骨髓基质细胞复合三维支架修复犬下颌骨节段性缺损

目的：探讨犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）体外复合预制三维下颌骨缺损仿真β-磷酸三钙（β-TCP）支架对犬下颌骨节段性缺损进行修复的可行性。方法：通过计算机辅助设计／制作和快速原型技术，制作3cm长犬下颌骨节段性缺损β-磷酸三钙支架，体外接种第3代骨髓基质细胞，培养5d天后回植，对犬一侧下颌骨节段性缺损进行修复．并设单纯材料作为对照组。术后1周、1个月、3个月观察局部伤口情况，术后1、3个月行X线片和三维CT成像，术后3个月将标本进行生物力学检测和组织学观察。结果：X线片观察显示，术后3个月，对照组缺损区低密度影，BMSCs＋β-TCP组缺损区见高密度组织；三维CT成像显示术后3个月，对照组修复区吸收明显，达1／2以上：BMSCs＋β-TCP组修复区未见明显吸收；生物力学检测显示，对照组和BMSCs＋β-TCP组的牙槽嵴高度分别为9．16mm和18．54mm，最大弯曲载荷分别为42．90N和102．77N，应力分别为1．930N／mm^2和3．504N／mm^2。应变分别为54．50％和16．98％。经统计学处理，均有显著性差异；组织学观察显示术后3个月，BMSCs＋β-TCP组成骨良好．支架周围可见多核巨细胞吞噬材料，并可见软骨形成区。结论：应用β-TCP三维支架复合犬BMSCs进行犬下颌骨节段性缺损修复存在一定的可行性。     

大鼠骨髓基质细胞与β-磷酸三钙体外复合培养

目的观察大鼠骨髓基质细胞与β-磷酸三钙复合后，细胞在材料表面的贴附、伸展及生长情况，探讨将细胞与β-磷酸三钙的复合体植入体内的最佳时间。方法分离的骨髓基质细胞用舍10％胎牛血清的DMEM培养，添加矿化液，将诱导培养后的细胞与预先处理过的β-磷酸三钙复合，复合后每日检测细胞生长增殖情况，并在扫描电镜下观察细胞在β-磷酸三钙表面的贴附情况。结果骨髓基质细胞接种后，在材料表面贴附良好，复合后7天细胞数量最多，是植入体内的最佳时间。结论β-磷酸三钙的生物相容性良好，可以作为骨组织工程的支架材料。骨髓基质细胞贴附材料后继续保持增殖活性，表达成骨细胞的表型，是理想的种子细胞。     

磷酸钙钠/β-磷酸三钙陶瓷支架接种骨髓基质细胞成骨性能的研究

目的：观察磷酸钙钠／β-磷酸三钙(NaCaPO2/β-TCP)支架接种骨髓基质细胞后植入裸鼠皮下的成骨性能。方法：通过理化方法,将煅烧牛松质骨转化为NaCaPO2/β-TCP双相钙磷陶瓷。获取兔髂骨松质骨骨髓基质细胞,体外分离、扩增、诱导后,接种于NaCaPO2/β-TCP支架。将支架／细胞复合物植入裸鼠背部皮下,NaCaPO2/β-TCP陶瓷单纯植入作为对照。植入后4、8周取材,通过大体、组织学观察,评价成骨活性。结果：支架／细胞复合物植入后4周,材料表面见相对较成熟的骨组织,内部主要为软骨;植入后8周,大量骨小梁形成。可见骨髓腔、骨髓细胞及脂肪细胞,在支架材料和骨组织的邻接区域见成骨细胞及破骨细胞。可见软骨内成骨方式。结论：NaCaPO2/β-TCP支架接种骨髓基质细胞后显示良好的成骨活性,能够促进未成熟骨矿化,可以作为骨组织工程支架材料。     

