肉桂酸对胃腺癌细胞诱导分化的实验研究

目的观察肉桂酸对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法肉桂酸(1、2和3mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期、TRAP-银染法测定端粒酶活性。结果肉桂酸作用24、48、72和96h后胃腺癌细胞生长均明显受抑制,作用48h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。端粒酶活性明显受到抑制。细胞集落形成率明显下降(P<0.05)。结论肉桂酸对胃腺癌细胞有诱导分化作用。     

1,25-二羟维生素D_3对肾间质纤维化大鼠IL-17的调节作用

目的:观察1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对肾间质纤维化大鼠中白介素-17(IL-17)的调节作用。方法:54只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组和UUO+1,25(OH)_2D_3干预组,模型组和干预组行左侧输尿管结扎术,干预组给予1,25(OH)_2D_33 ng·100 g~(-1)·d~(-1)灌胃,其余两组给予等量花生油灌胃,灌胃满1 d、3 d、7 d后取左肾,采用免疫组织化学的方法检测IL-17、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。结果:经光镜及免疫荧光检查证实造模成功。UUO模型组与假手术组比较,α-SMA和IL-17的表达水平均显著升高(P<0.05);干预组与UUO模型组比较,上述指标均显著降低(P<0.05)。结论:IL-17可能参与了肾间质纤维化的发生和发展;1,25(OH)_2D_3可能通过直接或间接下调IL-17的表达延缓肾间质纤维化的进展。     

1,25-二羟维生素D3对免疫功能影响的研究

1,25（OH）2D3是一组具有生物活性的脂溶性类固醇化合物,与体内钙磷代谢密切相关,属于第二甾体类激素。近年来随着研究的深入,发现它在调节机体免疫功能方面也发挥着重要作用,其作用主要是通过特定的维生素D受体对靶细胞（如T细胞,抗原呈递细胞）发挥效应进行调节。本文就它对免疫功能影响的研究作一综述。     

血清1,25-二羟维生素D3表达水平对糖尿病患者的临床意义

目的 观察糖尿病患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平,探讨其表达水平对糖尿病患者的临床意义.方法 收集本院单纯糖尿病患者48例作为单纯糖尿病组,糖尿病肾病患者37例作为糖尿病肾病组,对照组选取50例健康体检者,采用ELISA法检测患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平,分析1,25-二羟维生素D3的表达水平与糖尿病患者病情严重程度的关系.结果 单纯糖尿病及糖尿病肾病患者血清中1,25-二羟维生素D3及25-二羟维生素D3表达水平明显低于健康体检者（t=4.87,P＜0.05;t=5.12,P＜0.05）;糖尿病肾病组患者血清中1,25-二羟维生素D3及25-二羟维生素D3的表达水平明显低于单纯糖尿病组,差异有统计学意义（t=3.56,P＜0.05）.结论 糖尿病患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平低于健康人,其表达水平与糖尿病患者病情严重程度呈负相关,这可能有助于临床上对糖尿病患者早期病情的判断。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠维生素D3上调蛋白1的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3(1,25(OH)2D3)对哮喘大鼠维生素D3上调蛋白l(VDUP1)的表达及气道炎症的影响.方法28只Wistar大鼠随机分为四组:对照组、哮喘组、1,25-(OH)2D3组和地塞米松组.以卵蛋白为致敏原制备哮喘大鼠模型,1,25-(OH)2D3组在激发前1h口服1,25-(OH)2D...     

1,25-二羟维生素D3对OS-732人成骨样细胞增殖与分化的影响

目的观察1,25-二羟维生素D3对体外培养的人成骨样细胞增殖与分化的影响,以进一步探讨其治疗骨质疏松的机制。方法采用MTT比色分析法检测1,25-二羟维生素D3对体外培养OS—732人成骨样细胞增殖的作用与效价。采用培养细胞匀浆上清测单位蛋白下的碱性磷酸酶活性,培养基中骨钙素(BGP)含量分析方法检测1,25-二羟维生素D3对OS—732人成骨样细胞分化的影响。结果培养第4天,10-7mol/L1,25-二羟维生素D3显著抑制成骨样细胞增殖(P<0.05),10-8mol/L、10-9mol/L1,25-二羟维生素D3对成骨样细胞的作用不明显。培养4天后培养基中BGP水平在10-7mol/L组变化不大,在10-8mol、10-9mol/L1,25-二羟维生素D3组BGP水平显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论1,25-二羟维生素D3抑制成骨样细胞增殖在高剂量时作用显著,促进成骨样细胞分化作用在较低剂量显著。     

