羟基红花黄色素A对血管内皮细胞黏附功能的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对血管内皮细胞黏附功能的影响。方法选用猪髋动脉内皮细胞(PIECs)作为细胞模型,应用同位素氚与胸腺嘧啶结合的方法标记细胞,通过检测放射性计算出在共培养不同时段黏附于聚酯膜上的细胞数,利用Rh 123染色显示黏附细胞中的线粒体活性。结果在HSYA作用24h后,与对照组相比HSYA明显升高黏附细胞数量,并且这一作用呈现出剂量依赖性的现象(P<0.05),同时内皮细胞中的线粒体荧光增强,也呈剂量依赖性(P<0.05),都在HSYA浓度为0.007 3g/L达到最理想效果。结论 HSYA能够促进内皮细胞的黏附和提高内皮细胞线粒体活性。     

羟基红花黄色素A抑制新生血管形成的机制研究

目的从中药中寻找新的血管生成抑制剂,并探讨其抑制新生血管生成的作用机理.方法从红花中提取分离羟基红花黄色素A,利用鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察羟基红花黄色素A对新生血管的抑制作用,并通过RT-PCR实验,观察羟基红花黄色素A对CAM组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体(VEGF-R)(flt-1) mRNA表达的影响.结果提取出的羟基红花黄色素A纯度达到了98.9%,浓度为0.59 g/L的羟基红花黄色素A能使CAM血管数明显变细减少(P<0.01)并能显著抑制CAM组织中bFGF、VEGF及VEGF-R(flt-1) 的mRNA表达(P<0.05).结论通过本实验我们首次得出羟基红花黄色素A能显著抑制CAM新生血管生成,其作用机制之一是通过抑制bFGF、VEGF及VEGF-R(flt-1)的mRNA表达来实现的,提示羟基红花黄色素A可能是一很有潜力的血管生成抑制剂.     

羟基红花黄色素A对常氧/低氧犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对常氧/低氧两种条件下体外培养的犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响.方法 采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;在常氧(21%)/低氧(10%)两种条件下,分别以噻唑蓝(MTT)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,血管内皮生长因子(VEGF)作为阳性对照.结果 常氧条件下HYSA 1、0.1 mmol/L在72、96、120 h时对VEC有明显促增殖作用;低氧条件下HYSA 1、0.1、0.01mmol/L在24、48 h时对VEC有明显促增殖作用,且具有浓度和时间依赖性.HYSA 1 mmol/L与VEGF 2.6×10-7mol/L在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当.结论 在常氧/低氧两种条件下,HSYA均具有明显促VEC增殖作用,且在低氧条件更为明显.     

羟基红花黄色素A对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞迁移及VEGF表达的影响

目的 研究羟基红花黄色素A（HSYA）对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）迁移的影响,探讨HSYA抑制视网膜脉络膜新生血管内皮细胞的作用机制。方法 采用细胞划痕修复实验和半定量RT-PCR方法,检测HSYA对正常和高糖作用下RF/6A迁移和VEGF表达的影响。结果 HSYA在18 mg/L,37 mg/L,73mg/L浓度对高糖（22mmol/L）诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,而对正常糖（5mmol/L）下RF/6A细胞无显著抑制作用;与正常糖组比较高糖组VEGF明显表达,而加HSYA组VEGF表达降低。结论 一定浓度的HSYA对高糖诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,其可能机制为HSYA抑制血管内皮细胞VEGF表达。     

羟基红花黄色素A促内皮细胞增殖的机制研究

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对低氧条件下犬血管内皮细胞(VEC)血管内皮生长因子(VEGF)相关信号传导通路的影响.方法 在低氧条件下以ELISA法观察VEGF抗体及其两种酪氨酸受体(Flt-1和KDR)的抗体对HSYA促VEC增殖作用及分泌VEGF水平的影响;生物分子相互作用分析法检测HSYA与VEGF、Flt-1和KDR的相互作用;硝酸还原酶法测定VEC培养液中NO、NOS的量.结果 10μg/mL VEGF、Flt-1和KDR的抗体均能明显抑制HSYA的促EC分泌VEGF作用;生物分子相互作用分析结果证实,HSYA与VEGF、Fit-1及KDR均无明显结合;HSYA在1mmol/L浓度下能够明显促进低氧条件下VEC培养中的NO水平,而对NOS水平没有明显影响.结论 在低氧条件下,HSYA促VEC增殖的作用与VEGF及其相关信号传导通路有关,但HSYA与VEGF及其受体无明显结合,提示可能存在与VEGF及其相关信号传导通路相关的HSYA作用靶点.     

