rHu TNF-α促进人胚和小鼠胸腺细胞增殖作用的研究

本文观察了rHuTNF-α对ConA诱导的10～15日龄BALB/C乳鼠胸腺细胞、脾细胞以及PHA或TPA诱导的20～32周龄人胚胸腺细胞增殖的调节作用。结果表明:rHuTNF-a对上述增殖作用均有显著的促进作用,并且呈剂量依赖关系;rHuTNF-a对rHuIL-2促进ConA诱导的小鼠胸腺细胞和脾细胞的增殖反应有协同作用。此结果提示rHuTNF-a在促进丝裂原诱导的胸腺细胞增殖作用中无明显种属特异性,并且对于了解TNF-a在胸腺细胞发育中的作用以及在某些病毒性感染疾病患者血清中高水平的TNF-a活性与胸腺功能改变的关系方面均有一定的意义。     

CD_3McAb对PHA和TPA诱导人胚胸腺细胞增殖反应调节作用的研究

本文观察了CD3 McAb 对PHA 和TPA 诱导的20～36周龄人胚胸腺细胞增殖反应的调节作用。结果表明:CD3McAb 不能单独诱导人胚胸腺细胞增殖反应,但却能显著地促进TPA 诱导的人胚胸腺细胞增殖和抑制PHA 诱导的人胚胸腺细胞增殖,并呈剂量依赖关系;加入外源性rHulL—2能促进人胚胸腺细胞对CD3McAb 诱导的应答反应,而rHuIL—1则无此作用。此结果对于了解人胚胸腺表达CD_3抗原细胞的功能水平及CD_3分子的生物学作用有一定的意义.     

CD_2、CD_3、CD_4和CD_8四种McAb对rHuIL-2诱导人胚胸腺细胞杀伤功能的调节作用

本文观察了人胚胸腺细胞(16～40周龄)对CD_2、CD_3、CD_4和CD_8四种McAb诱导的增殖反应及这四种McAb对rHuIL-2诱导的人胚胸腺细胞杀伤功能的影响。结果提示:除CD_3McAb能诱导很弱的人胚胸腺细胞增殖外,其它三种McAb均不能诱导其增殖;CD_3McAb对rIL-2所诱导的增殖有明显的协同效应,但对IL-2诱导的人胚胸腺细胞杀伤活性却有显著的抑制作用;而CD_4、CD_8两种McAb则有显著的促进作用;CD_2McAb无明显影响。本文还对McAb可能的调节机理进行了讨论。     

rHuIL-2诱导胎儿胸腺细胞中NK和LAK活性水平与胎龄关系的研究

高剂量rHuIL-2可诱导人胸腺细胞分化为具有NK和LAK活性的杀伤细胞。本文对用rHuIL-2诱导人胚胸腺细胞NK和LAK活性与胎龄的关系以及对诱导的杀伤细胞的形态学和表型进行了研究。结果表明:①高剂量rHuIL-2可诱导人胚胸腺细胞分化为具有NK和LAK活性的杀伤细胞。②小于16周龄的胎儿胸腺细胞经过rHuIL-2诱导后,不仅诱导的活化细胞数少,而且NK和LAK功能明显低于24周龄以上的胎儿胸腺细胞;24周以上胎龄的胎儿胸腺细胞经rIL-2诱导后的NK和LAK活性接近新生儿。③rIL-2诱导的人胚胸腺细胞形态学上主要为大颗粒淋巴细胞,其表型为NKH_1~+,CD_1(?)_-的细胞。此结果不仅对于深入了解不同胎龄胸腺绍胞在功能上的个体发育程度提供了客观的指标,而且对于选择适当胎龄胎儿胸腺细胞诱导LAK和NK细胞,作为恶性肿瘤的生物治疗以及探讨外周血NK细胞的来源均有一定的意义。     

人胚胎胸腺细胞对PHA的反应性

本文研究人胚胎胸腺细胞对PHA的反应性,水囊引产获得21—32周妊娠的的胚胎,制备胸腺和骨髓细胞悬液并进行体外培养,以PHA作为有丝分裂原。结果表明胸腺细胞本身对PHA或同种异型非T细胞均无明显反应能力。当培养中有自身骨髓细胞或同种异型非T细胞存在时,PHA就能诱导胸腺细胞发生显著的增殖。这说明胚胎胸腺细胞只有在PHA和非T细胞两者提供的双重信号作用下才能被激活发生增殖。     

