泛素结合酶E2T增强鼻咽癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及相关分子机制。方法 采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中UBE2T的表达水平。将UBE2T小干扰RNA序列(UBE2T-siRNA)及其阴性对照序列(NC-siRNA)转染至CNE2细胞,联合或不联合放射治疗,并分为Control组、NC-siRNA组、UBE2T-siRNA组、放疗组、NC-siRNA+放疗组、UBE2T-siRNA+放疗组。采用CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 CNE2细胞中UBE2T mRNA表达水平高于NP69细胞(P<0.05);与Control组比较,NC-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),UBE2T-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.05);与放...     

过表达泛素偶联酶E2C对293T细胞增殖的影响

目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响。方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用Western blot技术检测并鉴定UBE2C基因在293T细胞中的表达情况;用MTT法检测UBE2C对293T细胞增殖的影响。结果:Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的UBE2C蛋白表达水平明显高于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。MTT法检测结果显示转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的增殖速度明显快于转pcDNA3.1(-)组(P<0.01)。结论:成功建立稳定过表达UBE2C的293T细胞株,过表达UBE2C可促进293T细胞的增殖。     

沉默LAIR-1表达对卵巢癌细胞增殖功能的影响

沉默白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)在卵巢癌H08910细胞的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖功能的影响。构建LAIR-1的shRNA慢病毒表达载体,转染人浆液性卵巢癌细胞系H08910。RT-PCR和Western blot检测H08910细胞中LAIR-1分子的沉默效率;采用PI染色法和MTT法检测沉默LAIR-1表达对HO8910细胞周期及增殖功能的影响。成功建立沉默LAIR-1分子表达的稳定HO8910细胞株。与阴性对照组比较,转染LAIR-1-shRNA慢病毒载体的HO8910细胞中LAIR-1的mRNA及蛋白水平表达均明显降低(P<0.05)。LAIR-1-shRNA组G1期细胞数目明显低于CON组和NCshRNA组(P<0.05);沉默LAIR-1分子表达后,LAIR-1-shRNA HO8910细胞的增殖率明显高于NC-shRNA HO8910组和空白对照组(P<0.05)。沉默卵巢癌细胞HO8910LAIR-1分子表达可明显增强细胞增殖的能力,提示卵巢癌细胞表达的LAIR-1可能对癌细胞的生物学功能发挥抑制作用。     

泛素特异性加工酶2的研究进展

泛素特异性加工酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,以调控细胞内靶蛋白数量和活性,从而参与细胞功能的调节.USP2-45及USP2-69是USP2基因选择性剪接而形成的两种不同亚型,在不同组织、细胞和不同发育阶段均有表达,且与细胞周期调控,骨骼肌纵向生长、肌细胞分化、离子通道、生精作用及生物钟调控等关系密切.本文结合当前研究进展,系统阐述USP2的两种亚型的结构、分布及功能,为进一步研究USP2与疾病的关系打下理论基础.     

上皮性卵巢癌中E盒结合锌指蛋白2和转化生长因子β1的表达及其预后的关系

目的 研究上皮性卵巢癌中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及预后意义.方法 采用免疫组化SP法检测52例上皮性卵巢癌、23例卵巢良性上皮性肿瘤和15例正常卵巢组织中ZEB2和TGF-β1的表达,分析二者在卵巢上皮癌中的相关性及与临床病理特征和预后的关系.结果 ZEB2和TGF-β1在上述三种组织中均定位于细胞质,其阳性表达率分别为67.3％、21.7％、13.3％和71.2％、30.4％、20.0％,差异均有统计意义(x2=21.34、18.087,p均＜0.05);ZEB2和TGF-β1在卵巢上皮癌中的表达存在正相关(rs=0.552,P＜0.05),且与分化程度、FIGO分期有关(P＜0.05),与年龄、病理类型无关(P＞0.05);ZEB2和TGF-β1表达与卵巢上皮癌患者总生存率有关(P＜0.05);COX风险比例模型显示ZEB2阳性表达是预后危险因素(OR=2.653,P＜0.05).结论ZEB2和TGF-β1可能促进上皮性卵巢癌进展,ZEB2可能作为评估预后的新指标.     

