胃癌细胞株MKN-45肿瘤干细胞中microRNA差异表达研究

目的筛选胃癌干性相关的mircoRNA(miRNA),探讨其差异表达的意义。方法体外成球实验筛选胃癌干细胞,应用miRNA芯片技术筛选spheroid及attachment培养胃癌细胞株MKN-45差异表达的miRNA。同时,选取10例新鲜胃癌组织及其癌旁组织运用qRT-PCR对差异表达的miRNA进行验证。运用靶基因预测软件预测差异表达miRNA可能的调控靶基因。结果筛选得到胃癌干细胞较胃癌细胞表达明显上调的miRNA共有7个,分别为miR-29a-3p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-4270、miR-483-5p、let-7b-3p、miR-34a-5p。7个miRNA在球体细胞与亲代贴壁细胞间的相对表达量存在明显差异。其中,miR-29a-3p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-4270、miR-483-5p的表达水平与芯片检测结果一致,符合率71%;let-7b-3p、miR-34a-5p的表达水平与芯片检测结果不一致。MiRanda、Target Scan及Pictar在线数据库的交集中,miR-27a-3p、miR-34a-5p、miR-21-5p、miR-4270、let-7b-3p以及miR-29a-3p可预测到靶基因,而miR-483-5p与miR-16-5p未能预测到靶基因。结论miRNA在胃癌细胞株MKN-45肿瘤干细胞中存在特异性的表达谱,其差异表达的miRNA可能与胃癌耐药相关,可作为诊断胃癌和评判预后的重要标准,并为抵胃癌耐药提供可能靶点。     

膀胱癌中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达及意义

目的 探讨凋亡调节基因Fas、FasL、Bcl-2及Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱癌发生、发展和预后之间的关系。方法 采用免疫组化染色法检测40例膀胱移行细胞癌、24例正常膀胱组织中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达。结果 Fas表达于正常组织和膀胱癌组织中,FasL、Bcl-2及Bax仅表达于膀胱癌组织中;Fas的表达与膀胱癌病理分级负相关,FasL、Bcl-2的表达与膀胱癌病理分级正相关;Fas、Bax在初发膀胱癌组织中的表达大于复发膀胱癌。结论 Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达,可能与膀胱癌细胞的凋亡及免疫逃避等密切相关,影响膀胱癌的发生、发展和预后。     

5-脂氧化酶在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的检测5-脂氧化酶（5-lipoxygenase,5-LOX）在膀胱癌组织中的表达水平并探讨其表达水平与膀胱癌预后的关系。方法采用免疫组化法检测5-LOX在23例膀胱癌患者癌组织中的表达水平,并用Kaplan-Meier法进行对患者进行生存分析。结果膀胱癌组织中5一LOX的表达明显高于癌旁组织,表达率与患者生存率明显呈反比关系（P〈0．05）。结论5-LOX可以作为膀胱癌临床诊断参考标准之一,并可以作为膀胱癌患者预后状况的评判依据。     

多种癌、癌旁与正常组织中BAG-1表达的组织芯片检测与分析

目的 :检测凋亡相关基因BAG - 1在乳腺癌、胃癌、宫颈癌及其癌旁组织、正常组织中的表达 ,并讨论其意义。方法 :利用组织芯片采用免疫组化DAKOEnvision法检测乳腺癌、胃癌、宫颈癌及其癌旁组织、正常组织中BAG - 1的表达。结果 :组织芯片中BAG - 1在乳腺癌、胃癌、宫颈癌组织中的表达比其对应癌旁组织、正常乳腺组织中高 ,差异明显 (P <0 .0 5 )。结论 :BAG- 1在乳腺癌、胃癌、宫颈癌组织中表达高于癌旁组织和正常组织 ,提示BAG - 1表达可能与这些恶性肿瘤的发生有关。     

