薏苡仁注射液对肺腺癌细胞多药耐药性逆转作用的机制研究

目的 观察薏苡仁注射液(康莱特)对人肺腺癌细胞A549多药耐药性(MDR)逆转作用,并对其机制进行探讨.方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549并以不同剂量康莱特进行处理,磺酰罗丹明(sulphorhodamine B,SRB)染色法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测多药耐药因子多药耐药基因1(MDR1)、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA在各组中表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测P-糖蛋白(P-gp)、Survivin、Bcl-2、Bax蛋白水平表达,将各组结果进行比较.结果 4组肺腺癌细胞A549的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05).其中,与空白对照组比较,康莱特低、中、高剂组抑制率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).康莱特中、高剂组抑制率比较,差异亦有统计学意义(P<0.05).康莱特低、中、高剂组MDR1、P-gp、Survivin、Bcl-2表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 康莱特可抑制肺腺癌细胞生长,该药具有明显的逆转肺腺癌多药耐药性的作用,该作用是通过调节多药耐药因子的表达而实现的.     

RNA干扰及厄洛替尼阻断EGFR信号途径对A549细胞抗增殖的影响

目的 研究RNA干扰（RNAi）及厄洛替尼阻断表皮生长因子受体（EGFR）信号途径对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 肺腺癌A549细胞分为对照组、RNAi组、厄洛替尼组。采用倒置相差显微镜观察EGFR信号阻断前后细胞形态的变化,RT-PCR检测EGFR mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测EGFR及Bcl-2、Bax表达。结果 RNAi阻断EGFR mRNA表达下调。与对照组相比,RNAi组及厄洛替尼组A549细胞凋亡增加, EGFR表达降低,Bcl-2水平表达降低,Bax蛋白表达增高, Bcl-2/Bax比值降低。结论 阻断EGFR信号途径可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值水平相关。     

尼美舒利对A549细胞株放疗增敏作用的观察

目的:观察尼美舒利(Nimesulide)作为环氧化酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂对肺腺癌细胞株A549的放射增敏作用并探讨其作用机制.方法:对数期生长的A549细胞株,按照实验要求分为对照组、药物组、照射组及实验组,流式细胞仪检测各组肿瘤细胞凋亡率及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响;克隆形成实验检测放射增敏作用.结果:小剂量(75mmol/L)尼美舒利与射线照射联合应用能够上调Bax的蛋白表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达,明显增加肿瘤细胞的凋亡,具有统计学差别.结论:COX-2抑制剂尼美舒利对人肺腺癌A549细胞株具有明显的放疗增敏作用.     

X线对肺癌细胞株A549 XRCC2和XRCC3表达水平的影响

目的:研究X线对肺癌细胞X线修复交叉互补基因2((X-ray repair cross complementing gene 2,XRCC2))与XRCC3表达水平的影响,探讨DNA同源重组修复机制在肺癌放疗过程中的作用?方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测X线对肺腺癌细胞株A549抑制率的影响,实时荧光定量RT-PCR技术检测 X线处理肺癌细胞(人肺腺癌细胞株 A549)后XRCC2和XRCC3 mRNA的表达水平?结果:肺癌细胞抑制率多数情况下随X线照射时间的延长及照射剂量的增大,细胞增殖抑制率增加,呈照射时间依赖性(P < 0.05)和剂量依赖性(P < 0.05),除了16 Gy组与32 Gy组比较无统计学意义(P=0.211)?X线照射后肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平均先增高后降低,在照射后48 h表达水平达高峰(P < 0.05),且随着照射剂量的增大,XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平也随之增加(P < 0.05)?结论:X线照射可引起肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA表达水平的明显改变,表明DNA同源重组修复机制可能在肺癌放疗耐受中起了重要的作用?     