1,25-二羟维生素D_3对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化调节性T细胞的作用研究

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化调节性T细胞(Treg)的作用。方法:54只健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、1,25(OH)2D3治疗组(C组)。每组于术后第1天、第3天、第7天分批处死6只,留取肾脏组织。用HE染色观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学染色法测定肾脏人叉头框蛋白P3(FOXP3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与假手术组相比,UUO组FOXP3表达水平显著降低,α-SMA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与UUO组相比,1,25(OH)2D3治疗组FOXP3表达水平显著升高,α-SMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:调节性T细胞可能参与了肾间质纤维化的发生及发展;1,25(OH)2D3作为免疫调节剂可通过上调调节性T细胞减缓肾脏纤维化的进展。     

1,25-二羟维生素D_3对哮喘大鼠BALF中Eotaxin及IL-8表达的影响

目的观察1,25-(OH)2D3对哮喘大鼠BALF中Eotaxin及IL-8表达的影响。方法 50只Wistar大鼠随机分为正常对照组(N)、哮喘组(A)、1,25-(OH)2 D3组(VD)、布地奈德组(B)及1,25-(OH)2 D3+布地奈德联合治疗组(L),每组10只。用ELISA法检测BALF中Eotaxin及IL-8的表达水平。结果各组Eotaxin和IL-8表达比较:A组较其他各组明显增高(P<0.01、P<0.05);VD组较A组明显降低(P<0.05),但仍高于N组、B组及L组(P<0.01);L组较A组、VD组及B组明显减低(P<0.05、P<0.01)。结论哮喘急性发作时,BALF中Eotaxin及IL-8的表达水平显著增高,1,25-(OH)2D3有效抑制了哮喘时的Eotaxin和IL-8的表达水平,与布地奈德联合治疗作用更为明显。     

1,25二羟维生素D_3对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp_2/p27蛋白表达的影响

目的:观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对人卵巢癌细胞株HO8910增殖的影响,并且检测其作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27的蛋白表达情况,以探讨其作用机制。方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度D3[1,25(OH)2D3]对细胞株作用不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫细胞化学染色检测Skp2及p27蛋白表达情况。结果:1,25(OH)2D3在160×10-9mol/L以上时,对细胞有抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;1,25(OH)2D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数(P<0.01);能降低Skp2表达,增加p27蛋白表达(P<0.01)。结论:1,25(OH)2D3对人卵巢癌细胞株HO8910有抑制作用,可能通过下调Skp2表达、上调p27蛋白表达,从而抑制癌细胞增殖。     

1,25-二羟维生素D_3对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖及RhoA表达的影响

目的观察1,25-(OH)_2D_3对哮喘大鼠AMSCs增殖及Rho A表达的影响,探讨其在哮喘治疗中的作用。方法用卵白蛋白致敏和激发建立急性哮喘模型,原代培养急性哮喘大鼠的ASMCs,以1,25-(OH)_2D_3作为干预因素,CCK8法检测1,25-(OH)_2D_3对ASMCs增殖的影响,测定细胞增殖活力;用TNF-α、1,25-(OH)_2D_3和地塞米松(DXM)处理体外培养的急性哮喘大鼠ASMCs并分组:对照组(N)、哮喘组(A组)、1,25-(OH)_2D_3组(VD组)、DXM组、1,25-(OH)_2D_3+DXM联合治疗组(L组)。用Transwell小室检测细胞迁移;流式细胞仪测定细胞周期。同时采用Real time PCR和Western blot方法检测肺组织和ASMCs中Rho A的表达变化,研究其作用机制。结果 1,25-(OH)_2D_3在10-9~10-6mol/L浓度下能显著抑制ASMCs的增殖,且为浓度依赖性(P<0.05);1,25-(OH)_2D_3对哮喘大鼠的ASMCs的抗增殖作用呈现时间依赖性;1,25-(OH)_2D_3对哮喘大鼠的ASMCs迁移有明显的抑制作用;1,25-(OH)_2D_3显著抑制哮喘大鼠ASMCs细胞周期中G1/S期的转化;1,25-(OH)_2D_3抑制并减少了Rho A/Rho激酶信号通路中RhoA基因和蛋白的表达。结论 1,25-(OH)_2D_3能显著抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖、迁移及细胞周期的进展,这种多重的抑制作用可能是其通过调控Rho A/Rho激酶信号通路而实现其调节哮喘气道炎症、AHR和气道重塑的作用机制之一。     

