冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞, MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡, TRAP- PCR- ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,有明显的量-效与时-效关系.结论 冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对NB4细胞的诱导凋亡机制

目的：研究冬凌草甲素对急性白血病NB4细胞的诱导凋亡作用，并对其作用机制进行探讨。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞，检测细胞生长抑制率，观察细胞凋亡时的形态学变化，对细胞凋亡前后的Caspase3活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著的升高NB4细胞Caspase3活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能诱导NB4细胞凋亡，升高Caspase3活性是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对白血病HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA及FCM法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及P53蛋白表达水平的变化.结果:8 umol/L以上的冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物作用48小时后细胞的凋亡率达高峰,在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变.在细胞凋亡过程中,端粒酶活性下降,同时P53蛋白的表达水平显著升高.结论:冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,升高P53蛋白的表达水平及降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据.     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制作用,为其临床应用提供理论依据。方法SRB法检测冬凌草甲素对CNE-2细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡的发生。结果冬凌草甲素抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;冬凌草甲素诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死,流式细胞分析发现“亚G1期峰”;冬凌草甲素作用后CNE-2细胞的G2/M期比例增多。结论凋亡和坏死同为冬凌草甲素抑制CNE-2细胞生长的机制,可能与改变细胞周期有关,且具有浓度依赖性。     

冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究

目的:探讨冬凌草乙素(ponicidin,PON)对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以不同浓度的PON(10~50μmol.L-1)作用于体外培养的K562细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,收集药物作用72h后的细胞Annexin V染色并通过流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法(Western blot)检测caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对MAPKs(mitogen-acti-vated protein kinase)信号转导通路相关蛋白(p-P38,p-ERK和p-JNK)以及PI3K(磷脂酰肌醇-3-激酶)/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平进行检测。结果:30μmol.L-1以上的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,不同浓度的药物作用72 h后,随药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐升高,50μmol.L-1的PON作用不同时间后在瑞氏-姬姆萨染色下可见典型的核浓缩及核碎裂等细胞凋亡现象。Western blot检测结果表明,药物作用48 h后caspase-3被活化出现17 kD的亚单位,同时PARP被裂解出现89 kD的亚单位片段。Western blot检测结果进一步显示药物作用48 h后MAPKs信号途径中p-P38,p-ERK和p-JNK蛋白的表达水平无明显变化,而PI3K/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平则随着药物浓度增加而逐渐下降。结论:PON可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K/AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关,而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关;这些研究结果为进一步研究冬凌草素的抗白血病作用提供了有力的实验依据和技术平台。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用原理及caspase途径在凋亡过程中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法,形态学观察,RT-PCR及流式细胞法.结果 冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.形态学观察可见MDA-MB-231的增殖受明显抑制.冬凌草甲素可诱导细胞内抑制凋亡基因Bc1-xl表达量时间依赖性减少,促凋亡基因Bid表达量增加,caspase-3 的表达增加.40 μmol/L药物处理48 h后,流式法检测细胞凋亡率为75%.结论 冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡,这种作用可能是通过改变Bc1-xl/Bid的表达比率、激活caspase-3 而实现的.     

探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对APL细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外常规培养NB4细胞,通过转染LncRNA-H19siRNA沉默LncRNA-H19表达,将细胞分为对照组、LncRNA-H19 siRNA组、冬凌草甲素组和联合干预组。采用RT-PCR法检测细胞中LncRNA-H19表达,CCK-8法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western Blot法检测细胞中目的蛋白表达水平。结果 :LncRNA-H19 siRNA组和联合干预组细胞中LncRNA-H19表达量显著低于对照组(P0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),细胞中β-catenin、Cyclin D1、C-myc、PI3K和AKT蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);冬凌草甲素组细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于对照组(P0.05),细胞中PI3K蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);联合干预组干预效果明显优于LncRNA-H19 siRNA组或冬凌草甲素组(P0.05)。结论:沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素能显著抑制APL进展,可能与其抑制Wnt/β-catenin和PI3K/AKT信号通路及其下游因子有关。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素及冬凌草乙素的含量

目的：建立冬凌草的质量控制方法。方法：高效液相色谱法同时对冬凌草中冬凌草甲素、冬凌草乙素进行了含量测定。采用C18柱，以甲醇-水(55：45)为流动相，检测波长238nm。结果：冬凌草甲素的浓度在0．152～1．52μg／ml，冬凌草乙素的浓度在0．2～2μg／ml范围内，线性关系良好(冬凌草甲素r=0．9998，n=5；冬凌草乙素r=0．9992，n=5)，平均回收率冬凌草甲素为99．1％，RSD为0．4％；冬凌草乙素为98．0％，RSD为0．6％。结论：该法准确、灵敏、可靠，可用于冬凌草的质量控制。     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤 LP1细胞凋亡的实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Oridonin）对LP-1细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法采用不同浓度冬凌草甲素处理人多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）LP-1细胞,通过MTT比色法检测LP-1细胞的增殖活性,AnnexinV／PI双染色法检测LP-1细胞的凋亡效应,透射电子显微镜观察药物作用后细胞超微结构的变化,RT—PCR检测凋亡相关基因mRNA表达变化。结果冬凌草甲素抑制LP－1细胞增殖呈时间和剂量依赖性;AnnexinV／PI双染色法检测显示,随着作用药物浓度的增加以及药物作用时间的延长,LP－1细胞凋亡率显著增加。通过透射电子显微镜可见药物作用后的细胞呈现核染色质边集,线粒体肿胀等细胞凋亡的表现。冬凌草甲素作用后TJP－1细胞中PDCD5、BidmRNA表达上调,Bel－2、NF—KBmRNA表达下调。结论冬凌草甲素通过上调Bid及下调Bel－2mRNA表达降低线粒体膜电位、触发LP－1细胞的线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡;亦可作为NF－KB活性抑制剂阻断NF－KB激活,诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖。其中PDCD5作为凋亡促进剂的作用仍需进一步的深入研究。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株(HO-8910PM/PIX),用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。     

冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响

冬凌草甲素是从中药冬凌草Rabdosia rubescens中分离得到的一种贝壳杉烯二萜类的天然有机化合物,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。该实验观察冬凌草甲素对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。采用MTT法检测冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,PI单染、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平的变化,Western blot分析PARP,Bcl-2,caspase-3蛋白的表达情况。结果表明,冬凌草甲素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显的凋亡诱导作用,显著升高细胞内的ROS水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并促进caspase-3及其底物PARP的切割。提示,冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用可能与升高细胞内ROS水平、下调Bcl-2的表达以及激活caspase-3相关。     

冬凌草片中冬凌草甲素的含量测定

目的:通过对25批次农村基本药物冬凌草片的含量测定的结果比较,考察冬凌草片中冬凌草甲素的稳定性.方法:采用HPLC法对冬凌草片中的冬凌草甲素进行含量测定.结果:25批次冬凌草片中24批次含量合格,1批不合格.结论:冬凌草片中冬凌草甲素的稳定性相对较差.