泛素特异性加工酶2—69对乳腺癌细胞增殖的影响北大核心CSCD

目的探讨泛素特异性加工酶2—69（USP2—69）在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法收集2013至2015年复旦大学附属华山医院24例人乳腺浸润性导管癌组织,分别应用分子杂交技术、Western blot及免疫组织化学法检测其USP2-69mRNA和蛋白水平表达。采用体外人乳腺癌细胞株MCF-7瞬时转染USP2-69质粒,使其过表达USP2-69,检测细胞增殖能力。结果乳腺浸润性导管癌的肿瘤组织中,USP2—69在mRNA及蛋白水平均高表达,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P〈0．01）。USP2—69蛋白高表达的组织其Ki-67的蛋白表达也升高,Western blot免疫印迹法检测发现人乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69的蛋白表达显著高于癌旁组织。细胞实验中转染USP2-69质粒的MCF-7细胞中cyclin D1较空载组表达增高,p27表达下降。细胞增殖速度明显加快,S期比例明显增高,平板阳性克隆明显增加（P〈0．01）。结论乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69表达升高,与促进肿瘤细胞增殖能力密切有关。实验结果为进一步研究调节乳腺癌增殖的分子机制提供重要的实验基础。     

miR-198在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖作用的机制研究

目的 研究微小RNA-198 (microRNA-198,miR-198)在卵巢癌中的表达水平及对卵巢癌细胞增殖的影响,并探讨其发挥作用的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平;t检验分析卵巢癌中miR-198的表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生...     

XAV939对卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的观察XAV939对卵巢癌细胞株OVCAR3增殖的作用。方法采用MTT法检测XAV939对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,用流式细胞技术检测卵巢癌细胞株OVCAR3细胞周期和凋亡,Western blotting法检测Cyclin D1、Bcl-2的表达以及PARP剪切片段。结果 XAV939对卵巢癌细胞株增殖的抑制呈现浓度依赖性和时间依赖性,细胞周期检测表现为G1期阻滞,凋亡检测显示凋亡率增加。不同浓度的XAV939处理组的卵巢癌细胞Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平下降,PARP剪切片段增多。结论 XAV939可以抑制卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖。     

CyclinE-CDK2分子活性调节机制

Cyc linE-CDK2是细胞周期G1/S期的转折中的关键调控因子,其分子活性受各种细胞因子、磷酸化/去磷酸化修饰、泛素介导的蛋白降解途径及细胞周期依赖性蛋白激酶抑制物(cyc lin-dependent k inase in-h ib itor,CK Is)等多种方式构成的精细调控网络调节。其活性失调将导致细胞增殖紊乱甚至肿瘤的发生。认识Cyc linE-CDK2分子活性调节机制有助于理解它在肿瘤形成中的作用。     

卵巢癌组织中差异lncRNAs的筛选及其lncRNA ZEB2-AS1的表达分析

目的 通过表达谱芯片筛选卵巢癌(OC)有价值的核心长链非编码RNAs(lncRNAs)分子,并进行表达验证和分析。方法 收集宁夏医科大学总医院2018年1月至2019年6月OC组织36份,正常卵巢组织22份,以表达谱芯片检测差异表达lncRNAs和mRNAs分子,以real-time PCR验证lncRNAs表达,原位杂交验证关键核心lncRNA的表达,生物信息学分析lncRNA可能的功能。结果 相比于正常组织,癌组织中共有4 982个差异表达的lncRNA,以锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(ZEB2-AS1)的高表达最为显著(P<0.05);ZEB2-AS1在肝癌、结肠癌和肾癌等多个癌组织中过表达;表达水平与肿瘤大小、病理分级、病理分型及临床分期均有相关性(P<0.05),且高表达导致总生存期和无病生存期降低(P<0.05)。ZEB2-AS1具有多个microRNA结合位点,与相应邻近基因ZEB2的表达情况一致。结论 ZEB2-AS1在卵巢癌中异常表达,提示ZEB2-AS1具有重要的研究价值。     

