基于微阵列化学发光技术的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测试剂盒研制及应用

目的 建立新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测方法。方法 考核基于微阵列化学发光技术的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测试剂盒的检测性能，并对临床疑似病例血清样本进行采集，在实验室完成检测、确认。结果 对本试剂盒进行性能分析显示其具有高灵敏性、高特异性和良好的重复性。通过对563例疑似样本的检测，发现抗体检出量的变化对被检测对象的感染状态具有一定的指示作用。结论 作为对新冠病毒核酸检测的有力补充，基于微阵列化学发光技术的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测试剂盒能够同时定性检测血清样本中的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）IgM和总抗体，可为入境人员检疫监测提供更全面的信息，有望对优化入境管理措施、减轻入境管理的工作负荷提供参考依据。     

化学发光法与胶体金法检测SARS-CoV-2抗体阳性率比较

目的　探讨化学发光法和胶体金法检测SARS-CoV-2抗体在2019冠状病毒病（coronavirus disease 2019, COVID-19）诊断中的应用价值。方法　收集51例COVID-19确诊患者和41例非COVID-19患者的血清,用化学发光法检测非COVID-19组血清中SARS-CoV-2抗体IgM、IgG及联合检测（IgM或IgG）的阳性率;用化学发光法和胶体金法检测COVID-19组血清中SARS-CoV-2抗体IgM、IgG及联合检测（IgM或IgG）的阳性率,比较2种方法的一致性。结果　COVID-19组平均发病时间为（16.9±5.4）d。其中22例IgM阳性,阳性率为43.1%;47例IgG阳性,阳性率为92.2%;49例联合检测（IgM或IgG）阳性,阳性率为96.1%。非COVID-19组中,1例IgM阳性,阳性率为2.4%;0例IgG阳性,阳性率为0;1例联合检测（IgM或IgG）阳性,阳性率为2.4%。在COVID-19组中,化学发光法与胶体金法检测SARS-CoV-2抗体联合检测（IgM或IgG）的阳性率分别为96.1%和68.6%,化学发光法优于胶体金法（P＜0.05）。结论　SARS-CoV-2抗体的检测对COVID-19诊断有重要的意义,且化学发光法检出率优于胶体金法。     

严重急性呼吸综合征康复病例血清中和抗体三年追踪观察

目的了解严重急性呼吸综合征（SARS）康复病例病后3年血清中和抗体水平及其变化规律,为SARS疫苗的研制和使用决策提供理论依据。方法对SARS康复病例进行随访,分别采集病后第5个月、第20个月和第35个月的血清,每份血清标本均采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和微量中和试验二种方法进行血清SARS-CoV特异性抗体的检测。中和抗体效价采用Reed-Muench方法计算。3个时间点中和抗体效价的趋势分析采用对数转换后的数据进行重复测量方差分析。结果分别采集到病后第5个月、第20个月和第35个月的血清标本13份、17份和13份,采用ELISA法检测的抗体阳性率分别为100%、82．4%和84．6%,而采用中和试验法检测的中和抗体阳性率均为100%,中和抗体效价依次为1：43（1：16～1：203）、1：36（1：17～1：59）和1：21（1：10～1：39）,其差异具有统计学意义（F=60．419,P＜0．001）。病后第35个月时有30．8%（4/13）的病例血清中和抗体效价高于1：36,但另有30．8%（4/13）的病例血清中和抗体效价等于或略高于1：10（临界水平1：8）。结论SARS病例血清中和抗体至少可持续3年,但中和抗体效价随康复时间延长呈逐渐下降趋势;血清中和抗体效价个体差异较大,病后第35个月时部分病例的血清中和抗体效价已降至较低水平,何时完全消失尚需进一步追踪观察。     

口腔液在新型冠状病毒核酸和抗体检测中的应用

为探讨新型生物标本口腔液在新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸和抗体检测中的应用价值,采集2021年10—11月北京两起新型冠状病毒肺炎（简称“新冠肺炎”）聚集性疫情的7例确诊病例的口腔液及配对的呼吸道和血液样本。采用荧光定量PCR和血清抗体检测试剂盒分别检测SARS-CoV-2核酸和IgG抗体,同时采用新建的磁微...     

