大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化

目的 观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点. 方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SA-β-gal染色,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测p21~(WAF1/CIP1/SDI1)基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21~(WAF1/CIP1/SDI1)的表达与定位. 结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SA-β-gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21~(WAF1/CIP1/SDI1) mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05).免疫荧光结果示p21~(WAF1/CIP1/SDI1)主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强 (P<0.05). 结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型.     

大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白随增龄变化的研究

目的 研究大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)随增龄表达的变化规律. 方法 选取3月龄、12月龄及24月龄健康大鼠,分别取大鼠肾组织及原代系膜细胞做衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-βgal)染色,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Western blotassay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织和细胞中mTOR及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达变化,采用免疫组化和荧光法分别检测mTOR在肾组织及细胞中的表达与定位. 结果 随增龄,大鼠肾脏组织SA-βgal活性增强,且肾小球系膜细胞SA-β-gal染色阳性率逐渐增加,3、12及24月龄阳性率分别为(11.9±3.6)%,(39.0±4.0)%及(86.9±7.4)%,mTOR mRNA表达随增龄逐渐增强,不间月龄比较差异有统计学意义(P<0.05).Western印迹亦显示mTOR及p-mTOR蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P<0.05).免疫组化结果 显示,mTOR蛋白表达于大鼠肾小球系膜区,其在肾小管一间质也有表达;随增龄,与增龄所致的肾脏病变呈正相关性(与增龄引起小球及小管-间质病变的相关性分别为r=0.838;r=0.742,均为P<0.01);免疫荧光结果 显示,mTOR在大鼠系膜细胞胞浆及胞核内皆有表达,随增龄表达的荧光强度逐渐升高(P<0.05). 结论 mTOR在大鼠肾组织及肾小球系膜细胞中的表达随龄增加,其可能参与了肾脏衰老的进程.     

p16在大鼠肾脏随增龄表达的变化

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p16在大鼠肾脏随增龄表达的变化.方法 采用RT-PCR、Western印迹和免疫组化的方法从基因和蛋白质表达水平观察1日龄、3月龄和24月龄大鼠肾脏p16表达的变化.结果 RT-PCR和Western印迹结果显示随年龄的增长,p16的基因和蛋白在大鼠肾脏表达水平上调,免疫组化染色显示p16在肾小球和肾小管随增龄表达增加.结论 p16在大鼠肾脏随增龄表达上调,提示p16可能是肾脏衰老的标志物之一.     

松花粉抗成纤维细胞复制性衰老的机制

目的 研究松花粉对衰老成纤维单细胞面积、β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal)阳性率、p16INK4A和p21CIP-1表达以及细胞周期的影响.方法 以二倍体成纤维(2BS)细胞建立衰老细胞模型.生物体视学法分析单细胞面积变化;免疫组化法测SA-β-gal阳性率;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR法测定p16INK4A、p21CIP-1基因mRNA表达量.结果 56代细胞出现典型的衰老细胞形态改变,同时SA-β-gal染色阳性率与G1期细胞比例均增高.经松花粉处理后,衰老细胞的单细胞面积、SA-β-gal染色阳性率与G1期细胞比例均显著减少(P＜0.05);p16INK4A与p21CIP-1mRNA的表达量均较衰老模型组明显下调(P＜0.05). 结论松花粉具有改善细胞复制性衰老的作用,其分子机制可能与下调p16INK4A及p21CIP-1基因mRNA的表达从而改善衰老细胞G1期阻滞有关.     

