肥大细胞及其活化相关抗体在自身免疫病中的作用研究进展

肥大细胞(MC)的经典作用是介导过敏反应.近年来,MC在炎症、肿瘤、器官纤维化特别是自身免疫病等疾病中的作用引起关注.MC颗粒内炎症介质是其主要效应物,MC活化可使其效应物释放并发挥作用.除过敏原与过敏原特异性IgE结合途径之外,IgE和IgE受体(FcεRI/Ⅱ)、抗IgE和抗FcεRI抗体也可致MC活化.IgE与抗IgE抗体、IgE与FcεRI、FcεRI和抗FcεRI抗体不仅具有膜结合形式也存在着可溶性免疫复合物或配受体复合物,膜结合与可溶性的存在形式和存在比例决定MC激活或抑制,抗IgE和抗FcεRI抗体可能与自身免疫病发生发展相关.     

IgE高亲合力受体的研究进展

IgF Fc段高亲和力受体(FcεRⅠ)在变态反应性疾病中起重要作用.典型的FcεRⅠ是αβγ2异四聚体复合物,表达在超敏反应效应细胞(即肥大细胞和嗜碱性粒细胞)膜表面.IgE与FcεRⅠ结合,导致肥大细胞和嗜碱粒细胞激活,并释放和合成各种炎症性介质和细胞因子等.IgE高亲和力受体也表达于嗜酸粒细胞和抗原提呈细胞(APC)如单核细胞、郎格汉斯细胞和树突状细胞表面.表达在抗原提呈细胞表面的FCεRⅠ是αγ2三聚体形式,它不能引起细胞脱颗粒,但可诱导炎症性细胞因子基因表达,并以IgE依赖性方式放大APG的抗原提呈效应.本文对FcεRⅠ的研究进展进行综述.     

IgE低亲和力受体基因的克隆、表达及初步鉴定

目的利用基因重组的方法建立IgE低亲和力受体（FcεRⅡ）基因的原核表达系统。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞扩增FcεRⅡcDNA基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建原核表达载体FcεRⅡ-pGEX-4T-1,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,诱导表达FcεRⅡ蛋白,通过割胶回收纯化,并用Western blot检测FcεRⅡ的表达。结果测序表明所扩增FcεRⅡcDNA基因,与已报道的序列一致。获得的重组蛋白经Western blot鉴定可以和人IgE特异性结合。结论成功构建了FcεRⅡ-pGEX-4T-1表达载体,获得了能和人IgE特异性结合的重组蛋白,为下一步FcεRⅡ单克隆抗体的制备及应用研究打下了基础。     

Fcγ和Fcε受体在小鼠三叉神经节的表达

目的 检测正常小鼠三叉神经节(TG)是否表达免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白E(IgE) Fc段Fcγ受体和Fcε受体,及其在过敏小鼠TG中的变化.方法 通过腹腔注射OVA和铝剂,建立小鼠过敏性结膜炎(ACJ)模型.EHSA检测血清总IgE.用Westernblot和免疫荧光检测Fcγ受体和Fcε受体的表达.结果 小鼠TG表达Fcγ受体和Fcε受体.其中IgG激活型高亲和力受体FcγRI和抑制型低亲和力受体FcγRⅡ只表达在小鼠TG神经元上,而IgG激活型低亲和力受体FcγRⅢ表达在小鼠TG中的卫星胶质细胞上.IgE激活型高亲和力受体FcεR Ⅰ表达在小鼠TG神经元上,而IgE低亲和力受体FcεRⅡ同时表达在小鼠TG神经元和卫星胶质细胞上.与正常小鼠比较,ACJ小鼠的血清总IgE水平升高,TG的FcεR Ⅰ和FcγRⅡ表达增加(P＜0.05).而ACJ小鼠的FcεRⅡ和FcγRⅠ表达下降(P＜0.05).FcγRⅢ在正常和ACJ小鼠TG中的表达无显著差别.结论 小鼠TG表达的Fcγ和Fcε受体可能参与ACJ及其他过敏性疾病的发生和发展.     