载辛伐他汀β-磷酸三钙支架复合脂肪干细胞修复兔颅骨缺损

目的：应用辛伐他汀(simvastatin)作用于脂肪干细胞,研究其对细胞生长、成骨、成血管分化的影响;利用β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)三维支架材料负载辛伐他汀,与脂肪干细胞复合,构建组织工程骨,用于兔颅骨缺损模型的修复。方法：原代培养兔脂肪干细胞(rabbit adipose-derived stem cells, rASCs),分别以含0、0.01、0.1和1 μmol/L辛伐他汀的培养液培养,计数法检测细胞数目;以0、0.05、0.1 μmol/L浓度辛伐他汀培养ASCs,1、7 d后,实时定量PCR检测成骨、成血管基因的表达(RUNX2、OPN、OCN、VEGF); 7 d后行ALP染色;14 d后行茜素红染色。12只新西兰大白兔颅顶双侧8 mm缺损,分别以4组材料修复(A: β-TCP,B: β-TCP/Cell,C: β-TCP/Sim,D: β-TCP/Cell/Sim),每组6例,植入8 周后取材,进行组织学观察。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：0.05 μmol/L辛伐他汀对脂肪干细胞RUNX2、OCN、OPN和VEGF等成骨、成血管基因的表达具有明显促进作用,碱性磷酸酶染色和von Kossa染色更为明显;植入体内8周后,β-TCP/Cell/Sim组材料的成骨面积显著大于其他3组。结论：0.05 μmol/L辛伐他汀在体外对ASCs具有明显的促成骨作用,载辛伐他汀β-TCP复合脂肪干细胞可促进兔颅骨缺损的修复。     

犬骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物的体外构建

目的：研究犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）在体外骨诱导环境下和支架材料β-磷酸三钙（β-TCP）复合的可能性和生物材料的性能。方法：抽取犬骨髓3ml，在DMEM成骨条件培养液条件下贴壁法进行体外培养，将培养的第3代细胞接种于预制的3mm^3大小的β-TCP上进行体外骨诱导条件下培养，于培养第4h、第2d、第5d取细胞材料复合体进行扫捕电镜检查。结果：扫描电镜观察：材料呈多孔三维立体网状结构，平均孔径约450μm，孔内连接径约100μm。细胞接种在材料上4h后可见附着：2d后．细胞呈多角形向外伸展；5d后，细胞和材料表面紧密贴附，细胞充分伸展，分泌基质。结论：β-TCP具有良好的多孔三维立体结构和生物相容性．利于BMSCs的附着和生长，可作为骨组织工程支架材料复合种子细胞进行体内成骨研究。     

β-磷酸三钙复合骨髓基质细胞构建组织工程骨的实验研究

目的：验证β-磷酸三钙与骨髓基质细胞复合形成组织工程骨的可行性。方法：取犬骨髓,贴壁法获得骨髓基质细胞,经成骨诱导培养液体外培养,倒置相差显微镜观察其形态、增殖情况,选择CD29,CD90,hamIgG应用流式细胞术检测细胞表面抗原,VonKossa染色,将培养的第3代细胞接种于多孔支架材料β-磷酸三钙（β-TCP）,进行细胞增殖率检测,并于1、3、7d扫描电镜观察细胞材料的复合情况。结果：原代培养20d后分离获得骨髓基质细胞,VonKossa染色鉴定其成骨能力;细胞表面抗原检测显示CD29＋,CD90＋,hamIgG-,与文献报道一致;细胞增殖率曲线结果显示,细胞粘附多孔β-TCP后增殖率没有明显差异;扫描电镜观察可见细胞生长附着于材料网孔内表面。结论：β-磷酸三钙/骨髓基质细胞复合物显示良好的成骨活性,β-TCP可以用于骨组织工程支架材料。     

多孔β-磷酸三钙/胶原支架修复兔下颌牙槽骨缺损的实验研究

目的观察自行研发的2种支架材料修复兔下颌牙槽骨临界骨缺损的效果。方法8只新西兰大白兔下颌骨制备10mm×8mm箱状骨缺损,分别植入多孔β-磷酸三钙／胶原与β-磷酸三钙／聚左旋乳酸2种支架材料,分别在4、6、8、12周时各处死2只。采用肉眼观察,锥形束CT与组织切片观察成骨效果与材料降解情况。结果β-磷酸三钙／胶原支架在各时间点成骨效果均好于对照组。在12周时,完全修复骨缺损。结论β-磷酸三钙／胶原支架可以快速、有效修复兔下颌牙槽骨临界骨缺损。     