利用组织芯片技术分析肝细胞癌组织P21WAF1/CIP1、PCNA和Ki-67的表达及意义

利用组织芯片技术检测P21WAF1/CIP1、PCNA与Ki-67在肝细胞癌组织中的表达与分布,初步探讨p21 1WAF1/CIP1、PCNA与Ki-67在肝细胞癌发生机制以及预后评估方面的作用.采用免疫组化技术结合临床病理资料检测了61例肝癌和50例癌旁组织的P21WAF1/CIP1、PCNA、Ki-67的表达情况.PCNA和Ki-67表达与肝癌的分化程度相关,PCNA与肝癌的侵袭转移潜力有关(P＜0.05),p21WAF1/CIP1在实验中未见有明显差异,但在表达程度与肝癌组织的分化程度之间亦存在着一定的相关关系.应用组织芯片高效检测临床组织样本具有快速、方便、经济、准确的优点.P21WAF1/CIP1、PCNA与Ki-67的异常表达可能与肝癌的发生发展密切相关.     

Plkl与p21~（WAF1/CIP1）在肝细胞癌中的表达

目的细胞周期抑制因子p21WAF1/CIP1（p21）可在转录水平抑制Polo-like kinase1（Plk1）基因的表达,本文旨在探讨Plk1和p21蛋白在肝细胞癌中的表达及相关性。方法应用Western Blot方法检测10对原发性肝细胞癌和癌旁组织中Plk1和p21蛋白的表达情况。通过将pFlex-p21表达质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,进一步检测p21过表达对Plk1mRNA和蛋白表达的影响。结果 Plk1在10例肝癌组织中的表达均高于配对癌旁组织,p21蛋白在7对肝癌组织中的表达高于配对癌旁组织。HepG2细胞瞬时表达p21质粒后,Plk1的蛋白表达和mRNA水平均无变化（P〉0.05）。结论 Plk1和p21在肝细胞癌组织中的表达具有一定的肿瘤特异性。肝癌组织中p21蛋白过表达可能不具有抑制Plk1表达的作用,具体机制还有待于进一步研究。     

胃癌组织中CyclinD1和p21WAF1蛋白的表达及临床意义

目的 探讨CyclinD1和p21WAF1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学S-P法检测88例胃癌组织中CyclinD1和p21WAF1蛋白的表达,并与癌旁组织对照.结果 胃癌组织中CyclinD1蛋白的阳性表达率为56.8％(50/88).CyclinD1蛋白的阳性表达与胃癌的组织学类型和分化程度有关(P均＜0.05),而与浸润深度和淋巴结转移均无明显相关性(P均＞ 0.05).p21WAF1蛋白的阳性表达率为26.1％(23/88).p21WAF1蛋白的阳性表达与胃癌的组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移均有关(P均＜ 0.05),且p21WAF1与CyclinD1蛋白表达呈负相关(r=-0.488,P＜0.05).结论 胃癌组织中CyclinD1阳性蛋白高表达、p21WAF1阳性蛋白低表达,且其表达与胃癌的发生、发展有关.     

丙戊酸钠对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及对p21WAF1/CIP1mRNA表达的影响.方法:实验分为空白对照组、PBS组、VPA0.2mmol/L组、VPA1.0mmol/L组和VPA5.0mmol/L组.不同浓度VPA干预人肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期;干预72h后,用Real-timePCR法检测VPA干预72h后p21WAF1/CIP1mRNA的表达情况.结果:与空白对照组及PBS组比较,不同浓度的VPA作用24h,48h及72h时组肝癌SMMC-7721细胞增殖均出现了不同程度抑制(请将具体数据列出来P<0.05),随着VPA药物浓度升高,细胞增殖抑制作用逐渐增强,随作用时间延长,抑制程度逐渐增强(P<0.05).随药物浓度升高,G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减少,细胞发生G0/G1期阻滞.VPA干预肝癌SMMC-7721细胞72h后,VPA组p21WAF/CIP1mRNA表达较空白对照组及PBS组表达明显升高(请将具体数据列出来P<0.01).结论:VPA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性,并诱导出现G0/G1细胞周期阻滞,同时上调p21WAF1/CIP1mRNA的表达.     