HPLC测定肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的含量

目的 建立测定肤痒胶囊中羟基红花黄色素A含量的HPLC法.方法用HPLC测定肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的含量,采用Hypersil ODS色谱柱,以甲醇∶乙腈:0.7%磷酸溶液(20:2:78)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长403 nm,柱温30 ℃.结果 羟基红花黄色素A含量在1.38-13.8 μg范...     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

羟基红花黄色素A与心血管作用研究进展

羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)是从传统的活血化瘀类名药红花(Carthamus tinctorius L)中分离出来的,也是红花发挥药理作用的主要物质。HSYA对心血管的作用主要有降压、保护心肌、抗凝、调节血管内皮细胞增殖的作用,文章对此最新进展进行综述。     

羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制的探讨

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)是否能够保护心脏的再灌注损伤及其作用机制。方法:采用离体大鼠心脏灌流方法,全心停灌30min和复灌120min模拟缺血/复灌损伤,测定心肌梗死面积、冠脉流出液中LDH含量。Westernblot测定缺血区心肌组织内皮一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化的内皮一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白的表达水平。结果:与缺血/复灌(I/R)组相比,HSYA治疗组心梗面积显著减少,并且乳酸脱氢酶(LDH)水平显著下降。NOS抑制剂L-NAME(10umol/L)可部分抵消HSYA对梗塞面积和LDH释放的保护作用。与对照组相比,HSYA组eNOS的磷酸化水平显著增高,而L-NAME可抑制其作用。结论:HSYA具有抗心肌缺血/复灌损伤的保护作用;HSYA抗心肌缺血/复灌损伤的作用机制可能与通过活化eNOS,增加NO生成有关。     

羟基红花黄色素A对人主动脉内皮细胞增殖及血小板反应蛋白表达的影响

目的:探讨羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对人主动脉内皮细胞(Human aortic endothelial cells,HAEC)血小板反应蛋白1(Tmmbospondin-1,TSP-1)表达的影响.以进一步研究HSYA抑制内皮细胞增殖及抗肿瘤的作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HSYA对HAEC增殖作用的影响.Real Time PCR法及免疫细胞化学法分别检测HSYA作用后,HAEC内TSP-1的mRNA及蛋白表达;ELISA法检测上清液中TSP-1含量.结果:HSYA对HAEC增殖作用的影响表现出浓度依赖性,较高浓度(＞0.065 7 g/L)对HAEC的增殖有抑制作用,较低浓度(＜0.065 7g/L)表现出促进作用.HSYA对TSP-ImRNA表达有促进作用,且这种作用随浓度增加而增强;TSP-1的蛋白表达与释放情况与RT-PCR结果相似.结论:HSYA能促进HAEC表达TSP-I;HSYA对内皮细胞的增殖表现出促进和抑制的双向作用,可能是TSP-1和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)等多种因素共同作用的结果.而HSYA的抗肿瘤作用可能是通过较高浓度HSYA提高TSP-1的表达抑制内皮细胞增殖进而抑制血管形成来实现的.     

黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,进一步探讨黄芪微乳对HUVEC增生的作用及其机制?方法:体外培养HUVEC细胞,用含1%FCS的RPMI-1640培养液同步24 h后,分为2组进行观察:空白微乳胶原组和黄芪微乳胶原组,并设定空白微乳和黄芪微乳的浓度分别为16.90?8.50?4.20?2.10?1.05 μg/ml等5个浓度,每组每个浓度设3个复孔?干预48 h后,采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖情况;实时荧光定量RT-PCR检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达?结果:干预48 h后,在浓度分别为16.9?8.5?4.2 μg/ml的黄芪微乳胶原组HUVEC的吸光度值?细胞分裂增殖指数和VEGF mRNA表达均明显高于相应浓度的空白微乳胶原组(P < 0.05,P < 0.01)?结论:黄芪微乳能促进HUVEC的增殖,并上调HUVEC的VEGF mRNA表达,推测黄芪微乳可能具有促进血管生成的作用?     