膀胱癌中VEGF、bFGF表达及与微血管定量的关系

探讨膀胱移行细胞癌中血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达及与血管形成定量的关系。应用免疫组织化学方法 ,对 6 2例原发性膀胱移行细胞癌组织中VEGF、bFGF进行检测 ,并对其在 30例浸润性膀胱癌组织中的表达与血管形成的定量关系进行相关性研究。结果发现 ,膀胱癌组织中VEGF、bFGF阳性表达率分别为 5 6 5 %和 46 8% ,与病理分级、临床分期、复发和预后有关 (P <0 0 5 ) ;并与浸润性癌组织中微血管定量呈正相关 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。提示VEGF、bFGF是膀胱癌血管形成的主要血管生成因子 ,血管形成与膀胱癌发生和发展密切相关。     

nm23-H1基因蛋白在膀胱癌的表达及临床意义

目的探讨肿瘤抑制基因nm23-H1在膀胱中的表达及临床意义.方法应用免疫组织化学S-P法检测18例正常膀胱组织中及38例膀胱移行细胞癌组织中nm23-H1的表达.结果nm23-H1在正常膀胱组织、膀胱癌中阳性表达率分别为83.3%(15/18),44.7%(17/38).二者间有显著差异(P＜0.01).提示nm23-H1阳性表达率与膀胱移行细胞癌的临床分期、临床分级、肿瘤大小及是否转移有密切关系.结论nm23-H1在膀胱癌中的阳性表达对抑制肿瘤生长,浸润和转移起重要作用,可作为膀胱癌患者预测转移和预后及判断膀胱移行细胞癌生物学行为的良好指标.     

miR-205在宫颈鳞癌中的表达及其对癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 筛选宫颈癌中差异表达的微小RNA（miRNA,miR）,探讨关键miRNA对宫颈癌发生发展的作用及其机制。方法 采用生物信息学方法分析并以差异倍数>2.5及_P<0.01为条件筛选宫颈鳞癌中差异表达的miRNA;采用原位杂交和qRT-PCR分别检测miR-205及白细胞介素（IL）-32的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活力;应用Transwell模型评价细胞迁移及侵袭能力;利用Western blotting检测侵袭相关基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9蛋白的表达量。结果 生物信息学分析获得宫颈鳞癌中差异表达的miRNA 106个,其中70个上调,36个下调;其中miR-205的表达量变化最大。原位杂交及qRT-PCR结果表明,miR-205在宫颈鳞癌细胞中的表达量明显高于癌旁组织（_P<0.05）。miR-205可明显提升宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力（_P<0.05）。在宫颈癌细胞系HeLa及SiHa细胞中,过表达miR-205可增强IL-32的表达,降低_{miR-205表...}     

远端上游元件结合蛋白1在食管癌中的表达及意义

目的 探讨远端上游元件结合蛋白1 (FUBP1)在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床特征的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测37例食管癌组织、35例食管癌癌旁组织、12例食管炎组织中FUBP1的表达水平;采用荧光定量反转录聚合酶链反应(FQ:PCR)检测32例食管癌、32例食管癌癌旁组织中FUBP1 mRNA的表达水平.结果 免疫组化结果显示,FUBP1在食管癌的阳性表达率为81.1％,明显高于癌旁组织(31.4％)和食管炎(33.3％,P＜0.05),而癌旁组织与食管炎组织之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).FQ-PCR结果显示,FUBP1 mRNA在食管癌组织中的相对表达量(0.2650±0.1356)明显高于在癌旁组织中的相对表达量(0.1982±0.0263,t=2.638,P=0.013).FUBP1 mRNA 含量在食管癌及癌旁组织中的表达与性别、年龄无关(P＞0.05),与分化程度、淋巴结转移、远处转移有关(P＜0.05).结论 FUBP1在食管癌的发生、发展中起重要作用,其表达升高增强了食管组织癌变的易感性,可能在食管癌的发生、发展、浸润、转移中发挥重要作用.     

