老年患者大肠埃希菌分离株对氯霉素耐药性及耐药相关基因研究

目的了解老年患者耐氯霉素大肠埃希菌基因存在状况。方法采用聚合酶链反应及序列分析20株大肠埃希菌的catB和cmlA基因。结果catB和cmlA基因的阳性率均为20％，有2株大肠埃希菌catB和cmlA基因同时阳性。结论临床分离的耐氯霉素大肠埃希菌与产生耐药基因密切相关，在大肠埃希菌中检出catB和cmlA基因均为国内首次报道。     

大肠埃希菌耐药基因的聚合酶链反应分析

目的了解临床分离大肠埃希菌中碳青霉烯酶的携带及耐药基因分布,为临床合理应用抗菌药物提供科学依据。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用微量稀释法筛选耐碳青霉烯类大肠埃希菌30株,通过Hodge试验检测碳青霉烯酶,以EDTA/IMP、EDTA/CAZ复合纸片,亚胺培南和头孢他啶为底物,进行协同试验检测B类碳青霉烯酶(金属酶),用聚合酶链反应(PCR)扩增耐碳青霉烯类抗菌药物的基因,以确定基因的种类。结果 25株大肠埃希菌对头孢菌素、碳青霉烯类和喹诺酮类抗菌药物耐药,5株大肠埃希菌对阿米卡星敏感;通过Hodge试验对30株大肠埃希菌表型的筛选,阳性菌株共28株,阳性率为93.0%;通过PCR基因分析,30株大肠埃希菌中检出28株KPC基因,阳性率达到93.0%,30株大肠埃希菌中未发现VIM和IMP基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌主要在ICU和呼吸科,耐药原因主要是KPC基因,但是不能排除VIM和IMP基因。     

137株多耐药大肠埃希菌表型及耐药机制研究

目的 探讨临床分离的多耐药大肠埃希菌对常用抗生素的敏感性及其耐药机制.方法 采用琼脂稀释法对北京市城区3家三甲医院近3年从各种临床标本分离的大肠埃希菌进行药敏试验,收集对头孢噻肟、环丙沙星和阿米卡星同时耐药的多耐药菌株;采用PCR和测序方法检测上述多耐药菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药基因,并对菌株进行系统发生分型;使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性;通过接合试验观察耐药质粒的传递性.结果 共检出137株多耐药大肠埃希菌.其中分离自尿液的比例最高(41.61%);除对亚胺培南和美罗培南耐药率(均为1%)较低外,对哌拉西林、他唑巴坦的耐药率也较低(4%);85%的多耐药大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL),且多为CTX-M型;介导菌株对喹诺酮类药物耐药的主要原因是药物靶位突变;导致菌株对阿米卡星耐药的机制主要是产生16S rRNA甲基化酶(ArmA或RmtB).结论 临床分离多耐药大肠埃希菌主要来自尿液标本;除碳青霉烯类,酶抑制剂抗生素可能也是治疗该类菌株引起感染的有效药物.     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

3′BS—PCR方法探测氟喹诺酮耐药大肠埃希菌gyrA基因248位点突变的探讨

目的 对3′BS-PCR法用于快速、准确鉴定耐药细菌染色体基因突变进行探讨。方法 3′BS-PCR方法检测喹诺酮耐药大肠埃希菌gyrA基因常见突变点（C－248）是否突变;gyrA基因喹诺酮耐药决定区PCR产物序列分析进行验证;研究菌株包括大肠埃菌野生株Ecs及其实验室诱变药株R2、R256和临床分离耐药株R5、R6。结果 R5、R6和R256均存在gyrA基因第248位C→T的突变;对R2、R5和R6的序列分析显示R5和R6 发生了259位G→A(R5)/T(R256）突变。结论 3′BS-PCR方法具有确定突变碱基特异性高,可靠且简便快速的优点,适合用于细菌发染色体基因耐药突变的快速探测。     

老年病区大肠埃希菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因携带的研究

目的 了解老年病区大肠埃希菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因的存在和耐药性.方法 应用聚合酶链反应技术与稀释法对大肠埃希菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因和药敏进行了检测.结果 该医院老年病区患者标本中分离的30株大肠埃希菌检测出携带消毒剂-磺胺耐药基因21株,检出率70.0%.结论 该医院老年病区分离的大肠埃希菌临床株消毒剂-磺胺耐药基因检出率较高,多数对临床常用抗菌药物耐药,提出临床抗药菌株可能同时对消毒剂存在抗性,应引起我国医院消毒界的广泛重视.     