人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定

利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。     

高亲和力IgE受体

高亲和力IgE受体（FcεRI）是一种异口聚体结构，主要表达于肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面。当多价抗原与IgE交联时，受体就发生微聚集而激活，经蛋白激酶活化、磷脂酰肌醇水解、Ca2+流动等信号传导过程，使肥大细胞、嗜碱粒细胞释放炎性介质、分泌细胞因子、表达粘附分子等生物学反应，参与过敏性炎症的形成。近年发现嗜酸粒细胞、郎罕氏细胞、单核细胞也可表达这种受体，与这些细胞的抗寄生虫感染，抗原提呈和炎症反应有关。     

低亲和力IgE受体研究进展

本文着重介绍近一、二年来低亲和力IgE 受体(FcεR 2)的研究进展。FcεR 2是分子量为45KDa 的糖蛋白,它的不同降解片段显示出多种生物学特性。FcεR 2的表达受IL-4、IFN-r、PGE_2、IgE 分子、抗FcεR 2 McAb 及FcεR 2分子自身的降解产物等的调控。FcεR 2/CD23及其裂解产物参与了IgE 调节、B 细胞调节、介导IgE 依赖性ADCC 及其它一些重要的生理和免疫学过程。FcεR 2及其裂解产物是机体调节免疫反应的一个重要组成部分。     

FcεRⅠ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基，并用重组蛋白制备单克隆抗体。方法用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεRⅠα蛋白基因，经T-A克隆、亚克隆至pET28a（＋）原核表达载体，将重组质粒转化到大肠杆菌BL．21．STAR（DE3），IPTG诱导表达FeaRIOt亚基蛋白，通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白；并用其免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备抗FeaRIOt亚基单克隆抗体，用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因，且测序正确；构建原核表达质粒FcεRⅠα-pET28a（＋）；成功建立4株稳定分泌抗FcεRⅠα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为G101、C22、G113、G42。通过细胞免疫荧光实验证实，4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基。结论成功利用基因重组技术制备了FcεRⅠα亚基蛋白，制备了4株效价高、特异性好的抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体，为FcεRⅠα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础。     

人FcεRIα亚基的细胞外区的克隆表达和抗血清的制备及功能

为获得有生物活性的FcεRIα亚基细胞外区及多克隆抗体 ,并探知其功能 ,构建FcεRIα亚基的细胞外区的原核表达载体PBAD/gIIIA/FcεRIα,经表达、纯化后用斑点杂交法检测其活性。纯化制品免疫兔子获得抗血清 ,并研究抗血清对FcεRI的作用。结果发现 ,经原核表达出的FcεRIα亚基的细胞外区能与IgE结合 ;获得具有特异性抗FcεRI的抗血清 ,可能抑制嗜碱粒细胞脱颗粒。实验提示原核表达系统能产生有生物学活性的FcεRIα亚基的细胞外区 ,用其制备的抗血清能够识别FcεRIα亚基的细胞外区 ,可能抑制嗜碱粒细胞脱颗粒 ,为研究FcεRIα表达调节、对其的封闭作用及研究过敏性疾病的发病机制奠定物质基础     

人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

目的通过基因重组的方法表达IgECε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用．并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT—PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgECε3-Cε4cDNA片段,克隆至pET28a（＋）构建原核表达载体IgECε3-Cε4-pET28a（＋）,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）,诱导表达IgECε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力,并用UniCAP100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定：用表达蛋白免疫BALB／c小鼠,制备抗鼠血清,用Western—blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgECε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量（Mr）同预期的结果相一致;IgECε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgECε3-Cε4-pET28a（＋）表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基特异性识别的IgECε3-Cε4区蛋白．并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础。     

高表达FcεR1α和共表达NPY-EGFP的RBL细胞系构建及生物学功能检测

为构建一种高表达高亲和力IgE受体α链(high affinity IgE receptor alpha chain,FcεR1α)和共表达新型标志物神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的 RBL-2H3细...     