1,25（OH）2D3对人肾小球系膜细胞增殖及PCNA表达的影响

目的探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）₂D₃]对人肾小球系膜细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达及细胞增殖的影响。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3⁸代细胞随机分为4组:正常对照组（加含5%胎牛血清DMEM培养基）,增殖对照组（EGF组,加10μg/L的EGF）,一般干预组[VD组,加10^-8mol/L 1,25（OH）₂D₃],增殖干预组[EGF+VD组,加10μg/L EGF及10^-8mol/L1,25（OH）₂D₃],均作用48 h。流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot检测各组PCNA表达的情况。结果 （1）细胞周期。与正常对照组相比,EGF组G₁期细胞明显减少,S、G2/M期细胞增多,增殖指数（PI）较高;VD组G₁期细胞明显增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组G₁期细胞增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低,差异均有统计学意义。（2）系膜细胞中PCNA蛋白的表达。与正常对照组相比,EGF组PCNA的表达较高,VD组PCNA的表达较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组PCNA的表达较低。结论 1,25（OH）₂D₃通过阻滞细胞周期、抑制PCNA的表达,从而抑制人肾小球系膜细胞的增殖。     

CTGF在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达以及活性维生素D_3干预治疗的研究

目的：观察单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织中CTGF的表达以及活性维生素D3（1,25-（OH）2D3）对其表达的影响。探讨1,25-（OH）2D3对大鼠肾间质纤维化的调节作用。方法：随机采用体重180~220g的清洁级Wistar大鼠,雄性,36只,随机分为假手术组（n=12）、UUO模型组（n=12）、活性维生素D3组（n=12）。造膜后活性维生素D3组给予罗盖全（骨化三醇）灌胃（3ng/100g）,假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。给药后第14天,28天分批（n=6）处死,取造膜侧肾脏。用HE染色及Masson染色方法观察肾脏组织纤维化程度,用免疫组化法测定结缔组织生长因子（CTGF）在各组大鼠造膜侧肾脏的表达情况。结果：与假手术组比较,UUO模型组大鼠的肾脏组织中CTGF的表达有显著增高（P〈0.05）,而在活性维生素D3治疗组中,CTGF的表达低于UUO模型组（P〈0.05）,肾间质纤维化程度也明显小于模型组（P〈0.01）。结论：CTGF在UUO大鼠肾脏中表达明显增高,1,25（OH）2D3能有效抑制UUO大鼠肾脏组织CTGF的表达,从而减轻UUO大鼠肾脏组织纤维化程度。     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.     

活性维生素D3对肾小球上皮间质转化的影响研究

目的:观察活性维生素D₃（1,25-（OH）₂D₃）对糖尿病大鼠肾小球足细胞标志蛋白Nephrin,间质转化标志蛋白Snail及间质标志蛋白Desmin表达的影响,探讨1,25-（OH）₂D₃在上皮间质转化中的作用。方法:24只链脲菌素诱导的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组（DM）和1,25-（OH）₂D₃治疗组（DD）,后者给与1,25-（OH）₂D₃按3 ng·100 g^-1·d^-1皮下注射。另以10只大鼠作为对照组（NC）。于6周检测血糖（BG）、24 h尿蛋白（24 h UP）、尿液足细胞（UPC）。处死大鼠,PT-PCR及Westernbolt分别测定肾小球Nephrin、Snail、Desmin mRNA和蛋白质的表达。结果:DM组BG、24 h UP较NC组显著升高,而UPC与NC组相比无显著差异。DM组肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达水平较NC组显著降低,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达显著增加。DD组BG、UPC与DM组相比无显著差异,而24 h UP较DM组显著降低,肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达较DM组升高,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达降低。结论:1,25（OH）₂D₃上调Nephrin的表达,并减少Snail、Desmin的表达,可抑制上皮间质转化,减轻肾损伤。     