确诊患者病房新型冠状病毒污染状况

 

目的 了解新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者病房新型冠状病毒（SARS-CoV-2）污染状况。方法 对COVID-19患者病房物体表面以及患者手、护士手套外表面进行涂抹采样,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对涂抹拭子进行SARS-CoV-2核酸检测。结果 47份标本中1份SARS-CoV-2核酸检测阳性,阳性率为2.13%。阳性标本为采样当日SARS-CoV-2核酸检测阳性患者保暖衬衣袖口内表面涂抹拭子,保暖衬衣自患者入院后未曾更换;患者病房高频接触的物体表面如门把手、床档、床头桌、心电监护仪、输液泵等,以及患者手、护士手套外表面等消毒前采集的涂抹拭子SARS-CoV-2核酸检测均阴性。结论 COVID-19患者病房SARS-CoV-2污染程度较低,考虑与病房每日均进行物体表面的清洁消毒,以及强调手卫生有关。患者入院后应更换患者服,患者服应定期更换,有污染时随时更换。

     

新型冠状病毒肺炎患者粪便中新型冠状病毒的分离鉴定

目的分离鉴定新型冠状病毒肺炎（COVID?19）患者粪便标本中的新型冠状病毒（SARS?CoV?2）,并进行生物学特性分析。方法利用Vero E6细胞对收集到的SARS?CoV?2核酸阳性粪便标本开展病毒分离,对产生细胞病变的培养物进行病毒核酸检测、免疫荧光抗原检测、病毒含量测定及全基因组测序分型。收集每代细胞培养物后进行半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）实验。结果8份粪便标本经处理后分别接种Vero E6细胞,培养48 h,1份标本在Vero E6细胞上发现明显细胞病变。8例COVID?19患者粪便病毒核酸阳性标本中分离到1株SARS?CoV?2,阳性分离率为12.5%。病毒能稳定传至第3代,P1代病毒TCID₅₀为104.0/0.2 mL,P2代病毒TCID₅₀为104.5/0.2 mL,P3代病毒TCID₅₀为104.75/0.2 mL。8份粪便样本中仅1份有SARS?CoV?2活毒的复制扩增,传代培养的核酸检测Ct值约为10。该分离株的序列与Wuhan?Hu?1株序列（GenBank MN908947）的同源性>99.99%。结论从COVID?19患者粪便中分离到SARS?CoV?2活毒株,COVID?19患者中不仅存在粪便排毒的现象,且有活病毒存在。     

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)实验室检测策略

由严重急性呼吸综合征冠状病毒-2（SARS-CoV-2）感染引起的2019冠状病毒疾病（COVID-19）为全球性流行病和公共卫生威胁。人们付出了巨大的努力去认识和治疗COVID-19,更可取的是防止感染及临床疾病形成。COVID-19疫苗包括灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、mRNA疫苗和亚单位疫苗接种都可诱导绝大多数受试成人产生强体液免疫应答和细胞免疫应答,形成高滴度S蛋白特异性抗体、中和抗体及强Th1细胞因子应答,疫苗对成人COVID-19的保护效力 > 70 %。多个因素会影响疫苗保护效力。     

微量细胞中和试验在检测流行性乙型脑炎抗体中的应用

[目的]探索检测流行性乙型脑炎中和抗体方便而可靠的方法。[方法]应用微量细胞中和试验对健康人群的流行性乙型脑炎抗体进行了检测，并检测了30份鼠脑中和试验阳性的血清，与反向间接血清凝集抑制试验测得的抗体进行对比。[结果]用微量细胞中和试验法测得的抗体能真正了解人群对乙脑病毒的免疫力，而不能用血凝抑制试验代替中和试验检测中和抗体。[结论]微量细胞中和试验是检测流行性乙型脑炎中和抗体的方便而可靠的方法。     

火神山医院隔离病区新型冠状病毒污染情况调查

目的评价火神山医院隔离病区新型冠状病毒(SARS-CoV-2)污染情况,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)隔离病区制定合理的环境卫生管理策略提供科学依据。方法 2020年3月9日-3月29日在火神山医院随机选取2个普通隔离病区进行系统的样本采集工作。采集对象包括环境样本、医务人员个人防护用品(PPE)样本以及患者和医务人员手样本。采用棉签擦拭法采集样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测法对样本进行SARS-CoV-2核酸检测,并对检测结果进行整理和分析。结果共采集244份样本,经SARS-CoV-2核酸检测,171份环境样本中1份阳性,来自患者床栏,阳性率为0.58%;49份医务人员PPE样本均为阴性;患者和医务人员手样本共24份,其中1份患者手样本阳性,阳性率为4.17%。结论合理规划隔离病区的布局和流程、严格落实环境消毒和手卫生制度能够有效降低隔离病区SARS-CoV-2污染程度,切断病毒传播途径,降低医务人员医院感染暴露风险。同时,COVID-19医院感染防控中还应加强患者个人卫生管理。     