大肠埃希菌耐药性及耐药基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）与非产ESBLs大肠埃希菌（ECO）的耐药性及耐药基因携带情况,并阐明产ESBLs ECO基因型分布。方法K-B法检测54株ECO对22种抗菌药物的敏感性,PCR方法扩增ESBLs基因、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药基因。结果54株ECO对阿米卡星、奈替米星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、氨曲南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南敏感性达70.0%～100.0%;对喹诺酮类、庆大霉素、哌拉西林敏感性〈27.8%;27株产ESBLs ECO中,CTX-M-1型9株、SHV型5株、TEM型16株、OXA-1型8株、6株未检测出ESBLs基因型、10株有≥2种ESBLs基因型;54株ECO中耐氨基糖苷类抗菌药物44株,aac（3）-Ⅰ4株、aac（3）-Ⅱ38株、aac（6′）-Ⅰ17株、aac（6′）-Ⅱ11株、ant（2″）-Ⅰ8株及ant（3″）-Ⅰ12株;54株ECO中耐喹诺酮类抗菌药物41株,qnr基因检出率为7.3%。结论碳青酶烯类为治疗ESBLs阳性ECO的首选药物;除氨基糖苷类抗菌药物和呋喃妥因外,产ESBLs组耐药性明显高于非产ESBLs组;产ESBLsECO中TEM型为最常见的ESBLs型别;氨基糖苷类抗菌药物耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6）-Ⅰ为主;ECO对喹诺酮耐药率较高,且检测到qnr基因。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌相关耐药基因研究

目的 了解常州地区大肠埃希菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因.方法 用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头抱噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对大肠埃希菌的最低抑菌浓度,用聚合酶链反应(PCR)检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌TEM、SHV等17种耐药基因,并用DNA测序仪测序.结果 80株大肠埃希菌ESBLs检出率为46.3%,37株大肠埃希菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、OXA-1群和DHA 5种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为81.1%、78.4%、21.6%、10.8%、5.4%;37株菌中有36株至少检出1种β-内酰胺酶基因,24株同时检出>2种β-内酰胺酶基因,1株菌最多同时检出4种β-内酰胺酶基因,只有1株未检出β-内酰胺酶基因.结论 大肠埃希菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,成为对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一.     

大肠埃希菌老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因研究

目的 了解大肠埃希菌(ECO)老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因产生状况.方法 对20株ECO进行15种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB/CEF、CARB、DHA、ACT/MIR、LAT/CMY)及毒力基因(CNF-1、CNF-2)检验.结果 20株ECO检出TEM基因14株、SHV基因3株、CTX-M-1群基因1株,20株ECO中至少检出1种β-内酰胺酶基因,7株同时检出>2种β-内酰胺酶基因.结论 该20株ECO β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

大肠埃希菌尿液分离株消毒剂与灭菌剂耐药基因研究

目的 了解临床尿液标本分离的60株大肠埃希菌消毒剂、灭菌剂耐药基因的存在情况.方法 收集2006年1月-2008年10月从住院患者尿液中分离出大肠埃希菌60株,应用K-B纸片扩散法检测细菌对15种抗菌药物的敏感性;应用PCR及序列分析3种消毒剂、灭菌剂耐药基因(qacE△1、tehA、merA).结果 60株大肠埃希菌除对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、阿米卡星、庆大霉素有较高的敏感率(>70.0 %)外,对其他10种抗菌药物的敏感率均较低(<50.0%)}60株菌中42株检出qacE△1基因(70.0%),10株检出merA基因(16.7%),全部检出tehA基因,1号菌tehA基因测得序列与美国核酸库(GenBank)已登录的tehA基因序列不同,为新亚型.结论 临床尿液标分离的大肠埃希菌70.0%携带qacE△1基因,未来细菌消毒剂的耐药可能是医院感染的主要因素之一.     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产ESBLs表型与基因型分析