高分级膀胱癌多药耐受相关蛋白和P—糖蛋白表达模式的意义

为了评价高分级膀胱癌多药耐受相关蛋白（ ＭＲＰ） 表达差异的意义，对４７ 例初发膀胱移行细胞癌，７ 例复发性膀胱癌及７ 例正常膀胱粘膜组织标本ＭＲＰ 表达进行了检测。结果表明，初发膀胱癌中，ＭＲＰ 总阳性率为４０－４ ％ ，复发性膀胱癌ＭＲＰ 阳性率为５７－１ ％ ，正常膀胱粘膜也有２８－５ ％ 的表达率。高分级（Ｇ３） 膀胱癌较低、中分级（Ｇ１ 、Ｇ２） 膀胱癌ＭＲＰ 表达阳性率显著降低，结果提示ＭＲＰ 表达率下降是肿瘤分化不良及恶化的结果。同时发现，ＭＲＰ 与ＭＤＲ１ 表达之间无明显关系，两种基因不存在共同调节，进一步研究这种差异的临床意义是很有必要的。     

小凹蛋白-1在食管鳞癌中的表达及其意义

 目的 研究小凹蛋白-1(caveolin-1)在不同食管组织中的表达及其与临床生物学行为的关系,进而探讨其在食管癌发生、发展中的作用机制.方法 采用免疫组织化学方法分析126例食管鳞状细胞癌、33例食管原位癌及53例癌旁正常食管黏膜组织中caveolin-1的表达情况,并根据临床完整资料评价其表达与生物学行为的关系;另收集其中30例新鲜食管癌组织及其癌旁正常食管组织,采用Western印迹法测定组织中caveolin-1的表达情况.结果(1)caveolin-1在食管鳞癌、原位癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为86.5％、51.5％和22.7％,差异均具有统计学意义(P＜0.01).(2)caveolin-1在食管鳞癌临床Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期的表达率分别为77.6％,86.1％和97.6％,癌组织的表达强度随着肿瘤临床分期的升高而逐渐增强,差异具有统计学意义(P =0.039);淋巴结转移组caveolin-1的表达明显高于无淋巴结转移组(P =0.023).(3)Western印迹法结果进一步证实食管鳞癌组织的caveolin-1的表达明显低于癌旁正常食管组织(P＜0.01).结论 提示caveolin-1的高表达可能参与了食管癌的发生、发展过程;caveolin-1的表达与食管癌临床分期有一定的关系,其很可能成为潜在的治疗靶点及判断食管癌预后的有价值的肿瘤标记物.     

基于microRNA差异表达的精神分裂症与抑郁症共病研究

目的 观察精神分裂症(SZ)患者中差异表达的microRNA(miRNA),从miRNA表达水平上分析SZ与抑郁症的关系.方法 通过基因芯片筛选在SZ患者中差异表达的miRNA.采用实时定量PCR(qRT-PCR)在40例SZ患者外周血单核细胞中验证芯片筛查结果,并进行精神分裂症阳性和阴性症状量表(队NSS)评定,同时检测抑郁症中差异表达的5种miRNA(miR-1972、miR-26b、miR-4485、miR-4498、miR-4743)的表达改变及其与SZ中差异表达的miRNA及PANSS评分的相关性.结果 与正常人相比,SZ患者中33种miRNA存在差异表达(32种表达上调,1种表达下调),且其中8种上调的miRNA(miR-1273d、miR-1303、miR-3064-5p、miR-3131、miR-3687、miR-4428、miR-4725-3p、miR-5096)表达差异有统计学意义(P＜0.05).在抑郁症中差异表达的5种miRNA在SZ患者中差异表达也有统计学意义(P＜0.05),且与SZ中差异表达的8种miRNA呈中、高度相关(r=0.607～0.909,P＜0.01),其中miR-1972与PANSS量表阳性症状得分呈显著正相关(r=0.339,P＜0.05),miR-26b与复合量表因子分呈显著正相关(r=0.342,p＜0.05).结论 SZ与抑郁症不仅具有某些共同的临床表现,二者在分子遗传学方面也可能有共同的病理基础.     