IL_2,IL—4和IL—6对T细胞活化增殖的影响途径比较

单一的 PHA/PMA/OKT3不能诱导纯化的静止 T 细胞发生增殖反应,这为我们比较外加 IL—2/IL—4/IL—6对 T 细胞活化增殖的影响途径提供了条件.PHA 诱发了静止 T 细胞对 IL—2/IL—4/IL—6的增殖反应,而 anti—Tac 单抗只能抑制由 IL-2介导的增殖反应.PMA 能够诱导静止 T 细胞对 IL—2/IL—4发生增殖反应,而不对 IL—6发生增殖反应.OKT3单抗只能诱导静止 T 细胞对 IL—2发生增殖反应.免疫抑制剂环孢霉素 A(C_(?)A)均能抑制 PHA 联合 IL—2/IL—4/IL—6所诱发的 T 细胞增殖反应,但其抑制作用的动力学观察却得到三种完全不同形式的抑制结果.这些结果表明,这三种淋巴因子各有其独自的途径使T 细胞活化增殖.     

rHuIL-6和rHuIL-2对人杂交瘤细胞增殖、克隆化以及抗体产生的影响

rHuIL6对人一鼠杂交瘤86—1、87—3和人—(人×鼠)杂交瘤C_的增殖、克隆化和抗体分泌均有明显的促进作用。rHuIL-2能提高C_8杂交瘤的增殖水平。rHuIL-6和rHuIL-6和rHuIL-2同时应用对人—鼠杂交瘤86—1和87—3细胞的克隆化效率和抗体分泌水平有明显的协同作用。     

PD-L1信号对T细胞体外激发的调节作用

目的　探讨PD L1信号在PHA体外激发体系中对人外周血T细胞的协同调节作用。方法　采用 10 μg/mlPHA刺激人外周血T细胞体外培养体系 ,加入转基因细胞PD L1/L92 9混合培养 ;免疫荧光标记和流式细胞仪分析T细胞表型及细胞周期 ;3 H TdR掺入法观察T细胞的增殖 ;ELISA法检测T细胞对IL 2和IFN γ的产生。结果　PD L1转基因细胞在PHA激发T细胞增殖的培养体系中 ,具有显著下调T细胞活化表型 ,抑制T细胞对PHA促增殖的反应性 ,这种抑制效应与其阻断T细胞于G0 /G1细胞周期及使活化T细胞分泌IL 2和IFN γ的水平下降有关。同时还发现PD L1信号能抑制PHA介导的T细胞活化诱导凋亡。结论　PD L1信号在体外PHA激发T细胞培养体系中 ,具有显著的负性调节其活化增殖和相应功能的作用     

IL-7对杀伤性T淋巴细胞发育分化的调节

IL-7主要的生物学作用是促进B 前体细胞的增殖。此外,还能促进T 细胞的活化和增殖。本文作者应用rHuIL-7通过对同种异体抗原、病毒抗原和丝裂原诱导的人CTL 杀伤作用调节的研究,表明rHuIL-7不仅可在杀伤性T 细胞诱导过程中促进T 细胞增殖,使细胞数增加1.5～4倍,而且增加杀伤性细胞活性至80倍。进一步对丝裂原刺激纯化     

中药芦笋促T细胞有丝分裂活性的观察

低浓度芦笋原汁(0.1～1.0％)可明显促进正常小鼠胸腺细胞的增殖,也可刺激正常小鼠脾脏细胞的增殖,但对裸鼠脾脏细胞没有任何作用。由此提示,芦笋具有促T淋巴细胞有丝分裂的活性,而对B淋巴细胞没有作用。与常用的T细胞促有丝分裂素植物血凝素(PHA)及刀豆蛋白A(ConA)不同,芦笋原汁对人、绵羊、豚鼠和鸡的红细胞均无凝集作用。     

抗CD43单克隆抗体对B细胞增殖及抗体分泌的影响

目的：研究抗CD43 mAb（DFT1）对B细胞增殖及其抗体分泌的影响。方法：细胞培养，^3H-TdR掺入法测定不同时间抗CD43 mAb对B细胞增殖的影响，ELISA测定其对PWM诱导系统内抗体分泌的水平。结果：单独加入抗CD43 mAb对B细胞增殖无影响，但在TPA诱导系统内加入抗CD43 mAb，培养72h可见显著增殖反应，为单独加入TPA引起增殖反应的3倍，在培养开始加入抗CD43 mAb可引起显著的增殖反应，而延迟加入抗CD43 mAb对B细胞增殖的影响不显著。抗CD43 mAb对PWM诱导系统内B细胞的抗体分泌不产生影响。结论：抗CD43抗体可引起TPA诱导系统内B细胞的显著增殖。而PWM诱导系统内B细胞抗体的分泌无影响。     