烟酰胺单核苷酸对D-半乳糖诱导肾脏衰老的作用研究

目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠肾脏衰老的作用及其可能的抗炎机制。方法 将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、NMN组、D-gal组与D-gal+NMN组。采用皮下注射D-gal的方法构建肾脏衰老模型。记录各组小鼠体质量；采用苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肾脏病理损伤和纤维化；应用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估组织衰老水平；使用免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察衰老指标p16、p21的定位及表达；使用Western blot测定抗衰老蛋白沉默信息调节因子1(SIRT1)及炎症指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用单因素方差分析、LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验进行组间比较。结果 NMN对D-gal组小鼠体质量未产生显著影响(P>0.05)。与对照组比较,D-gal组肾脏出现肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张和间质纤维化改变。IHC结果示p16、p21表达增加,并且主要位于肾小管,同时可见SA-β-gal阳性率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果示D-gal组肾脏衰老蛋白p16、p21及炎症指标TNF-α、IL-1β、NF-κB表达上调,而抗衰老蛋白SIRT1表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。NMN处理后,D-gal组肾小球萎缩,肾小管肿胀、扩张及间质纤维化程度明显降低,衰老及炎症指标显著下降,此外,SIRT1下调及SA-β-gal阳性率增加均得到缓解,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NMN可能通过促进SIRT1表达和抑制NF-κB途径介导的炎症反应,延缓D-gal诱导的肾脏衰老。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞株细胞周期的影响

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对急性髓性白血病(AML)Kasumi-1细胞周期的影响,并探讨其分子机制.方法 将对数生长期Kasumi-1细胞1×105/ml(观察组)分别经1、2、3 mmol/L VPA处理3 d;对照组不加药.RT-PCR法检测VPA不同浓度及不同作用时间(3 mmol/L作用0、1、2、3d)细胞周期调节因子cyclinE1、p21WAF1/CIP1、p27KIP1 mRNA及p21WAF1/CIP1蛋白变化.结果 观察组cyclinE1 mRNA表达明显降低(P<0.05),p21WAF1/CIP1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P<0.05),且均呈剂量、时间依赖性;p27KIP1 mRNA表达水平无明显变化.结论 VPA可通过对Kasumi-1细胞周期蛋白及周期蛋白依赖性激酶抑制剂的影响调节细胞周期,使细胞阻滞于G0/G1期;本研究可为急性白血病的治疗提供理论依据.     

Polyarthritis in MRL 1pr/1pr mice

Summary Mice of the inbred strain MRL/MpJ-1pr/1pr are affected by a systemic autoimmune disease and a spontaneously occurring polyarthritis. To characterize the arthritis a histopathological study was performed on the joints of the four limbs and of the spinal column of 7, 16, 22 and 28-week-old animals of both sexes. Polyarthritis, the severity of which increased with age was detected in all mice. Proliferation of the synovial lining cells, already evident in 7-week-old animals, was the initial lesion. In the majority of cases infiltrates containing lymphocytes with a few plasmocytes, histiocytes, polymorphonuclear neutrophils and eosinophils were detected later on. The most pronounced changes were observed in the hind-paws, the fore-paws, the knee and hip joints, paired articulations being symmetrically involved. A pannus was seen at the most in 10% of the joints leading to limited and superficial destruction of the cartilage. Rheumatoid nodules were not seen. From 16 weeks of age deposits of unknown nature, often surrounded by phagocytosing macrophages and/or neutrophils, were observed in the articular and/or extra-articular connective tissue and in the vessels. There was a positive correlation between their presence and the intensity of the arthritis. The articular lesions in our study differ from those in rheumatoid arthritis because they lacked the specific and characteristic histological features of the human disease.     