人卵巢癌组织差异表达基因的cDNA基因芯片检测

目的探讨人卵巢癌组织差异表达基因,揭示卵巢癌发生、发展的分子机制。方法人卵巢癌组织标本2例,均经病理确诊为低分化浆液性乳头状囊腺癌,临床诊断为卵巢癌Ⅲ期,选用2例正常卵巢组织为对照。提取卵巢组织中mRNA,提取并纯化卵巢癌组织中总RNA,应用cDNA基因芯片技术对总共588个基因进行差异表达基因检测。结果共筛选出差异表达基因44条,其中11条表达上调(包括癌基因c-erbB2、neu、c-fos、c-mycproto-oncogenes、HER2receptor等)、33条表达下调(包括RAR、MMP18、MMP19、p21、DNA-PK等)。结论揭示了人卵巢癌组织中差异表达基因,有望为早期诊断卵巢癌及判断预后提供理想标志物。     

应用肿瘤相关寡核苷酸芯片筛选乳癌差异表达基因

目的：应用寡核苷酸芯片技术研究乳癌基因表达谱。方法：根据文献获取目的基因，查询相应基因mRNA序列，通过计算机设计并合成探针，将探针点样于经化学修饰的载玻片上，制备含288种基因的肿瘤相关基因寡核苷酸芯片。提取乳癌与相应正常乳腺组织总RNA，通过逆转录制备荧光标记的cDNA探针并与芯片杂交，经洗片后扫描获取图像，计算机分析比较乳癌组织与正常乳腺组织的差异表达基因。结果:检测16例乳癌组织与正常乳腺组织标本，有10例基因表达存在明显差异，其中表达增高的有6种，表达降低的有4种。结论：乳癌组织与正常乳腺组织存在部分差异表达的基因，乳癌的发生发展与这些基因密切相关；寡核苷酸芯片技术在乳癌相关基因的研究中具有重要意义。     

60Co γ线照射血管内皮细胞外泌体中miRNA的鉴定分析

目的 利用微小RNA(miRNA)芯片和生物信息学技术,研究受照射人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)产生的外泌体miRNA组分的变化,为揭示血管组织放射损伤及其旁效应机制提供新的线索.方法 超高速离心法收集对照组和4 Gy剂量照射组的HUVEC外泌体,运用电镜及Western印迹技术对外泌体进行鉴定,miRNA芯片技术分析细胞内和外泌体中miRNA表达谱,qRT-PCR法验证部分差异miRNA,通过miRDB和TargetScan预测差异miRNA的靶基因,DAVID、KEGG等在线工具进行生物信息学分析.结果 HUVEC经4 Gy照射后外泌体miRNA与对照组相比,照后0.5 h共鉴定到18个发生表达变化的miRNA分子,5个表达上调,13个表达下调;照后2 h鉴定出16个表达上调、5个表达下调miRNA分子;细胞内miRNA与对照组相比,照射后0.5、2 h分别有38个和85个差异表达miRNA,且差异有统计学意义(P<0.01).生物信息学结果表明,这些表达变化的miRNA可能通过参与调控MAPK、Ras、PI3K-Akt信号通路等途径影响细胞辐射旁效应.结论 电离辐射损伤导致血管内皮细胞外泌体miRNA分子组分和表达水平发生显著改变,这些miRNA的靶基因组产物在细胞放射损伤反应的信号通路调节中发挥重要作用.     

60Co γ射线照射致小鼠肝脏的miRNAs表达改变

目的 应用miRNA芯片筛选4 Gy60Co γ射线照射后小鼠肝脏中差异表达的miRNAs,生物信息学方法探索差异表达miRNAs调控的主要功能.方法 SPF级C57BL/6J小鼠接受4 Gy60Co γ射线单次全身照射后,进行外周血白细胞计数和骨髓嗜多染红细胞微核计数.应用miRNA芯片筛选照射后小鼠肝脏中差异表达的miRNAs,用miRNA特异引物对部分差异表达miRNA进行实时定量PCR(real time PCR)验证.运用生物信息学方法,对差异miRNAs靶基因及调控功能进行预测.结果 4 Gyγ射线照射后,外周血白细胞总数与对照组相比显著减少(t=2.87,P＜0.05),而骨髓嗜多染红细胞微核率与对照组相比显著增加(t=-2.91,P＜0.05).miRNA芯片结果显示,照射组与对照组差异表达的miRNAs共17个,其中9个表达上调,8个表达下调.miR-124和miR-34a的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片结果一致.GO分析发现,与黏附、细胞周期相关的通路被抑制,一些免疫相关通路被激活.结论 miR-34a和miR-194参与了急性辐射损伤的调控,起主要调控作用的miRNAs还有miR-124、miR-382和miR-92a*.