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌发生率及主要基因型分布特点.方法 采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法对临床标本中分离的110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌进行ESBLs的表型确定试验,同时分别用聚合酶链反应(PCR)扩增法检测TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9耐药基因,并对其产物进行序列分析.结果 产ESBLs阳性菌株的检出率分别为:肺炎克雷伯菌占36.2%,大肠埃希菌占42.7%,总检出率为39.7%;ESBLs检出模式以头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸单组为底物阳性率最高,占阳性菌株的66.7%;单用头孢他啶,头孢他啶/克拉维酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.1%和肺炎克雷伯菌64.7%的漏检;耐药基因型分析显示,TEM、SHV、CTX-M-I、CTX-M-2、CTX-M-9基因检出率分别为54.3%、38.3%、21.O%、24.7%、70.4%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均以CTX-M型为主要基因型,占91.4%;同时携带>2种耐药基因菌株占71.6%.结论 医院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株携带多种耐药基因严重,需引起临床的高度重视.     

耐含酶抑制剂抗菌药物的肺炎克雷伯菌耐药表型及基因型研究

目的研究含酶抑制剂抗菌药物头孢哌酮/舒巴坦(CFS)和(或)哌拉西林/他唑巴坦(TZP)耐药的肺炎克雷伯菌耐药性和耐药基因。方法收集浙江大学医学院附属第一医院细菌室2006年4~6月分离非重复肺炎克雷伯菌75株,用琼脂稀释法检测12种抗菌药物的最低抑菌浓度,用含1μg/ml头孢噻肟平板法和纸片确证试验做为表型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)筛选;采用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物测序、等电聚焦电泳检测其等电点、接合试验等方法明确基因型。结果75株肺炎克雷伯菌中共检测到CFS和(或)TZP耐药20株,表现为多药耐药且均检出β-内酰胺酶基因,其中15株(75.0%)携带CTX-M型基因,14株(70.0%)携带≥2种基因,3株(15.0%)产KPC-2碳青酶烯酶肺炎克雷伯菌高度耐药;11株(55.0%)产ESBLs同时产TEM-1型广谱酶,4株(20.0%)同时携带CTX-M、TEM和SHV基因。结论酶抑制剂耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因,表现为多药耐药。     

老年患者大肠埃希菌分离株耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的了解老年患者分离的大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法采用微量稀释法检测21种抗菌药物的敏感性,运用聚合酶链反应(PCR)技术检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果 20株大肠埃希菌呈现多药耐药,对氨基糖苷类抗菌药物的耐药率在60.0%～90.0%,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ基因阳性率分别为30.0%、35.0%、25.0%、5.0%;携带≥1种基因的菌株有14株(70.0%)。结论临床分离的大肠埃希菌多药耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。     

216株大肠埃希菌的耐药性分析

目的 探讨医院大肠埃希菌(ECO)的感染现状和耐药性,为临床医师治疗感染性疾病提供用药依据.方法 严格按照<全国临床检验操作规程>,采用常规方法进行ECO培养鉴定;采用K-B法进行药物敏感试验.结果 216株大肠埃希菌对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性,其中对氨苄西林耐药率最高,达92.6%,对亚胺培南敏感率为100.0%;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)ECO检出率为38.4%.结论 医院应加强合理使用抗菌药物管理,严格控制耐药菌的产生和流行.     

耐万古霉素肠球菌表型测定及基因分型

目的对耐万古霉素肠球菌(VRE)的确证试验,同时对VRE进行基因分型。方法采用浓度梯度法及含6μg/ml万古霉素的脑心浸液琼脂平板上点种,确证6株VRE,聚合酶链反应检测vanA、vanB、vanC,并对1株vanB的屎肠球菌进行测序,聚合酶链反应检测ermB、qacE△1-sul1基因。结果160株肠球菌属用微量肉汤稀释法粗筛出17株最低抑菌浓度(MIC)≥4 mg/L的肠球菌属,用浓度梯度法只有6株MIC≥4 mg/L的肠球菌属,并在含6μg/ml万古霉素的脑心浸液琼脂平板上都有不同程度的生长;17株肠球菌属对红霉素ermB耐药基因检测,有10株含有ermB基因;未检测到qacE△1-sul1基因。结论VRE确认试验以及准确检测其MIC值是筛查VRE的可靠方法,对VRE的基因分型,为VRE的进一步研究及流行病学分析提供有价值的信息。     