人CD137单抗诱导不同状态T细胞增殖和凋亡的研究

为了研究一种新的T细胞共刺激分子—CD137对不同状态T细胞增殖和凋亡的双重调节作用。采用3 H TdR掺入法测定T细胞增殖 ,用流式细胞仪测定细胞凋亡。结果显示 :(1)CD137单抗可与T细胞表面的CD137抗原结合 ,明显增强PHA刺激T细胞增殖 ,使T细胞增殖指数较PHA单独作用高 2～ 3倍 ,但CD137单抗单独不能刺激T细胞增殖 ;(2 )对于慢性活化的T细胞 ,CD137单抗可协同PHA诱导T细胞凋亡 ,使T细胞凋亡率从PHA单独作用的 19 2 0 %增加到 36 31% ,CD137单抗单独并不能诱导慢性活化T细胞凋亡。CD137单抗一方面可协同PHA刺激静止状态T细胞的增殖 ,另一方面可协同PHA诱导慢性活化T细胞凋亡 ,对T细胞起双重调节作用。     

IL-1和TNF对PHA刺激T细胞增殖反应的协同作用

在PHA(1μg/ml)刺激下,IL-1或TNF均能诱发静止T细胞发生增殖反应,其最适浓度为IL-1(50U/ml)和TNF(200U/ml)。利用其最适浓度,联合作用于PHA刺激T细胞,其增殖反应增强了25％,但仍低于PHA联合10％的Mφm所诱发的增殖反应。单克隆抗体anti-Tac(p55)完全阻断了由PHA联合IL-1所诱发的增殖反应,但对PHA联合TNF所诱发的增殖反应只能部份地抑制。这些结果表明,TNF除了同IL-1一样具有通过IL-2途径来诱导T细胞活化外,还有着其他的途径,提示T细胞活化增殖的第二信号可由多种单核因子提供,而最大的增殖反应的发生,则是多种单核因子和其他因素协同作用的结果。     

一种高度敏感的改良的IL—1检测方法

采用CTLL-2检测IL-1诱导小鼠胸腺瘤细胞系EL_4产生IL-2活性,建立了一种间接检测IL-1的方法。通过对多种影响因素进行探讨,选择了较适的诱导血清浓度,细胞浓度,诱导时间和转移诱导上清稀释度,从而使检测IL-1的敏感性达10~(-3)～10~(-4)U/ml(2.5～25×10~(-4)Pg/ml,约为小鼠胸腺细胞检测方法的10~2～10~3倍),整个检测流程可在40小时内完成。若用CTLL-2和EL_4细胞同时培养的一步法检测,敏感性约为10~(-1)U/ml,但30小时内可完成检测。此法不受高浓度rHuTNF-α、rHuTNF-β、rHuIL-6干扰,IL-2、ConA、PHA、LPS和SEB对检测系统只有较弱的影响,但A23187可明显地干扰检测系统。因此,本方法可用于基础和临床研究过程中不同来源的IL-1生物学活性检测。     

人不同来源T细胞对丝裂原、PMA和A23187的反应性比较

本文比较了胎儿胸腺细胞、正常成人外周血Ｔ细胞及儿童扁桃体Ｔ细胞对丝裂原ＰＷＭ、ＰＨＡ和ＣｏｎＡ、ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ和Ｃａ２＋导入剂Ａ２３１８７的反应性。结果表明：胎儿胸腺细胞对ＰＷＭ的反应对ＰＨＡ和ＣｏｎＡ的反应性很弱；正常成人外周血Ｔ细胞对ＰＨＡ的反应性最强，对ＰＷＭ和ＣｏｎＡ的反应性较弱；儿童扁桃体Ｔ细胞对３种丝裂原的反应性均很强；ＰＭＡ单独作用能强烈诱导儿童扁桃体Ｔ细对正常成人外周血Ｔ细胞及胸腺细胞作用较弱；ＰＷＭ和ＰＭＡ对胎儿胸腺细胞及正常成人外周血Ｔ细胞均有明显协同作用，但对儿童扁桃体Ｔ细胞无协同作用；Ａ２３１８７单独作用对３种Ｔ细胞的增殖作用均很弱，Ａ２３１８７对ＰＷＭ诱导的增殖均有部分抑制作用。这些结果对于认识处于不同发育阶段及不同部位的的活化途径和功能有一定意义。     