PKB在人上皮性卵巢癌中的表达及P13K抑制剂Wortmannin对细胞增殖的影响

目的检测蛋白激酶B(PKB)在上皮性卵巢癌组织中的表达,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂wortmannin对卵巢癌细胞株CAOV3细胞增殖的影响,探讨PI3K/PKB信号传导通路在卵巢癌发生发展中的意义。方法应用RT-PCR和western印迹方法对50例上皮性卵巢癌组织PKB的表达进行了分析。通过MTT比色法,观察wortmannin对卵巢癌细胞增殖的影响。流式细胞仪测定wortmannin对细胞周期的影响。结果PKBmRNA在上皮性卵巢癌组织中表达,与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比,无显著差异(P>0.05);western印迹检测见上皮性卵巢癌组织中磷酸化PKB蛋白条带深于正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤组织,量化后比较差异显著(P<0.05),且在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.0 5)。加入wortmannin后,CAOV3细胞株增殖比明显下降,其增殖下降程度与wortmannin浓度呈显著正相关,在wortmannin的作用下,由GO+G1期进入S和G2+M期的细胞明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较,差异显著。结论磷酸化PKB蛋白与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润呈正相关,wortmannin可有效阻滞此传导途径。     

乳腺浸润性导管癌中p57kip2、cyclin D1和cyclin E的表达及意义

目的探讨p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白在乳腺癌发生、发展中作用.方法用免疫组化S-P法检测64例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、15例乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和15例癌旁正常乳腺组织中p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表达情况.结果p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白在IDC的阳性率与在乳腺不同组织之间相比,cyclin D1、cyclin E蛋白在DCIS的阳性率与癌旁正常乳腺组织之间相比差异均有显著性(P≤0.05,P＜0.01).在IDC中,三者表达均与腋窝淋巴结转移有关(P≤0.05,P＜0.01),cyclin D1蛋白的表达与组织学分级有关(P＜0.01),cyclinE蛋白的表达与肿块大小有关(P＜0.01);p57kip2与cyclin D1之间、p57kip2与cyclin E之间的表达均呈负相关(P＜0.01)、cyclinD1与cyclin E之间的表达呈正相关(P＜0.01).结论p57kip2蛋白低表达、cyclin D1和cyclin E蛋白高表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生淋巴结转移的重要生物学标志,cyclin D1和cyclin E蛋白异常表达是乳腺癌发生的早期事件.联合检测p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白对预测乳腺癌淋巴结转移有重要意义.     

RNA甲基化阅读器蛋白YTHDF2对卵巢癌细胞增殖的调控作用

目的 探讨新型RNA甲基化修饰(N6-methyladenosine,m6A)阅读器蛋白YTH结构域m6A结合蛋白2(YTHDF2)在卵巢癌(Ovarian cancer)的表达水平及增殖调控作用.方法 利用人类蛋白质图谱(The human protein atlas,HPA)分析YTHDF2在卵巢癌组织的表达定位;...     

microRNA138对卵巢癌细胞增殖的影响

目的研究microRNA 138在卵巢癌患者中的表达,探讨microRNA 138对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法收集卵巢癌患者标本38例,同时收集相应的癌旁组织19例。利用荧光定量PCR方法检测各个组织中microRNA 138的表达水平。用脂质体作为载体将microRNA 138模拟物转染至SKOV3细胞,CCK-8方法检测细胞增殖能力的变化。结果 microRNA 138在卵巢癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织,P0.01。过表达microRNA 138能够显著抑制SKOV3细胞的增殖。结论 microRNA 138表达上调能够抑制卵巢癌细SKOV3增殖,其可能参与卵巢癌的发生发展过程。     

