待细胞融合约 6 0 %～ 70 %时 ,用Ｔｒｉｚｏｌ试剂 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 )处理 ,…     

普通型胃癌伴神经内分泌分化的免疫组织化学观察

目的研究普通型胃腺癌组织学类型、分化程度与神经内分泌（NE）分化的关系.方法随机收集88例手术切除石蜡包埋的胃癌标本,采用Syn、CgA及NSE等3种神经内分泌抗体,用免疫组织化学方法研究其神经内分泌的表达情况.结果在88例普通型胃癌中,38例（43.2%）表达Syn,13例（14%）表达CgA,10例（11%）表达NSE.58例（65.9%）至少有一种NE标记表达,其中18例表达2种标记,仅4例3种标记均表达,3种标记表达彼此相关（P＜0.05）.胃癌中以低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌阳性多见（P＜0.05）.NE阳性与肿瘤大小和浸润深度有关（P＜0.05）,但是NE标志阳性与淋巴转移及临床分期差异无统计学意义（P＞0.05）.结论选择3种NE标记可以检测出胃癌的NE分化,三者联合应用可提高NE分化的诊断率.胃癌的组织类型、分化程度及肿瘤大小和浸润深度与NE分化有关,而NE分化与淋巴结转移及临床分期无关.     

粘附法筛选胃癌细胞亚株

目的：筛选不同表型的胃癌细胞亚株。方法：用体外粘附法筛选对层粘素（ｌａｍｉｎｉｎ,Ｌｍ）有不同粘附力的ＭＫＮ－４５胃癌细胞亚株,并用Ｂｏｙｄｅｎ小室法和裸鼠接种法观察细胞亚株的体内、外侵袭转移能力。结果：经体外反复以层粘素粘附筛选,得到高粘附力的ＭＫＮ－４５Ｌｍ＾＋细胞亚株和低粘附力的ＭＫＮ－４５Ｌｍ＾－细胞亚株。Ｌｍ＾＋细胞体外对人工基膜Ｍａｔｒｉｇｅｌ的侵袭、移行能力及在裸鼠体内的成瘤性和肺转     

重组改构人肿瘤坏死因子对人胃癌细胞的药效学及其机制研究

背景:重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)与原型TNF-α相比具有高抗肿瘤活性和低毒性的特点。目的:研究注射用rmhTNF对人胃癌细胞的药效学及其机制。方法:体外培养人胃癌细胞株BGC-823和人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12,分别以不同浓度的rmhTNF和rhTNF-α进行处理,以MTT实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL染色和流式细胞术分析细胞增殖、凋亡情况和细胞周期分布;以蛋白质印迹法检测BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达;以免疫共沉淀技术检测rmhTNF与死亡受体5(DR5)间的相互作用。建立BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别予rmhTNF、rhTNF-α、5-氟尿嘧啶和0.9%NaCl溶液腹腔内注射,以CD34免疫组化染色检测移植瘤组织微血管密度(MVD)。结果:rmhTNF和rhTNF-α对BGC-823和HUVEC-12细胞均有抑制增殖和诱导凋亡作用,并能使G0/G1期细胞进入S期,rmhTNF的作用强于rhTNF-α(P0.05)。rmhTNF组移植瘤组织MVD显著低于其他各组(P0.05)。rmhTNF能使BGC-823细胞procaspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调,并能与DR5相互作用。结论:rmhTNF对人胃癌细胞具有抑制增殖、诱导凋亡、影响细胞周期分布和抑制肿瘤血管形成的作用,其机制可能为rmhTNF与DR5结合,从而改变细胞内凋亡相关蛋白水平。     

全反式维甲酸诱导LoVo细胞分化的动物实验研究

目的：研究经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导分化的结肠癌细胞株（ＬｏＶｏ细胞）在裸鼠体内的致瘤性。方法：将ＡＴＲＡ作用下经５次和１０次传代的ＬｏＶｏ细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤生长情况。用扫描电镜观察肿瘤细胞的超微结构,用免疫组化法分析肿瘤细胞癌胚抗原（ＣＥＡ）的表达及分泌粘液的性质。结果：经５次传代实验组与对照组裸鼠均有移植瘤形成,但实验组移植瘤生长明显受抑制（Ｐ〈０．０５）。经１０次传代实验组裸     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞

目的探讨抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义．方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Ｆａｓ单克隆抗体对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２的表达情况．．结果抗Ｆａｓ单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用．经抗Ｆａｓ单克隆抗体处理后,ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２蛋白表达无明显变化．．结论抗Ｆａｓ单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１细胞凋亡．抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Ｂｃｌ２表达无关     