新型冠状病毒感染核酸和抗体检测方法比较

目的比较实时荧光RT-PCR法和胶体金法在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染中的诊断价值。方法本研究采用回顾性研究,收集无锡市各医疗机构及集中隔离点2020年1月25日—2020年2月12日送至无锡市疾病预防控制中心实验室的新型冠状病毒冠肺炎(COVID-19)相关的实验室检测血清标本和鼻咽拭子标本各192份。33份为核酸检测阳性样本,159份为核酸检测阴性样本,包括68例确诊患者的密切接触者和91例门诊发热病例样本。采用胶体金法对所有研究对象的血清进行IgM、IgG抗体检测,比较抗体检测和核酸检测结果,进行统计学差异分析。结果病毒核酸阳性率17.19%(33/192),IgM抗体阳性率7.29%(14/192),IgG抗体阳性率11.46%(22/192),IgM和IgG联合检测阳性率11.46%(22/192)。病毒核酸和IgM、IgG、联合IgM和IgG抗体检测结果分别进行Kappa一致性检验,一致性较好,Kappa值分别为0.502、0.726、0.726,P值均<0.001。两种检测方法总符合率93.23%(179/192)。以实时荧光RT-PCR法为金标准,联合...     

狂犬病毒中和抗体检测快速荧光灶抑制试验的建立

目的 建立检测狂犬病毒中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),检测狂犬病毒中和抗体滴度.方法 以狂犬病标准毒株CVS-11为标准攻击毒,制备三代病毒,建立CVS-11病毒库;以国际标准抗狂犬病毒血清为对照血清,参考法国巴斯德研究所的RFFIT操作标准,建立适应于中国狂犬病毒中和抗体检测的RFFIT方法 ,并验证该方法 的特异性、稳定性和重复性.结果 成功建立了检测狂犬病毒中和抗体的RFFIT试验,验证该试验方法 的特异性为100%;重复性试验表明,在本实验室和不同实验室的检测结果 P值均＞0.5,具有很好的重复性.结论 RFFIT方法 的建立进一步完善了中国狂犬病的实验室检测技术,也将提升中国狂犬病的整体监测能力.     

不同人群新型冠状病毒核酸检测的临床价值

 目的 探讨新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测在发热门诊、隔离病房、易感人群以及大规模筛查等不同人群中的应用价值,为SARS-CoV-2实验室检测提供参考依据。方法 采集2020年2月1日-3月22日郑州人民医院不同人群的咽拭子,包括发热门诊、隔离病房患者,一线疫情防控医护人员,以及无新型冠状病毒肺炎（COVID-19）症状的住院患者、陪护家属和复工人员。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,使用A、B两种国产检测试剂盒对发热门诊、隔离病房的患者进行SARS-CoV-2核酸检测。结果 共检测15 497份咽拭子标本,SARS-CoV-2核酸阳性24份,核酸阳性病例均来自发热门诊和隔离病房。24例咽拭子SARS-CoV-2核酸阳性患者同时送检的血标本核酸结果均呈阴性。A、B两种试剂首次咽拭子核酸检测结果一致,2例确诊COVID-19患者治疗后复查咽拭子标本,A组试剂检测为阳性,B组试剂检测为阴性。该院疫情防控一线医护人员、未出现COVID-19症状的住院患者、陪护家属和复工体检人员核酸检测均为阴性。结论 复工人员、住院患者、陪护家属和一线疫情防控人员SARS-CoV-2核酸筛查均未发现阳性,咽拭子标本SARS-CoV-2核酸检测阳性率高于血标本,不同核酸检测试剂检测阳性率稍有差异。     