免疫调节剂对呼吸系统过敏性疾病的影响及作用机制

对过敏性疾病发病机制深入研究所取得的最新研究成果,为该类疾病的治疗带来新的突破。由于很多治疗呼吸系统过敏性疾病的免疫调节剂在动物模型中是有效的,但在临床试验中疗效却不显著。因此,对免疫调节剂的临床试验的关注显得非常必要。目前已应用于临床和正在进行临床试验的免疫调节剂主要包括抗IgE单克隆抗体（mAb）、Th2细胞因子阻断剂、转录因子调节剂和Toll样受体（TLR）激动剂等。本文就免疫调节剂对呼吸系统过敏性疾病的影响及相关机制作一综述。1抗IgE mAb奥马珠单抗（omalizumab）是一种抗人IgE mAb,能识别并结合到IgE分子的Fc段,形成可溶性免疫复合物,随后被网状内皮系统清除。由于奥马珠单抗的结合位点与IgE分子结合IgE高亲和力受体（FcεRⅠ）的位点相同,用奥马珠单抗治疗后,发挥有效作用的IgE单体减少,能与细胞结合的IgE数量也相应减少。     

自体全血注射对自身反应性慢性荨麻疹患者血浆IgG抗FcεRI自身抗体、总IgE水平和嗜碱性粒细胞FcεRIα表达的影响

目的研究ASST阳性慢性自发性荨麻疹(CSU)患者接受自体全血注射(AWBI)治疗前后血浆IgG抗FcεRI、总IgE以及嗜碱性粒细胞FcεRIα表达的变化,探讨AWBI治疗机制。方法收集ASST阳性CSU患者80例,随机分成AWBI组和对照组各40例,AWBI组接受每周1次自体全血注射治疗,共12次,同时给予第2代抗组胺药治疗,对照组单纯使用第2代抗组胺药治疗。连续治疗12周,评估治疗前后2组荨麻疹活动程度评分(UAS)的差异。治疗前后用ELISA或流式细胞术检测AWBI组血浆IgG抗FcεRI、总IgE及嗜碱性粒细胞FcεRIα表达的变化。另外选取25例健康人作为体外试验的健康对照组。结果治疗后AWBI组显效率为60%(24/40),显著高于对照组显效率27.27%(9/40)(P0.01)。AWBI组治疗后血浆IgG抗FcεRI质量浓度以及嗜碱性粒细胞FcεRIα表达显著下降(P均0.05);总IgE水平无明显变化(P0.05)。这3种免疫因子的基线值与UAS评分变化值均呈不同程度的正相关。结论自体全血注射治疗ASST阳性慢性荨麻疹能明显改善临床症状,其机制与下调血浆IgG抗FcεRI与嗜碱性粒细胞FcεRIα表达有关。     

人IgE重链恒定区CH4亚基的克隆、原核表达及纯化

血清中高水平的IgE是哮喘、过敏性鼻炎、慢性荨麻疹等过敏性疾病的标志,而IgE与效应细胞上的IgE高亲和力受体(EcεRI)结合则是这些Ⅰ型变态反应的关键步骤[1].很长时间以来,找到抑制它们结合从而治疗过敏性疾病的方法,一直是过敏性疾病研究的重点.从已有的研究得知,IgE与EcεRI结合的关键部位是其重链恒定区的CH2-CH4,也就是Ige的Fc段,其中3个亚基的作用各有不同[2].本研究利用分子克隆技术,从过敏性个体的外周血淋巴细胞中克隆出中国汉族人IgECH4的cDNA,构建了相应的质粒表达载体,原核表达CH4蛋白,并鉴定其活性,为进一步研究CH4蛋白在lgE与EcεRI结合过程中的作用提供物质基础.     