高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响

目的 检测高能X射线对肺腺癌A549细胞与顺铂耐药相关的基因--切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达的影响.方法 对A549细胞进行X射线照射,总剂量10 Gy/(5 d·5f).利用RT-PCR检测照射前及照射开始后第1～4周细胞的ERCC1基因的表达;免疫组织化学SABC法检测照射前后细胞ERCC1蛋白的表达.结果 照射后第1～3周A549细胞ERCC1 mRNA及蛋白的表达水平比照射前显著升高,差异有显著性(F=152.00、26.63,q=6.03～28.31,P<0.01).结论 肺腺癌A549细胞照射后可能出现顺铂耐药.     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:通过体外实验观察DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2′脱氧胞苷(5-aza-2′deoxycytidine, 5-aza-dC)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响,初步探讨其在治疗肺部肿瘤的作用及可能机制。方法：分别以0.5、2.0、10.0 μmol/L的5-aza-dC处理人肺腺癌A549细胞,用MTT法测定药物干预72 h后的光密度值,计算抑制率,流式细胞仪检测5-aza-dC对肺癌细胞株细胞周期及凋亡的影响,实时定量PCR检测相关基因p21、Cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果：5-aza-dC能抑制人肺癌细胞株A549的增殖,且呈浓度依赖性; G0/G1期细胞比例下降,S期及G2/M期细胞比例明显高于对照组,出现G2/M细胞周期阻滞;同时,5-aza-dC能诱导A549细胞凋亡;与对照组比较,各药物干预组p21 mRNA表达升高(均P＜0.01),而Cyclin D1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05);与对照组比较,各药物干预组Bax、Bcl-2 mRNA表达均明显降低(均P＜0.01),且Bax/Bcl-2增高。结论：5-aza-dC能抑制肺癌细胞株的增殖、引起G2/M细胞周期阻滞,并促进凋亡,其机制可能与p21基因的上调及Bax/Bcl-2比值改变有关。     

pEgr1-hsTRAIL质粒对肺腺癌A549细胞放射敏感性及DR4和DR5表达水平的影响

目的:检测转染pEgr1-hsTRAIL质粒的人肺腺癌A549细胞放射敏感性变化及其对死亡受体（DR）4和DR 5 mRNA和蛋白表达的影响,探讨pEgr1-hsTRAIL质粒的辐射增敏效应和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:实验分为正常对照（Normal control）组、pEgr1-hsTRAIL组、6 Gy X线照射组和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组。A549细胞经过阳离子脂质体转染、X线深部治疗机照射后,利用平板克隆形成试验检测细胞放射敏感性,反转录RCR（RT-PCR）法检测DR4和DR5 mRNA表达变化,Western blotting法检测DR4和DR5蛋白表达的变化。结果：正常对照组和pEgr1-hsTRAIL组A549细胞的平均致死剂量（D0值）分别为3.26和1.91 Gy,说明pEgr1-hsTRAIL质粒能够增强A549细胞的放射敏感性。RT-PCR显示,转染pEgr1-hsTRAIL质粒对DR4和DR5 mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而6 Gy X线照射后DR4和DR5 mRNA表达均显著高于正常对照组（P<0.05）,转染pEgr1-hsTRAIL质粒后再进行6 Gy X线照射,DR4和DR5 mRNA表达水平均显著高于正常对照组（P<0.05）,但只有DR5 mRNA表达水平显著高于6 Gy X线照射组（P<0.05）。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,DR4和DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL组无明显变化,而在6 Gy X线照射和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组表达增加,其中DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组增加更明显。结论:重组表达质粒pEgr1-shTRAIL能够增强A549细胞放射敏感性,且能增强DR5辐射诱导表达,而对DR4的辐射诱导表达无明显增强作用。     

脂质体介导E1A—TK基因转染人肺腺癌细胞A549体外研究

目的用脂质体转染真核表达质粒PcDNA3E1A-TK入人肺腺癌细胞A549,观察丙氧鸟苷(GCV)、X射线及二者联合对转染细胞的体外杀伤作用。方法用阳离子脂质体介导真核表达质粒PcDNA3E1A-TK转染人肺腺癌细胞A549,PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A-TK基因DNA整合、mRNA表达。MTT法测不同浓度GCV、不同剂量X射线及一定剂量X线照射后再给一定量GCV对转染细胞的生长抑制率。结果PCR、RT-PCR结果表明转染细胞有E1A-TK基因整合、mRNA表达。根据IC50,转染细胞对GCV、X射线的敏感性分别比亲代细胞提高111.3倍和2.9倍,在作用相同时间后,GCV+X线照射治疗对转染细胞的生长抑制作用比单纯GCV或X线治疗明显增强(P<0.01)。结论脂质体介导外源基因E1A-TK成功转入人肺腺癌A549细胞并获得表达;转染细胞获得了对GCV和X线的敏感性,GCV和X线对转染细胞有协同杀伤作用。     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

吡咯烷二硫氨基甲酸对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的:探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及可能机制。方法:不同浓度PDTC(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)干预A549细胞24h、48h、72h后,MTT法检测细胞生长抑制率,Westernblot和免疫细胞化学法分别检测PDTC干预48h后A549细胞凋亡抑制基因bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:随着PDTC干预浓度的增大和时间延长,A549细胞生长抑制率增加(P<0.05、0.01);PDTC干预后Bcl-2及PCNA蛋白表达均下降,呈剂量依赖性(r=-0.980,P<0.01;r=-0.977,P<0.01)。结论:PDTC可抑制人肺腺癌A549细胞生长,其机制可能与Bcl-2表达下调及抑制细胞增殖有关。