Abstract：

Objective To investigate the differential expression profiles of microRNAs in the liver of 60Co γ-ray irradiated mice using microRNA microarray and to explore their main functions by bioinformatic analysis.Methods After SPF C57BL/6J mice expose to 4 Gy-single whole body radiation,total number of peripheral WBC and the fMNPCE were measured at 3 d.The differentially expressed miRNAs in mouse liver were detected with miRNA microarray,miRNA-124 and miR-34a were confirmed by real time RT-PCR assay.Bioinformatic analysis was applied to explore target genes and the main functions of the differential expressed miRNAs.Results Compared with control group,the total number of peripheral WBC decreased( t = 2.87,P ＜ 0.05 ) ,while the fMNPCE in bone marrow increased ( t =-2.91,P ＜0.05) after 4 Gy γ-ray irradiation.miRNA microarray revealed that 17 miRNAs were differentially expressed,in which 9 up-regulated,8 down-regulated.The expression levels of miR-124 and miR-34a were coincident with the result of real time RT-PCR.GO analysis showed that some pathways including adherens junction and cell cycle were suppressed,while some immune-related pathways were activated.Conclusions miR-34a and miR-194 were involved in the regulation of acute radiation damage,some other miRNAs including miR-124、miR-382 and miR-92a* also played important roles in radiation process.     

小鼠运动性疲劳相关基因筛选的初步研究

目的：运用基因芯片技术筛选运动性疲劳的相关基因。方法：将小鼠２３０４点阵的基因芯片中的２２０１条待研究基因，与对照组和疲劳组小鼠脑组织中抽提的ｍＲＮＡ并被Ｃｙ３和Ｃｙ５逆转录荧光标记制成的ｃＤＮＡ混合探针杂交，通过芯片扫描仪对其荧光强度进行扫描，经计算机进行分析。结果：在待研究的２２０１条基因中，与中枢疲劳相关的１１７条基因具有显著性表达差异，其中上调表达的基因有６３条，下调表达的基因有５４条。结论：应用基因芯片技术可同时检测与运动性中枢疲劳相关的多个基因的差异表达，具有高通量、并行性和快速准确等优点。     

应用cDNA微矩阵基因芯片筛选运动性心肌肥大相关基因的初步研究

目的 :应用cDNAchip(cDNA芯片或微矩阵基因芯片 )技术筛选运动性心肌肥大相关基因。方法 :摘取运动组和对照组小鼠心脏 ,按一步法抽提总RNA并纯化mRNA ,将 2 30 4个点包括10 3个阴性及对照基因和 2 2 0 1条小鼠靶基因的PCR扩增产物 ,按微矩阵 (12× 12点× 16亚矩阵 ,点间距离 375 μm)点制于硅烷化玻片上 ,制备成cDNA芯片。将等量抽提纯化的运动组和对照组小鼠心肌组织mRNA ,分别与掺入的荧光分子Cy3和Cy5经逆转录合成cDNA荧光探针 ,混合后再与cD NA芯片杂交 ,通过芯片扫描仪对荧光信号图像进行扫描 ,经计算机分析比较运动组和安静对照组心肌组织中基因表达谱的变化。结果 :在 2 2 0 1条待研究基因中 ,两组小鼠心肌组织间存在差异表达的基因。具有显著表达差异的基因有 71条 ,其中上调基因有 37条 ,下调基因有 34条。结果显示 :cDNA芯片技术筛选运动性心肌肥大相关基因具有高通量、高敏度、高效率、大规模和并行性等优点。     

应用微阵列比较基因组杂交技术对宫颈癌相关基因的筛选研究

目的：研究甘肃兰州地区人乳头瘤病毒16亚型感染后诱发宫颈癌的发病机制。方法：人乳头瘤病毒16亚型感染经病理确诊的宫颈鳞癌4例,活检取子宫颈癌组织及自身正常宫颈组织标本,用含20 600条人类全基因的OligoDNA基因芯片微阵列比较基因组杂交技术筛选出差异表达的基因进行分析。结果：4例宫颈癌组织中共同差异表达的基因有302条。121条上调,181条下调。结论：多因素、多基因共同作用导致HPV16亚型引发宫颈癌。