rhGH对Jurkat细胞中NF-κB活性的影响

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)对Jurkat细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路活化的影响.方法:(1)将含荧光素酶报告基因的质粒pNF-κB-luc转染入T淋巴细胞系-Jurkat E6-1细胞中,在培养液中加入梯度浓度rhGH.(2)用梯度浓度rhGH直接刺激Jurkat细胞,然后用RT-PCR方法检测IκBα、IKK1 mRNA表达情况.结果:各浓度rhGH对转染pNF-κB-luc的Jurkat细胞中荧光素酶表达有促进作用,而对IκBα、IKK1 mRNA表达无显著影响.结论:rhGH对PHA活化的T细胞NF-κB的活化有促进作用,而对与NF-κB活化相关的IκBα和IKK1的mRNA表达无显著影响.     

FLT10A—一类抗LFA-1单克隆抗体的免疫学功能

对FLT 10 A性质的进一步研究表明,FLT 10 A能抑制T细胞的1L-2产生及其受体表达,抑制T细胞对PHA+rIL-2及TPA的增殖反应,但不能抑制经Con A诱导的母化T细胞依赖IL-2的增殖反应。动态实验还表明FLT 10 A的抑制作用只发生于淋巴细胞增殖的早期阶段。另外,FLT 10 A还能抑制LAK活性的诱导及CTL介导的细胞杀伤。     

人胚胸腺激素抑制组分对成人淋巴细胞增殖的影响

在研究人胚胸腺素的基础上,通过对提取工艺的改革,获得了人胚胸腺素抑制组分及促进组分。我们用~3H—TdR掺入DNA法观察了人胚胸腺素抑制组分对成人淋巴细胞增殖的影响,试验结果表明,呈现明显的剂量依赖关系,即40μg的人胚胸腺素抑制组分对PHA诱导的淋巴细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.001),当稀释至2μg或更低浓度时,淋巴细胞的增殖恢复到正常范围。而正常淋转无论是高浓度或稀释到较低浓度,都未显示出明显的抑制或促进作用。     

PMA和PHA对活化早期人胎儿胸腺细胞表型分化的研究

本文利用妊娠中期水囊引产的人胎儿胸腺细胞，采用双色免疫荧光染色技术用流式细胞计分析了佛波酯（ＰＭＡ，一种ＰＫＣ激酶活化剂）和ＰＨＡ作用于胸腺细胞０．５，３，６，１２和１８小时等不同时间对胸腺细胞ＣＤ４＋ＣＤ８＋亚群（ＤＰ）表型变化的影响。结果表明ＰＭＡ作用３０分钟就可以明显下调ＤＰ亚群ＣＤ４分子表达，而其对ＣＤ８分子的下调作用明显晚于对ＣＤ４分子的作用。ＰＨＡ则不表现对ＣＤ４分子的下调作用。我们发现ＰＭＡ和ＰＨＡ还可下调ＣＤ３的表达，但是ＰＭＡ和ＰＨＡ对ＩＬ－２受体和ＨＬＡ－Ⅰ类抗原的表达有促进作用。而对ＤＲ分子均无明显作用。这些结果证实胸腺ＤＰ细胞在外界活化因子作用下一些重要的细胞表面分子发生了改变，表明胸腺ＤＰ细胞具有继续分化的潜能。提示在ＰＭＡ和ＰＨＡ诱导的胸腺细胞活化和增植过程中细胞表面分子的表达可能受不同细胞活化机制的调控。因此，探讨ＰＭＡ和ＰＨＡ诱导细胞表型变化的机理及其与胸腺细胞活化的关系可能有助于对Ｔ细胞活化机理研究。     

γ-氨基丁酸对人细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响

目的：研究γ-氨基丁酸（GABA）及A受体激动剂（THIP）对人细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer，CIK）增殖和凋亡的影响以及作用机制。方法：在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后，用MTT比色法和流式细胞仪（FCM）检测人CIK细胞的增殖能力、细胞凋亡、细胞周期和免疫表型的变化。结果：GABA能显著抑制CIK细胞的生长（P〈0．01），且具有浓度依赖性，THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用；GABA显著影响细胞周期比例的分布，促进细胞凋亡；GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28、CD25的表达，并能被THIP增强。结论：GABA可抑制CIK细胞增殖，诱导其凋亡，降低其细胞表面CD28、CD25的表达，抑制T淋巴细胞活化，具有免疫抑制作用。这些作用通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。