肝硬化并发自发性腹膜炎腹水中大肠埃希菌耐药性和基因型分布的研究

目的了解肝硬化并发自发性腹膜炎腹水中大肠埃希菌的耐药性和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌基因型分布状况。方法采用纸片扩散法(K-B法)对大肠埃希菌进行抗菌药物的敏感性试验,通过PCR法分析其所产生基因型。结果56株大肠埃希菌共检出产ESBLs菌20株,产酶率为35.7%,对亚胺培南、美罗培南和头孢哌酮/舒巴坦全部敏感,产ESBLs株对其他抗菌药敏感性较低;在20株产ESBLs菌中有12株产TEM型酶,3株SHV型酶,10株产CTX-M型酶和2株产OXA型酶。结论肝硬化并发自发性腹膜炎腹水中大肠埃希菌耐药严重,TEM和CTX-M型基因多见。     

Prevalence of Antibiotic Resistance in Escherichia coli Fecal Isolates From Healthy Persons and Patients With Diarrhea

Objectives

This study aimed to investigate the prevalence of antibiotic resistance in fecal Escherichia coli isolates from healthy persons and patients with diarrhea.

Methods

E. coli isolates (n = 428) were obtained from fecal samples of apparently healthy volunteers and hospitalized patients with diarrhea. Susceptibility patterns of isolates to 16 antimicrobial agents were determined by agar disc diffusion.

Results

Most E. coli isolates exhibited less than 10% resistance against imipenem, cefotetan, aztreonam, cefepime, cefoxitin, amikacin and netilamicin, although greater than 65% were resistant to ampicillin and tetracycline. No significant difference in resistance rates for all tested antibiotics was found between isolates from the healthy-and diarrheal-patient groups, including for multi-drug resistance (p = 0.22). The highest number of resistant antibiotics was 12 antibiotics. No significant differences in antibiotic resistance were found among the sex and age strata for isolates from healthy individuals. However, antibiotic resistance rates to cefoxitin, cefotaxime, amikacin, and netilamicin were significantly higher in the isolates of men than those of women (p < 0.05) in isolates from patients with diarrhea. Furthermore, isolates from patients with diarrhea older than 40-years of age showed higher resistance to cefepime and aztreonam (p < 0.05).

Conclusion

High resistance to the antibiotics most frequently prescribed for diarrhea was found in isolates from patients with diarrhea and apparently healthy individuals without any significant difference.     

大肠埃希菌连续分离株耐药性与季胺类化合物耐药基因研究

目的 了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和耐消毒剂基因存在状况.方法 测定临床连续分离60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况.采用聚合酶链反应检测qacE△1基因.结果 60株大肠埃希菌对亚胺培南/西司他丁、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦3种抗菌药物完全敏感,对其余16种抗菌药物耐药率在5.0%～90.0%,ESBLs检出率为45.0%;qacE△1基因阳性34株(阳性率56.7%).结论 大肠埃希菌具多药耐药特征,qacE△1基因携带率高.     

产超广谱β-内酰胺酶表型及基因型分布

目的了解淮北地区3所医院,临床分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs表型和基因分布. 方法用1999年NCCLS推荐的初筛试验,从 147株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中筛选出可疑产ESBLs细菌,并用确证试验加以确认,然后用PCR的方法扩增其基因型. 结果116株大肠埃希菌和31株肺炎克雷伯菌中,共检出69株产ESBLs(46.9%),其中大肠埃希菌51株(42.2%),肺炎克雷伯菌18株(58.1%);将初筛得到的可疑菌株用纸片扩散确证法,头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸测定,检出69株产ESBLs细菌,而用头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs阳性菌为32株;PCR扩增基因型阳性结果为TEM型 119株、SHV型10株、CTX-M型68株、OXA型18株. 结论淮北地区ESBLs的检出率为46.9%,头孢噻肟检测ESBLs的敏感性明显高于头孢他啶;基因型以CTX-M型为主,有些菌株同时携带≥2种耐药基因.