神经调节蛋白1通过ERK1-2通路减轻心肌细胞缺氧复氧损伤

目的探究神经调节蛋白1(NRG-1)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路减轻心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的作用。方法培养心肌H9c2细胞株,随机分为常规条件下用不含药物DMEM处理的对照组、H/R条件下用不含药物DMEM处理的H/R组、H/R条件下用含NRG-1 DMEM处理的NRG-1组、H/R条件下用含NRG-1及ERK1/2抑制剂PD98059处理的NRG-1+PD组。检测细胞增殖活力、凋亡率及细胞中的凋亡基因、炎症指标、ERK1/2。结果 H/R组细胞的OD_(490)水平明显低于对照组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、核因子κB(NF-κB)、ERK1/2的表达水平及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)的含量明显高于对照组;NRG-1组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显高于H/R组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显低于H/R组;NRG-1+PD组细胞的OD_(490)水平及细胞中ERK1/2的表达水平明显低于NRG-1组,细胞凋亡率、细胞中cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、NF-κB的表达水平及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量明显高于NRG-1组。结论 NRG-1通过激活ERK1/2通路减轻心肌细胞H/R损伤。     

Th1/Th2及Tc1/Tc2在胃癌患者外周血中的漂移及意义

目的: 研究胃癌患者外周血Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移状况,并分析其免疫预存状态.方法: 2008-10-21/2008-12-05中国人民解放军总医院普通外科新入院的术前胃癌患者外周血样本25例,同期健康献血员正常对照组外周血样本25例.四色流式细胞仪检测胃癌患者及正常对照人群外周血激活的淋巴细胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4),并分析Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移状态.结果: 胃癌患者外周血Th1/PBL、Tc1/PBL、Th1/Th2、Tc1/Tc2比值均较正常对照组明显减少(6.242%±4.078% vs 3.047%±1.710%,14.171%±8.984% vs 6.393%±5.235%,3.127%±3.633% vs 1.172%±0.300%,17.200%±25.930% vs 3.252%±8.732%,均P＜0.01).结论: 胃癌患者Th1及Tc1细胞比例减少,并出现Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移现象,提示胃癌患者预存免疫状态低下,机体抗肿瘤免疫功能抑制.     

阻断程序性死亡蛋白-1及其配体信号通路增强慢性乙型肝炎病毒感染小鼠的抗病毒免疫

目的 建立慢性HBV感染的小鼠模型,体内阻断PD-1/PD-L1信号通路,增强模型小鼠的抗病毒免疫,探寻慢性乙型肝炎治疗的新方法.方法 以流体动力学法给C57BL/6小鼠尾静脉注射pAAV/HBV1.2-GFP,不同时间点检测血清和组织中各种HBV标志物的表达.给模型小鼠腹腔注射抗PD-L1的单克隆抗体,检测小鼠血清ALT和HBV DNA载量的变化.两计量资料比较采用t检验.结果 成功建立慢性HBV感染小鼠模型,建模90 d后仍能检测到血清HBsAg的表达及高载量的HBV DNA.体内阻断PD-1/PD-L1信号通路后,小鼠血清ALT水平明显上升(t=5.436,P＜0.01),同时,血清HBV DNA载量显著下降,t=4.919,P＜0.01,差异有统计学意义.结论 慢性HBV感染小鼠模型是研究HBV感染免疫耐受机制及治疗方法较好的工具;体内阻断PD-1/PD-L1信号通路,能增强慢性HBV感染小鼠的抗病毒免疫,可能成为慢性乙型肝炎治疗的新策略.     

IGF-1对Rh1肉瘤细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子(IGF)1对Rh1肉瘤细胞生长活性和PI3 K/Akt/mTOR信号通路的背景变化.方法 常规细胞培养,用无血清培养基消除内源性因子影响27h,再用IGF-1(终浓度为10 ng/ml)刺激72 h,流式细胞仪检测细胞生长活性;另外Western印迹方法观察IGF-1刺激细胞5、10、20、30和60min后Akt(s473)、S6的动态变化.结果 与对照组相比,IGF-1可促进Rh1细胞存活.IGF-1刺激不同时间后S6磷酸化则随着时间的延长逐渐增强;IGF-1亦导致Akt(s473)位点的磷酸化,随时间的延长,磷酸化Akt在5min时达高峰,此后逐渐减弱.结论 Akt、S6等是PI3K/Akt/mTOR信号通路中的重要信号分子,对Rhl细胞而言,在IGF-1刺激下S6有逐渐增强的变化,Akt (s473)位点磷酸化则有减弱的动态变化.     