羟基红花黄色素A对烫伤大鼠休克期血管通透性的影响

目的:通过羟基红花黄色素A对烧伤后休克期大鼠的抗渗作用进行实验观察,探讨羟基红花黄色素A在烧伤休克期的应用价值.方法:制作大鼠烫伤模型,将烫伤大鼠随机分为A、B、C三组.A:空白对照组;B:烫伤补液组;C:烫伤补液+羟基红花黄色素A组.用改良伊文思蓝渗出法及称取组织干湿重法测定各组大鼠创周和空肠组织血管通透性、组织含水量.结果:烫伤大鼠血管通透性比较,C组显著低于A和B组(P＜0.05);组织含水量比较,C组显著低于B组.(P＜0.05).结论:羟基红花黄色素A能降低烫伤大鼠血管通透性和组织含水量,减轻组织水肿.     

血管内皮细胞生长因子及微血管密度与大肠癌浸润、转移关系研究

目的：探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及微血管密度（micorvessel density,MVD)与大肠癌浸润、转移之间的关系。方法：应用免疫组织化学法，检测78例大肠癌VEGF及MVD的变化，分析VEGF及MVD与大肠癌浸润、转移的关系。结果：78例大肠癌中有淋巴结转移者32例，无淋巴结转移者46例；VEGF表达阳性率及MVD值前者均明显高于后者（P＜0．01），P＜0．05）。有肝转移者15例，无肝转移者63例，VEGF表达阳性率及MVD值前者均明显高于后者（P均＜0．01）。当肿瘤局限于粘膜层及粘膜下层和肌层、浆膜下层时，VEGF表达无明显差异；但当肿瘤侵犯到浆膜层和浆膜外时，VEGF蛋白表达阳性率明显增高（P＜0．01）。浸润至肌层及浆膜下层的肿瘤组织MVD值明显高于浸润至粘膜及粘膜下层者（P＜0．05），而浸润至浆膜及浆膜外的肿瘤组织中MVD又将浸润至肌层及浆膜下层者为高（P＜0．01）。结论：VEGF及MVD与大肠癌浸润、转移有关，可能成为预测大肠癌恶性程度的可靠指标之一。     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

VIP促进人脐静脉血管内皮细胞增殖及合成VEGF的初步研究

目的 通过观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)促进人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein vessel endothelial cells,HUVECs)的增殖以及刺激VEGF的合成情况,探讨VIP在创伤组织修复过程中的生物学效应.方法 体外培养HUVECs细胞系,分为有血清培养组和无血清培养组,这两组分别加入VIP和PBS进行干预,应用MTT法测定HUVECs的增殖情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF165)在HUVECs的合成.结果 VIP能促进血管内皮细胞的增殖,且两组都有VEGF生成,但VIP组VEGF的量显著高于PBS组.结论 VIP能促进HUVECs的增殖以及增强血管内皮细胞内VEGF的合成和分泌,在创伤组织修复过程中可能发挥促新生血管形成的作用.     

Resveratrol Inhibits the Secretion of Vascular Endothelial Growth Factor and Subsequent Proliferation in Human Leukemia U937 Cells

This study examined the effect of resveratrol on the secretion of vascular endothelial growth factor(VEGF) and subsequent proliferation of human leukemia U937 cells,and explored the mechanisms involved.Human leukemia U937 cells were treated with resveratrol of different concentrations(12.5-200 μmol/L) for different time lengths(12-48 h).The proliferation of the U937 leukemic cells was determined by MTT assay.Apoptosis was observed by Annexin-Ⅴ-FIFC/PI double staining and flow cytometry(FCM).Cells cycle was analyzed by PI staining and FCM.The content of VEGF was determined by ELISA.Human umbibical vein endothelial cells were examined for vasoformation in vitro after exposures to resveratrol of various concetrations.The results showed that resveratrol inhibited the proliferation of U937 leukemia cells in a dose-and time-dependent manner.Resveratrol induced apoptosis and S-phase cell cycle arrest in human leukemic U937 cells.Resveratrol inhibited the secretion of VEGF in U937 cells.Resveratrol inhibited the vasoformation of human vein endothelial cells in a dose-dependent manner.It was concluded that resveratrol could down-regulate the secretion of VEGF,induce apoptosis and suppress the proliferation of U937 cells.     

大鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化潜能的研究

目的体外研究大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)分化为血管内皮细胞的潜能。方法采用密度梯度离心法分离rMSCs,体外扩增并进行鉴定。在内皮细胞生长培养基(EGM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导rMSCs向血管内皮细胞分化,观察细胞形态学变化。采用免疫细胞化学法和Dil荧光标记法,分别检测诱导后rMSCs的内皮细胞表型表达及对乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取能力。结果形态学观察显示,诱导后的rMSCs可见类似内皮细胞样改变,并表达血管内皮细胞特异的表面标志vWF和CD31,但仅少数细胞具有摄取Dil-Ac-LDL的能力。结论VEGF和bFGF在体外能够诱导rMSCs出现内皮细胞表型,但尚不完全具备成熟内皮细胞的功能特性。rMSCs具有向血管内皮细胞分化的潜能。     

喉癌血管内皮生长因子的表达与临床病理的相关性研究

目的 探讨喉鳞癌血管内皮生长因子(VEGF)的表达与临床病理的相关性。方法 采用LDP免疫组织化学染色技术，检测37例喉鳞癌惠者肿瘤组织中VEGF的表达，应用SPSS10．0统计软件进行VEGF。表达情况与临床病理指标的相关性分析。结果 37例喉鳞癌组织VEGF阳性表达率为70％。Spearman等级相关分析结果：VEGF表达与患者年龄、病变部位、大检类型及B3表达水平无关，与肿瘤T、N分期、组织分化及增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平呈正相关。肿瘤侵犯范围越广、出现颈淋巴结转移、肿瘤分化越差、PCNA指数越高的患者，VEGF表达越强。结论 喉鳞癌肿瘤组织VEGF的表达与临床分期、组织分化及PCNA表达水平密切相关，提示VEGF在喉鳞癌的进展中起重要作用。VEGF的过度表达可作为喉癌不良预后的重要生物学指标。     

羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响.方法 培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10-7mol/L-1×10-9mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα 及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况.结果 与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P<0.01);在SK-BR-3细胞中,HSYA显著抑制了ERK1/2的表达,但对p-ERK1/2的表达影响不明显(P>0.05).结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用.     

Transplantation of VEGF165-gene-transfected endothelial progenitor cells

Background: To study the cotherapeutic effect of stem cell transplantation and gene transfection on chronic venous thrombosis. Methods: We constructed a recombinant adenoviral vector carrying the VEGF165 gene by using the pAdEasy system, which was subsequently identified and amplified. Simultaneously, endothelial progenitor cells (EPCs) were isolated from rat bone marrow by using Ficoll, cultured in EBM-2MV medium, and identified. Then, the cells were transfected with the recombinant Ad-VEGF165. The EPCs were labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine (Dil) before transplantation. An experimental rat model of chronic vein thrombosis was developed by partial ligation of the inferior vena cava. The rats were randomly divided into 4 groups: A (n = 25), Ad-VEGF165/EPC-transplantation group, which received 1 ml (106) of Ad-VEGF165/EPCs; B (n = 25), EPC-transplantation group, which received 1 ml (106) of EPCs; C (n = 25), Ad/EPC-transplantation group, which received 1 ml (106) of Ad/EPCs; D (n = 25), control group, which received 1 ml of the transplantation medium. The thrombi and adjacent caval walls were harvested 28 days after transplantation; real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expression level of VEGF mRNA; and western blotting was used to measure thrombosis and changes in VEGF protein expression. Hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemical staining were performed to detect recanalization, and neovascularization was observed by scanning electron microscopy. The capillary density was quantitatively determined by counting the capillaries under a high-power microscope. SPSS 11.5 software used for analysis, and differences at P < 0.05 were considered to be significant. Results: The Ad-VEGF165 was constructed, and bone-marrow-derived EPCs were cultivated and successfully identified. We determined the optimum transfection ratio that promoted the growth of EPCs. After transfection, the EPCs secreted the VEGF protein. After transplantation, the in vivo survival of EPCs and their differentiation into endothelial cells were determined by detecting the fluorescence associated with the Dil stain. VEGF mRNA was expressed in groups A, B, C, and D after transplantation, and the VEGF mRNA level in group A was significantly higher than those in groups B, C, and D (P < 0.05); the VEGF mRNA levels in groups B and C were significantly higher than those in group D (P < 0.05), and there was no statistical significance between the VEGF mRNA levels in groups B and group C. The recanalization capillary density in group A was significantly higher than those in groups B, C (P < 0.05), and D (P < 0.01); the recanalization capillary densities in groups B and C were significantly higher than that in group D (P < 0.05). Moreover, there was no statistical significant difference between the values for groups B and C. Neovascularization was detected by immunohistochemical staining using the antibody for vWF, which is a component of endothelial cells. Conclusion: The EPCs were successfully transfected by Ad-VEGF165. A suitable transfection ratio can improve the efficiency of EPCs, improving the possibility of promotion of angiogenesis after transplantation. Transfected EPCs caused accelerated organization and recanalization of vein thrombi.