三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

目的探讨三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线;25只Balb/c裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后均分为五组,不同剂量的三羟基异黄酮(0.5、1.0和1.5mg/kg)、生理盐水和DMSO进行瘤旁注射,透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织凋亡情况,免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。结果三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用;透射电镜发现三羟基异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;TUNEL染色法发现三羟基异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数(28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%)明显高于生理盐水和DMSO对照组(P<0.05),而两个对照组(11.8%±0.4%和11.7%±0.4%)之间差异无统计学意义。免疫组化法发现三羟基异黄酮注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率(11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%)明显低于两个对照组(P<0.05),而两个对照组(19.5%±0.6%和17.6%±1.4%)之间差异无统计学意义;而Bax蛋白阳性细胞率(20.0%±1.2%、24.7%±0.9%和29.3%±1.6%)明显高于两个对照组(P<0.05),而两个对照组(10.3%±0.4%和10.9%±0.9%)间差异无统计学意义;RT-PCR法发现三羟基异黄酮注射组的bcl-2mRNA条带强度随剂量增大而递减,并明显低于对照组(P<0.05);而baxmRNA条带强度递增,并明显低于对照组(P<0.05),而两对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用,通过下调bcl-2和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡,是其抗胃癌作用的机制之一。     

顺铂诱导人胃癌SGC-7901细胞

目的探讨顺铂对胃癌（ＳＧＣ７９０１）细胞凋亡的诱导作用，以揭示顺铂治疗胃癌的作用机制．方法选用不同剂量顺铂与人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１共同孵育不同时间后，应用光镜、电镜进行细胞形态学观察；细胞ＤＮＡ经特异性荧光染色后，用流式细胞仪分析细胞周期变化．结果细胞经顺铂处理后浓缩、深染、致密的染色质沿核膜下凝集、有凋亡小体形成．细胞周期分析Ｇ１期峰前出现典型的细胞凋亡峰，以２５ｍｇ／Ｌ顺铂作用２４ｈ，５０ｍｇ／Ｌ作用１６ｈ为例，定量分析凋亡细胞发生率分别为９３％和１４９％．结论顺铂可通过诱导人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１发生细胞凋亡达到消灭肿瘤细胞的目的．     

健脾中药诱导人胃癌细胞裸小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究健脾类中药复方四君子汤及以四君子汤等健脾药物为基础结合清热解毒、软坚散结中药组成的复方SRRS对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡的关系.方法采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型.实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只:SRRS方剂组,予240 g/L SRRS煎剂0.5mL/d灌胃;四君子汤组,予160 g/L四君子汤煎剂0.5 mL/d灌胃;对照组,予生理盐水0.5 mL/d灌胃,共40 d.应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)、电镜,结合流式细胞仪分析技术,观察SRRS方剂及四君子汤的抑瘤作用与肿瘤细胞凋亡率及形态学改变.结果四君子汤、SRRS方剂对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤抑瘤率分别为34%,47%,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)分别为:16%±3%,13%±3%,与对照组AI:3%±1%比较,显著提高(四君子组P＜0.01;SRRS方剂组P＜0.05,均为t检验);流式细胞分析示四君子汤组凋亡率:11%±6%,SRRS方剂组:12%±6%,均较对照组:7%±1%提高(t检验,P＜0.05);但四君子汤和SRRS方剂组之间的凋亡率TUNEL法和流式细胞分析均无差异.电镜下二中药治疗组见较多凋亡细胞和凋亡小体;对照组凋亡细胞和凋亡小体极少.结论中药四君子汤、SRRS方剂在体内的抑瘤作用与诱导胃癌细胞凋亡有关,其诱导细胞凋亡作用可能主要与健脾药物有泄?诱导肿瘤细胞凋亡可能是健脾药物抗癌作用的机制之一.     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡

目的探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义.方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas 单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了SGC -7901细胞表面Bcl-2的表达情况..结果抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用. 经抗Fas单克隆抗体处理后,SGC-7901细胞表面Bcl-2蛋白表达无明显变化. .结论抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡. 抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Bcl-2表达无关.     