1,25(OH)2D3对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞功能的影响

目的 观察1,25-双羟维生素D3(1,25(OH)2D3)通过miR-124-3p调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞功能的影响,探讨其作用机制.方法 体外培养肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激后,随机分为10,20,40,80,160 ng·m...     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

Objective To investigate the expressions of vitamin D receptor (VDR) in endometrial carcinoma cell HEC-1-A;to study the effect of 1,25-(OH)2D3 on prolifetation of human endometrial carcinoma cell HEC-1-A and the mechanism of detecting the expression of S-phase kinase associated protein 2 ( Skp2 ) and p27 gene.Methods Expressions of VDR in human endometrial carcinoma cell HEC-1-A were detected by immunohistochemical method. HEC-1-A human endometrial carcinoma cell line were cultured in vitro and treated with different concentrations of 1,25-( OH)2D3 for 1-5 days. Cell proliferation was evaluated by CCK-8 method, distribution of cell cycle were determined by flow cytometry. The expression level of Skp2/p27 mRNA was examined by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). The expression level of Skp2/p27 protein was finally detected by Western blotting. Results (10-8-10-6) mol/L 1,25-(OH)2D3 inhibited the proliferation of HEC-1-A cell line,and inhibitory rate was positively associated with concentration of 1,25-( OH)2D3 and treatment time. 1,25-(OH)2D3 increased the rates of G0/G1, decreased the rates of S and G2/M and also decreased cells PI (P ＜0.01 ). The mRNA and protein expression of Skp2 in HEC-1-A cell lines after 1,25 (OH)2 D3 treatment decreased.The level of p27 mRNA was decreased but the level of p27 protein was significantly increased. Conclusions 1 ,25-(OH)2D3 can inhibit the growth of HEC-1-A cell line. It may inhibit cancer cell proliferation through down-regulation of Skp2 gene and increase p27 stability by decreasing the abundance of Skp2.     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

Objective To investigate the expressions of vitamin D receptor (VDR) in endometrial carcinoma cell HEC-1-A;to study the effect of 1,25-(OH)2D3 on prolifetation of human endometrial carcinoma cell HEC-1-A and the mechanism of detecting the expression of S-phase kinase associated protein 2 ( Skp2 ) and p27 gene.Methods Expressions of VDR in human endometrial carcinoma cell HEC-1-A were detected by immunohistochemical method. HEC-1-A human endometrial carcinoma cell line were cultured in vitro and treated with different concentrations of 1,25-( OH)2D3 for 1-5 days. Cell proliferation was evaluated by CCK-8 method, distribution of cell cycle were determined by flow cytometry. The expression level of Skp2/p27 mRNA was examined by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). The expression level of Skp2/p27 protein was finally detected by Western blotting. Results (10-8-10-6) mol/L 1,25-(OH)2D3 inhibited the proliferation of HEC-1-A cell line,and inhibitory rate was positively associated with concentration of 1,25-( OH)2D3 and treatment time. 1,25-(OH)2D3 increased the rates of G0/G1, decreased the rates of S and G2/M and also decreased cells PI (P ＜0.01 ). The mRNA and protein expression of Skp2 in HEC-1-A cell lines after 1,25 (OH)2 D3 treatment decreased.The level of p27 mRNA was decreased but the level of p27 protein was significantly increased. Conclusions 1 ,25-(OH)2D3 can inhibit the growth of HEC-1-A cell line. It may inhibit cancer cell proliferation through down-regulation of Skp2 gene and increase p27 stability by decreasing the abundance of Skp2.