第一秒与六秒用力呼气容积比值检测气流阻塞的临床研究

目的 探讨在肺功能测定中能否用第1秒用力呼气量与6秒用力呼气量比值（FEV1/FEV6）代替第1秒用力呼气量与肺活量比值（FEV1/FVc）的可行性.方法 对256名慢性阻塞性肺病（COPD）患者和174名非COPD患者进行肺功能检测,收集FVC、FEV6、FEV1/FVC、FEV1/FEV6等数据.比较FEV6与FVC以及FEV1/FEV6与FEV1/FVC的相关性;并以FEV1/FVC〈70%作为判断气流阻塞的标准,计算相应FEV1/FEV6检测气流阻塞的敏感性和特异性.结果 （1）FEV6与FVC以及FEV1/FEV6与FEV1/FVC均呈强正相关关系;（2）根据ROC曲线结果,取FEV1/FEV6为〈72.6%,其诊断气流阻塞的敏感性和特异性分别达到97.7%和98.4%.结论 FEV1/FEV6能够代替FEV1/FVC检测气流阻塞。     

TSLC1和DAL-1/4.1B在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨TSLCl和DAL-1/4.1B两种蛋白在胰腺癌中的表达和临床病理意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测42例胰腺癌组织、11例胰腺炎组织和9例正常胰腺组织中TSLCl和DAL-1/4.1B两种蛋白的表达.结果:TSLC1、DAL-1/4.1B蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率均明显低于在正常胰腺组织和胰腺炎组织中的表达(30.95% VS 77.78%,81.82%; 28.57% VS 66.67%,81.82%,P＜0.05或0.01).TSLCl和DAL-1/4.1B蛋白的异常表达均与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关(P＜0.05),而与患者的性别、年龄、部位和病理分型无关.在42例胰腺癌中TSLC1与DAL-1/4.1B蛋白表达呈显著正相关(rs=0.489,P＜0.01).结论:胰腺癌中存在TSLC1和DAL-1/4.1B基因的失活和蛋白表达下调,二者可能通过TSLC1-DAL-1/4.1B级联反应共同参与胰腺癌的发生、发展和转移.     

ERK1/2通路在TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路是否参与基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)抑制大鼠肾小球系膜细胞的凋亡。方法选择大连医科大学附属第一医院2005年8月至2006年2月应用人正、反义TIMP-1转染大鼠肾小球系膜细胞,分别用高糖(25mmol/L)和MEK1特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)观察细胞外信号调节激酶信使RNA(ERK1 messenger RNA)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测胞浆中p-ERK1/2的表达情况。结果(1)未加PD98059的未转染组、空载体组、正义转染组及反义转染组各组细胞的凋亡率分别为(12.10±2.21)%、(11.90±3.34)%、(5.50±0.50)%和(20.70±3.41)%;正义转染组的凋亡率明显低于未转染组(P<0.01);反义转染组凋亡率高于未转染组(P<0.05)。加入PD98059后各组细胞的凋亡率明显增加。(2)加入PD98059后,各组细胞ERK1mRNA的表达较相应未加PD98059各组明显上调;以正义转染组上调最为明显。(3)ELISA结果显示:加入PD98059后,p-ERK1/2较相应未加PD98059各组明显下调(P<0.05),以正义组下调最为明显(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路是TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的主要途径之一。     

C反应蛋白在新型A/H1N1流感中的意义

目的探讨C反应蛋白(CRP)在新型A/H1N1流感(简称甲流)的临床应用价值。方法检测45例甲流患者CRP、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数百分比(N),痰培养及X线胸片,同时给予奥司他韦抗病毒及抗感染治疗,并比较这些指标治疗前后的的变化。结果甲流患者治疗前血清CRP显著高于治疗后(P0.01),而WBC及N在治疗前后变化不大(P0.05)。结论CRP升高不仅可以提示重症甲流及预后。是甲流一个良好的观察指标,比WBC更敏感。