IgE的Fc受体表达调节

根据IgE Fc 受体(FcεR)对IgE 的亲和性不同,将FcεR 区分为高亲和性FcεR_1(存在于肥大细胞、嗜硷细胞表面)和低亲和性FcεR_2(存在于嗜酸细胞、巨噬细胞、T/B淋巴细胞表面)。作者的研究证明FcεR_2不仅与变态反应性疾患有关,也与淋巴细胞活化机制有关。FcεR_2在细胞表面可被未知的蛋白分解     

IgE高亲和力受体β链基因多态性与湖北汉族人变应性哮喘易感性的研究

目的探讨IgE高亲和力受体β链( high-affinity IgE receptor β gene, Fc ε RI β)基因启动子-109位C/T和编码区Glu237Gly基因多态性与湖北汉族人变应性哮喘易感性及血浆总IgE的关系. 方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测 Fc ε RI β基因启动子区-109位和编码区Glu237Gly两位点多态性,采用病例-对照法研究了216例变应性哮喘患者和198名对照. 结果 (1)湖北汉族人变应性哮喘患者 Fc ε RI β基因启动子区-109位T/T、T/C和C/C基因型频率是0.403、0.491和0.106;与对照相比差异无显著性(χ2=0.384,P＞0.05),但变应性哮喘组T/T基因型患者血浆总IgE对数值(2.539±0.8325)与T/C基因型的对数值(2.278±1.089)和C/C基因型的对数值(2.323±0.7852)相比差异具有显著性.(2)变应性哮喘患者 Fc ε RI β基因Glu237Gly位点Glu/Glu、Glu/Gly和Gly/Gly基因型频率为0.579、0.370和0.051,与正常对照相比差异具有显著性(χ2=13.62,P＜0.01),变应性哮喘患者Gly/Gly基因型血浆总IgE对数值为(2.622±0.9374),与Glu/Glu和Glu/Gly相比差异具有显著性. 结论 Fc ε RI β基因启动子区-109位T/T基因型与血浆总IgE高度相关,编码区237位Gly/Gly基因型与中国湖北汉族人变应性哮喘及血浆高IgE相关.     

FcεRⅡ的研究进展

1966年Ishizaka 发现IgE,以后对IgE抗体系统研究取得很大成果。早期的研究局限在IgE 介导的变态反应,近十年来IgE 生物合成与调节、IgE 的Fc 受体(FcεR)已成为许多研究的主题。人和动物肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的FcεR 已被鉴定,以后在     

TAP1基因和FcεRIβ基因多态性与哮喘及其表型的相关性研究

目的：为研究TAP1基因和FcεRIβ基因多态性与哮喘及其表型的关系。方法：选择TAP1基因中微卫星DNA标志-TAP1及FcεRIβ基因中RFLP位点-RsaI,采用Amp-FLP和RFLP方法在散哮喘病人中进行分析。并检测其血清IgE水平,过敏原发皮试及气道高反应性,应用相关分析观察TAP1及RsaI等位基因与哮喘及其表型的关系。结果：RsaI位点等位基因片段与哮喘及气道高反应性相关,未见TAP1与哮喘或其表型相关。结论：FcεRIβ基因可能是哮喘发病的一个候选基因,TAP1基因可能与哮喘的发病无关。     

FcεRⅠ信号传导途径与过敏性疾病的治疗

IgE的高亲合力受体FcεRⅠ在过敏性疾病中充当重要角色。FcεRⅠ所介导的信号传导途径是引起过敏症状的一条主要通路。通过阻断信号通路以治疗过敏性疾病已成为研究的一个焦点 ,本文就FcεRⅠ信号阻断方面的研究进展作一综述。     

大鼠重组IgE Fc区CH2-3的原核表达及活性研究

目的 研究大鼠IgE的Fc区CH2-3的生物学活性。方法 构建大鼠IgE的Fc区CH2-3的原核表达质粒pBAD／gⅢA／Ch2-3，并转化入TOP10中，阿拉伯糖诱导表达、周质腔抽提、Ni-NTA金属鳌合柱纯化获得大鼠IgE的Fc区CH2-3，细胞及动物水平检测蛋白质生物学活性。结果 原核系统表达出大鼠IgE的Fc区CH2-3，它能够阻断OVA激发的RBL-2H3的脱颗粒反应，阻断被动皮肤实验。结论 大鼠IgE的Fc区CH2-3能够封闭IgE高亲和力受体，阻断过敏反应。