水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验

目的 建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法。方法 用VZV1毒种制备中和抗原，以50pfu左右病毒量加待测血清36℃和1h，接种Vero-E6单层细胞，烛缸法培养10d后，用结晶紫染色，计数pfu；以中和后pfu减少50％的血清最高稀释度为中和抗体滴度。结果 VZV1在Vero-E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形，平均Φ0.85mm，边界清晰；经试验3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度＜1：2，免后分别为1：16、1：31、1：64；5份中和抗体阳性血清经重复测试3次，中和抗体最多相差1个滴度；24份血清同时测定VZV中和、荧光、酶示抗体的GMT比值为1：1．83：46．25。结论 VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好，可用于VZV疫苗免疫效果考核。     

新型冠状病毒实验室检测方法研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)正在世界范围内暴发流行,导致人类严重呼吸道疾病且致死率高,引起全球的高度关注。该病毒造成的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)尚无特效治疗药物,早期诊断是当前主要的防控措施。依据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》,病毒核酸检测阳性、基因测序高度同源或血清学抗体检测阳性均可确诊SARS-CoV-2感染,然而各种检测方法均存在一定的假阴性率和潜在的假阳性结果。本文对目前正在应用和报道的SARS-CoV-2实验室检测方法,如病毒分离、二代测序技术、反转录-聚合酶链式反应、恒温核酸扩增技术、基因芯片和抗体检测等进行综述,并探讨各种方法的优缺点,为优化SARS-CoV-2感染诊断提供参考。     

柯萨奇病毒Ａ 组１６型多克隆抗体的制备及其 在检定中的应用

摘要：目的　评价ＣＶ Ａ１６ Ｋ１６８免疫血清对ＣＶ Ａ１６不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量 所需的最低血清量,为ＣＶ Ａ１６疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考。方法　将ＣＶ Ａ１６病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,采用微量细胞病 变法进行中和抗体效价检测和对１５ 株不同ＣＶ Ａ１６ 毒株的中和效价检测, 并用ＣＶ Ａ１６ ４Ｖ 和ＣＶ Ａ１６ １０Ｒ 两个毒株分析中和不同量病毒所需的抗体量。结果　浓缩抗原作为免疫原获得的兔抗ＣＶ Ａ１６血清中 和抗体效价可达１∶２０４８;该免疫血清对１５ 株ＣＶ Ａ１６ 不同毒株的几何平均滴度（ｇｅｎｏｍｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒ, ＧＭＴ）为１∶３１１８;完全中和７．５ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌＣＶ Ａ１６病毒所需的最低血清量为１２８Ｕ,当病毒量在４．０ ～７．０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ时,完全中和所需的最低血清量为４８Ｕ,当病毒量低于４．０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ时,１Ｕ 的血 清即可完全中和本病毒。结论　ＣＶ Ａ１６ Ｋ１６８株作为免疫原可获得高效价的抗血清;用不同毒株检测得到 的抗体效价存在差异;完全中和病毒所需的最低血清量与病毒量呈正相关;病毒量与测得的血清中和效价 呈负相关。 关键词：柯萨奇病毒Ａ 组１６型;免疫血清;中和能力;疫苗检定 中图分类号：Ｒ３７８．２ ＋ Ｒ３９２ ３３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１７）０７ ０４９７ ０４     

精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制及免疫学效果观察

目的　以Vero细胞为基质，研制新一代精制Vero细胞狂犬病疫苗。方法　以CTN-1V10为生产毒株，以＜150代Vero细胞为培养基质，采用转瓶旋转培养，按不同时间收获病毒液，经过澄清、浓缩、纯化、灭活制成精制Vero细胞狂犬病疫苗。从以此工艺制备的疫苗中选取一批做为免疫学效果观察的受试疫苗。按暴露后免疫程序接种63人，其中受试疫苗接种33人，法国维尔博狂犬病疫苗接种30人，观察不良反应和测定中和抗体。结果　新研制的精制Vero细胞狂犬病疫苗各项指标完全符合WHO的有关质量要求。两种疫苗全程免疫后中和抗体阳转率均为100%，中和抗体受试组为11.94IU/ml;维尔博疫苗对照组为11.69IU/ml。结论　精制Vero细胞狂犬病疫苗不但制造工艺合理，而且副反应轻微，免疫原性良好。     