人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。 方法 :取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜 ,用组织块培养法培养PDLCs。β -TCP多孔陶瓷加工成片状 ,作为细胞支架 ,将 4-7代PDLCs与 β -TCP进行体外三维培养 ,2周后观察细胞生长状况。 结果 :PDLCs在 β -TCP支架材料上附着、增殖并复层生长。结论 :β -TCP具有良好的生物相容性 ,有望成为牙周组织工程的支架材料     

BMSC/β-TCP修复犬下颌骨缺损的实验研究

目的:通过动物实验探索β-磷酸三钙(β-TCP)复合组织工程骨应用于颌骨缺损修复的可行性。方法:3只杂交犬的双侧下颌骨人工制备3 cm×1 cm×1 cm缺损后,采用自体对照实验方法。实验侧植入骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物(BMSC/β-TCP),对照侧仅植入β-TCP,在植入后均使用四环素荧光标记。分别于术后1、3、6个月进行CT扫描,之后处死实验犬,制备组织标本,进行HE染色、苦味酸品红染色、四环素荧光检测,并加以评价。对分析数据结果使用SAS 6.0进行统计学分析,P<0.05为有统计学意义。结果:BMSC/β-TCP修复犬颌骨缺损,有大量的编织骨生成;对照组虽然在6个月后也有一定量的骨质形成,但未见到编织骨。四环素标记结果显示,实验组术后6个月,骨质形成速率较对照组高;对照组在最初的3个月,骨质形成明显比实验组低。在第3～6个月期间,实验组和对照组骨质形成均明显加快。结论:BMSC/β-TCP修复犬的颌骨缺损可以形成质量较高的板层骨,而单纯β-磷酸三钙所形成的骨质纤维较紊乱,哈弗氏骨管的数量也较少。     

犬骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物在裸鼠体内的成骨性能

目的：观察犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）和支架材料β-磷酸三钙（β-TCP）复合物植入裸鼠体内的成骨情况。方法：首先在体外构建BMSCs和β-TCP的复合物，大小3mm^3左右。实验分为3组：裸鼠体内植入单纯β-TCP，植入未经体外培养的BMSCs和β-TCP复合体，植入体外培养5d的BMSCs和β-TCP复合体。植入后1周、1个月和3个月取出标本，进行大体观察、X线片观察、灰度测定、组织学观察及成骨图像分析。结果：植入后3个月，BMSCs＋B-TCP体外培养组X线片密度最高，DigiDens X线片灰度值3组分别为：0．605〉0．555〉0．473（P〈0．01）。HE染色显示：1个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组见新骨和血管形成；3个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组新骨形成明显，并有大量血管生成．BMSCs＋β-TCP体外未培养组少量成骨，单纯β-TCP组未见明显成骨。成骨罔像分析3组成骨密度均数分别为：23．99％、8．36％、1．23％（P〈0．05）。结论：BMSCs＋β-TCP复合物植入裸鼠体内4周出现新骨形成．3个月时．骨形成明显并有血管化生成。     

多孔β-磷酸三钙陶瓷支架材料对骨髓基质细胞增殖及分化作用的实验研究

目的:观察β-磷酸三钙陶瓷对骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及分化特点的影响,验证其是否适于作为骨组织工程的支架材料。方法:将兔的BMSCs经过体外培养传代后,与多孔β-磷酸三钙陶瓷支架材料在培养板内共培养1、3、5、7、9d。采用形态学观察、MTT法及ALP检测试剂盒等方法检测BMSCs在材料表面的增殖和分化能力。结果:BMSCs能在该支架材料表面正常粘附和增殖,在体外培养时BMSCs大量增殖后有较高的碱性磷酸酶活性。结论:多孔β-磷酸三钙陶瓷适合作为支架材料负载BMSCs构建组织工程骨。     