幽门螺杆菌对人胃癌细胞株AGS侵袭力的影响

背景：幽门螺杆菌（H．pylori）为人类胃癌的Ⅰ类致癌原,但其在胃癌演进中的作用仍未完全阐明。目的：体外观察Hpylori对人胃癌细胞株AGS侵袭力的影响。方法：将AGS细胞与H．pylori标准菌株NCTC11637共培养72h．光学显微镜观察12—72h时细胞形态变化,扫描电镜观察24h时细胞形态变化。侵袭小室实验检测共培养24h后AGS细胞的侵袭力。结果：AGS细胞与H．pylori共培养12h后,细胞渐出现变形,伪足增多、伸长．24h和48h时细胞间相互离散,伸出细长伪足,呈“蜂鸟”表型,60h和72h时细胞出现空泡样变,死亡逐渐增多;扫描电镜下可见Hpylori黏附于AGS细胞表面,细胞变形明显,伸出细长伪足。侵袭小室实验显示与H．pylori共培养24h的AGS细胞,每200倍视野下穿膜细胞数显著高于PBS对照组（130．4±11．5对87．1±9．3．P〈0．01）。结论：Mpylori感染可影响人胃癌细胞株AGS的细胞形态,增加细胞侵袭力。     

大蒜油抑制人胃癌BGC-823细胞的生长和诱导分化的作用

目的从细胞和基因水平阐明大蒜油对人胃癌ＢＧＣ８２３细胞的作用机制．方法用激光扫描共聚焦显微镜及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等技术进行分析．结果大蒜油对癌细胞形态、增殖和致瘤性有明显影响．结论首次发现大蒜油对肿瘤细胞的作用是通过影响ｐ５３，ｐ２１等的表达水平．以上结果提示大蒜油有诱导肿瘤细胞分化的作用．     

Periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的机制研究

背景：前期研究发现periostin过表达可增强人胃癌细胞株SGC-7901对顺铂和5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导的细胞凋亡的抵抗能力。目的：探讨periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的可能机制。方法：Periostin稳转组和空载体稳转组SGC-7901细胞分别以5μmol／L顺铂或10μmol／L5-Fu处理24h或不予化疗药物处理,其中periostin稳转组在化疗药物处理前可接受或不接受Akt特异性抑制剂MK-2206（1μmol／L）预处理30min。以蛋白质印迹法检测各组细胞的总Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、p53蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：periostin稳转组SGC．7901细胞Akt磷酸化水平明显高于空载体稳转组,两组间总Akt无明显差异。在经顺铂或5-Fu处理的各组SGC．7901细胞中,periostin稳转组p53蛋白表达和细胞凋亡率明显低于空载体稳转组,而MK-2206预处理可在一定程度上逆转periostin对p53表达的抑制作用及其诱导的凋亡保护效应。结论：通过激活Akt通路抑制p53表达可能是periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的机制之一,有望作为胃癌治疗的潜在靶点。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导细胞凋亡蛋白酶途径依赖的人胃癌细胞株MKN45凋亡

背景：表没食子儿茶素没食于酸酯（EGCG）可诱导人胃癌细胞株MKN45凋亡，但其凋亡信号的传导途径尚不清楚。目的：研究EGCG诱导人胃癌细胞株MKN45凋亡的作用是否通过细胞凋亡蛋白酶（caspsse-3）依赖途径，为其临床应用提供进一步的理论依据。方法：采用四甲摹偶氮唑蓝（MTT）比色法检测EGCG和caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk作用后MKN45细胞的存活率：采用Annexin V-FITC＋PI双染色法检测EGCG和caspase-3抑制剂作用后MKN45细胞的凋亡率：采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测EGCG和caspase-3抑制剂作用后MKN45细胞内caspase-3活性的改变。结果：EGCG可诱导MKN45细胞凋亡，且细胞内caspase-3活性显著升高。而caspase-3抑制剂干预后，EGCG抑制MKN45细胞生长的作用明显减弱，细胞凋亡率下降，caspase-3活性显著下降。结论：EGCG可诱导MKN45细胞凋亡，该作用可被caspase-3抑制剂显著抑制，提示EGCG诱导MKN45细胞凋亡的作用是通过caspase-3依赖途径的。     

人胃癌细胞端粒酶的亲和纯化

尽管已意识到端粒酶可能是目前已知特异性最好的肿瘤标志，但端粒酶的临床应用迄今未能得以普及推广，其原因之一是人端粒酶的蛋白组份仍不十分清楚．为此，我们利用端粒酶核糖核蛋白的特性，尝试建立一种亲和纯化人端粒酶的手段，以期获得具有完整活性的亲和纯人胃癌端粒酶并推动端粒酶结构及应用性研究的深入．１　材料和方法酶切鉴定人端粒酶ＲＮＡ（ｈＴＲ）质粒（美国Ｖｉｌｌｅｐｏｎｔｅａｕ博士惠赠），所切下的ｈＴＲｃＤＮＡ片段用生物素标记后与链霉亲和素琼脂糖珠（Ｓｉｇｍａ）偶连，用高端粒酶活性的胃肿瘤细胞ＳＧＣ７９０１…