柯萨奇病毒A组16型多克隆抗体的制备及其在检定中的应用

目的评价CV-A16-K168免疫血清对CV-A16不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量所需的最低血清量,为CV-A16疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考。方法将CVA16病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,采用微量细胞病变法进行中和抗体效价检测和对15株不同CV-A16毒株的中和效价检测,并用CV-A16-4V和CV-A16-10R两个毒株分析中和不同量病毒所需的抗体量。结果浓缩抗原作为免疫原获得的兔抗CV-A16血清中和抗体效价可达1∶2 048;该免疫血清对15株CV-A16不同毒株的几何平均滴度(genomic mean titer,GMT)为1∶3 118;完全中和7.5lgCCID50/ml CV-A16病毒所需的最低血清量为128U,当病毒量在4.0~7.0lgCCID50/ml时,完全中和所需的最低血清量为48U,当病毒量低于4.0lgCCID50/ml时,1U的血清即可完全中和本病毒。结论 CV-A16-K168株作为免疫原可获得高效价的抗血清;用不同毒株检测得到的抗体效价存在差异;完全中和病毒所需的最低血清量与病毒量呈正相关;病毒量与测得的血清中和效价呈负相关。     

化学发光微粒子免疫分析法在梅毒感染筛查中的效能分析

目的探讨化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测梅毒抗体用于梅毒感染筛查的效能。方法用1份低值血清和1份高值血清对CMIA检测血清梅毒抗体进行精密度评价;将梅毒抗体标准品稀释至临界值附近,对CMIA法检出限进行验证;阴性、阳性样本以不同比例混合,对cut-off值附近的重复性进行验证。对CMIA法检测阳性标本进行TP-PA确证,同时进行RPR试验,此外对CMIA法检测阴性的384例标本进行TP-PA检测,评价CMIA检测梅毒抗体的检测效能。结果 CMIA检测梅毒抗体的批内和批间精密度CV均8%,检出限为4 NCU/ml,cut-off值附近样本重复性结果显示低于cut-off值20%的20份样本均为阴性,高于cut-off值20%的20份样本均为阳性。38 902例血清样本经CMIA检测615例梅毒抗体阳性,其中TP-PA阳性为401例,RPR阳性为110例。384例CMIA检测阴性样本经TP-PA验证后均为阴性。结论 CMIA法可用于有效筛查梅毒感染,但对于弱阳性结果应进一步验证。     

2002年福建省急性出血性结膜炎病原分离和鉴定

[目的]查明2002年我省急性出血性结膜炎(AHC)流行的病原。[方法]采集福州和漳州市临床诊断为AHC的患者眼拭子57份、双份血清7份。分别用Hep-2和Vero细胞对标本进行病原分离；用免疫血清微量中和试验对分离出的毒株进行鉴定；用诊断血清鉴定的4株病毒，对7例患者的双份血清进行中和抗体效价测定。[结果]从57份眼拭子标本中分离出47株(阳性率82．5％)；经诊断血清微量中和试验鉴定，均为柯萨奇病毒24变异株(CA24v)；7例患者双份血清经微量中和试验测定，中和抗体均呈≥4倍增长。[结论]CA24v是引起2002年我省AHC流行的病原。     

间接免疫荧光法在健康人群新布尼亚病毒抗体检测中的应用

目的探讨间接免疫荧光法（IFA）对急性发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SVTSV）感染的诊断价值,并了解宁波市象山县SFTSV流行区健康人群的抗体水平。方法非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）分离的本地SYTSV株制作抗原片,以IFA法和EUSA法对象山县265份健康人群血清进行SFTSV抗体测定,并用病毒微量中和试验（MNT）验证两种方法的检测效果。结果265份象山县健康人群血清中,IgG抗体经IFA法检测共36份阳性,阳性率为13．58％（36／265）;经ELISA法检测,共23份阳性,阳性率为8．68％（23／265）;两者差异有统计学意义（X^2=9．624,P〈0．05）。与MNT法检出结果对比,IFA法诊断的符合率为89．19（33／37）,而ELISA法的符合率为70．27％（26／37）;两者比较差异有统计学意义（X^2=4．097,P〈0．05）。所有SFTSV—IgG阳性样本中SFTSV—IgM同时阳性共23份,占62．16％（23／37）。结论IFA法可同时检测SFTSV—IgG和-IgM抗体,可作为未在病毒血症期内就症病例的补充诊断方法,也适合对人群抗体水平的调查。宁波市象山县健康人群中检出较高水平的SFTSV-IgG抗体,表明存在SFTSV的流行以及隐性感染;SFTSV—IgM阳性提示这些感染为新近感染。