周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性，探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法:卵清蛋白（OVA）吸入制备SD大鼠2周哮喘模型，原代培养ASMCs。采用正常大鼠（N组）和模型大鼠（A组）第3-6代细胞，分别应用PKC特异性激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）及抑制剂Ro-31-8220干预ASMCs, 根据不同处理分为4组：（1）空白组；（2）10 nmol/L PMA组；(3)10 nmol/L PMA+5 μmol/L Ro-31-8220组； (4)5 μmol/L Ro-31-8220组。采用流式细胞术，四甲基偶氮唑盐（MTT）法，增殖细胞核抗原（PCNA）染色等方法观察药物对ASMCs增殖的影响。RT-PCR方法检测PKC-α和cyclin D1 mRNA表达水平，Western blotting方法检测PKC-α和cyclin D1蛋白表达水平。线性相关分析评价PKC-α和cyclin D1表达水平的关系。结果:（1）在哮喘组，与空白对照比较，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率，差异显著（P<0.01）。在正常组，与空白对照相比，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差异均显著（P<0.01）。（2）哮喘组内PMA组、Ro-31-8220组PKC-α以及cyclin D1 mRNA 和蛋白表达水平与空白对照比较，差异显著（P<0.01）。正常组和哮喘组变化趋势一致。(3)在mRNA水平，大鼠ASMCs PKC-α和cyclin D1的表达呈明显正相关(r=0.476，P<0.05)，在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关(r=0.899, P<0.01)。结论:PKC-α能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖，其在基因和蛋白的表达水平与cyclin D1的表达呈正相关，提示PKC-α可能通过调节cyclin D1而影响ASMCs的增殖。     

泛素连接酶MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解

目的研究泛素连接酶MDM2对其调节因子NOLC1的泛素化和降解。方法克隆原核表达了NOLC1全长蛋白和其核定位信号区域,在体外泛素化体系中利用有泛素连接酶活性的重组MDM2研究其对NOLC1的泛素化。在哺乳动物细胞中,研究MDM2对外源转染的NOLC1的降解。结果在体外泛素化体系中MDM2泛素化NOLC1全长和其核定位信号区域;在哺乳动物细胞中,MDM2促进外源NOLC1降解超过70%,且NOLC1的降解通过蛋白酶体途经实现。结论 MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解,为研究MDM2-TP53-NOLC1之间的相互调节提供了新的线索。     

去泛素化酶的研究及其进展

泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin—proteasome pathway）是细胞内一个重要的蛋白质降解调节系统。通过对底物蛋白的多聚泛素化并经蛋白酶体降解,可以影响或调节多种细胞活动,包括：基因转录、细胞周期调节、免疫反应、细胞受体功能及肿瘤生长、炎症过程等。该途径也是一个被严格调控的可逆过程,其中去泛素化酶的调节就是一个重要的环节。目前研究证实,细胞内广泛存在许多去泛素化酶（deubiquitinating enzymes,DUBs）,主要分为以泛素羧基末端水解酶家族和泛素特异性加工酶家族为主的5种类型。     

前列腺素E2抑制T细胞活化的机制

机体在严重烧伤、创伤、败血症等情况下,T细胞免疫功能受到抑制.前列腺素E2是抑制T细胞免疫活化的重要炎性介质之一,它通过对T细胞活化途径中的信号转导分子的抑制作用,使T细胞处于免疫失活或无能状态,这种免疫调节作用,在机体处于应急状态下,发挥免疫保护作用.     

泛素缀合酶样蛋白的研究概况

在泛素缀合途径中,泛素缀合酶起关键作用,各种不同的泛素缀合酶决定了泛素缀合途径功能的多样性。泛素缀合酶样蛋白存序列和二、三级结构上类似于泛素缀合酶,但不具备泛素缀合酶的泛素缀合活性。泛素缀合酶样蛋白可能是蛋白泛素化的新的调节因子。