多孔块状β-磷酸三钙在齿槽裂修复中的应用

目的评价多孔块状β-磷酸三钙在齿槽裂修复中的应用价值。方法齿槽裂的修复手术运用局部黏骨膜瓣形成袋状受植囊,同时关闭鼻、唇、腭间的软组织裂隙,恢复解剖形态;去除裂隙两侧上颌突的骨皮质;采用多孔块状β-磷酸三钙,根据裂隙大小、形状及与健侧的对称性,修整人工骨,植入裂隙。结果手术切口一期愈合,无植入物排出,外形恢复理想,局部饱满。术后3个月X线片可见局部骨性愈合,术后1.5年X线片可见植入人工骨基本被自体骨取代。结论用多孔块状β-磷酸三钙修复齿槽裂,具有恢复形态准确;修复创伤小的优点;植入物组织相容性好,具有骨引导性,可降解,能被自体骨完全取代,且无不良反应。     

多孔块状β—磷酸三钙陶瓷兔颅骨缺损修复的组织学观察

目的 为临床筛选合适的骨修复材料。方法 通过β－磷酸三钙（β－－TCP）陶瓷兔颅骨缺损的修复,显微镜下观察各组织标本的组织切片,观察β－TCP的被吸收过程、生物相容性和引导成骨能力,并和羟棋磷灰石（HA）对比。结果 本实验明确观察到大量的多核异物巨细胞吞噬β－TCP材料,引起材料被吸收;β－TCP和HA均未引起组织学免疫排斥反应;β－TCP的引导成骨能力大于HA。结论 β－TCP陶瓷是具有可吸收性和良好组织相容性的骨修复材料;多核异物巨细胞对材料的吞噬作用是其吸收性的重要机理之一。     

水凝胶与陶瓷化骨及β-磷酸三钙复合对骨髓基质细胞成骨能力的影响

目的：观察水凝胶（hydrogel，HG）分别与陶瓷化骨（ceramic bovine bone，CBB）、β-磷酸三钙（β-tricalcium phosphate，β-TCP）复合成的复合材料对骨髓基质细胞（MSCs）的生长、分化的影响，寻找更适合骨组织工程的复合物支架材料。方法：将诱导的骨髓基质细胞接种于CBB/HG、β-TCP/HG上，另外MSCs分别接种于单纯的CBB、β-TCP上作为对照，进行体外培养。5、10d取材，细胞计数观察贴附及增殖情况，扫描电镜观察细胞形态以及材料的贴附情况，检测碱性磷酸酶的活性以及免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原的分泌情况。结果：骨髓基质细胞与各组材料均能形态良好贴附，两种复合材料上贴附的细胞数量明显高于对照组，CBB/HG、β-TCP/HG两组间细胞的碱性磷酸酶的活性以及Ⅰ型胶原的分泌量无明显差别，但显著高于对照组。结论：CBB/HG、β-TCP/HG均能促进骨髓基质细胞分化及基质分泌，是一良好的组织工程骨构建复合材料。     

大鼠牙髓细胞复合β-磷酸三钙多孔陶瓷体外培养的实验研究

目的:研究大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养后的生长情况及细胞活性,探讨β-TCP作为大鼠牙髓细胞支架材料的可行性。方法:实验分两组,实验组为大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养,对照组为大鼠牙髓细胞常规培养。采用相差显微镜、电子显微镜观察细胞生长、贴附情况;采用MTT、细胞蛋白检测、碱性磷酸酶检测的方法评价大鼠牙髓细胞生长情况及细胞活性。结果:大鼠牙髓细胞复合β-TCP后生长良好,贴附于材料表面及孔隙内壁。MTT及细胞蛋白检测复合培养组和对照组无差异,6 d、9 d时复合β-TCP培养的大鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性明显高于对照组。结论:复合β-TCP进行培养的大鼠牙髓细胞生长良好,没有出现生长抑制现象,其细胞活性更明显增强,表明β-TCP完全符合牙髓细胞支架材料的要求,是一个具有很好应用前景的牙髓组织工程支架材料。     

多孔β-磷酸三钙的制备与性能检测

目的：制备多孔β-磷酸三钙（β-TCP）并检测其作为植骨材料的可行性和性能指标。方法：健康牛股骨松质骨经脱细胞、脱脂处理后在高温下经二次煅烧后,制备主要成份为β-TCP的脱有机质骨多孔颗粒,并进行X线衍射、扫描电镜、孔隙率和生物力学检测。结果：X线衍射检测结果显示制备的多孔颗粒主要成份为β-TCP,扫描电镜结果显示孔隙由大孔/微孔结构组成,孔隙率为57.63%,保持天然松质骨双峰曲线的孔隙结构,压缩强度4.47±0.63MPa。结论：多孔β-TCP的性能指标理想,有望成为一种理想的植骨材料。     

纳米β-磷酸三钙/胶原复合体修复兔颌骨缺损的研究

目的研究纳米β-磷酸三钙/胶原复合体(N-TCP/Co)修复兔下颌骨缺损的效果。方法新西兰长耳白家兔6只,在双侧下颌骨制备1.2cm×2.5cm缺损区,将自制N-TCP/Co复合体材料植入兔一侧下颌骨缺损区,另一侧设置为空白对照,3个月后摄X线片并处死实验动物,以肉眼观察、石蜡切片及硬组织切片观察成骨情况。结果3个月后家兔实验侧X线片可见骨缺损区无明显透射影像,无明显边界,对照侧透射影像明显,边界清楚;大体观察可见实验侧骨创基本愈合,新生骨组织充满手术区,对照侧软组织充满缺损区;石蜡切片可见实验侧有大量成骨细胞;硬组织切片四环素荧光染色可见网状新生骨基质沉积。结论自制的N-TCP/Co复合体可有效成骨,重建修复家兔颌骨缺损。     

磷酸三钙陶瓷修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的 将磷酸三钙生物陶瓷用于骨缺损,观察其对骨缺损修复的作用。方法 制备了兔下颌骨人工骨缺损,填入ＴＰＣ颗粒,分不同时期肉眼和组织学观察和评价。结果 肉眼观局部无明显炎症反应,第４周材料与正常骨组织结合紧密。组织学结果表明,第２周开始材料间有纤维结缔组织生长,骨化形成,且随时间延长,骨化增加。结论 ＴＰＣ可作为骨缺损修复材料促进缺损骨新生修复。     

成人牙髓干细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料相容性试验研究

目的:研究成人牙髓干细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料的生物相容性。方法:采用冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙复合材料。酶消化法分离,培养人牙髓干细胞,并将达到一定数量级的牙髓干细胞与支架材料进行复合培养,通过扫描电镜观察细胞的生长情况。结果:扫描电镜可见复合材料具有良好的多孔网状结构,成人牙髓干细胞与材料表面紧密贴附,生长良好。结论:复合壳聚糖-磷酸三钙进行培养的成人牙髓干细胞生长良好,具有良好的生物相容性。表明壳聚糖-磷酸三钙完全符合生物支架材料的要求,是一个具有很好应用前景的牙髓组织工程支架材料。     

人牙周韧带细胞和β-磷酸三钙多孔生物陶瓷的牙周组织工程研究

目的：以多孔β-磷酸三钙(β-TCP)生物陶瓷材料作为组织工程支架,以人牙周韧带细胞(PDLCs)作为种子细胞,探索构建组织工程化牙周膜的可行性。方法：将体外培养7d的PDLCs和β-TCP的复合物,植入裸鼠背部一侧皮下,在对称部位植入单纯的β-TCP作为空白对照。术后4周、8周、12周分别取材,进行组织学检测。结果：实验组8周后支架材料部分吸收,可见未降解的支架材料孔洞内广泛分布着新生组织,其内可见小血管、腺体等结构;12周时支架材料大部分吸收,取而代之的是大量片状的新生结缔组织。空白组组织形成较少,支架材料降解与实验组相似。结论：体外培养的PDLCs与β-TCP复合后,能在体内增殖、分化,形成结缔组织,从而证明以β-TCP作为支架材料进行的牙周组织工程是可行的。