不同基因型乙型肝炎病毒患者拉米夫定治疗期间YMDD突变株的变化分析

目的研究不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)患者拉米夫定治疗期间酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)突变株的变化。方法采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术和基因测序法分别对115例接受拉米夫定治疗的乙型肝炎患者血清进行乙型肝炎病毒基因(HBV DNA)水平、YMDD突变株及基因型检测。结果拉米夫定治疗时间<12个月、12~24个月及>24个月患者的HBV DNA阳性率分别为75%、35%、16%,YMDD变异率分别为22%、54%、100%。对115例乙型肝炎患者进行HBV基因分型发现,B型占17%,C型占75%,B、C混合型占8%;其中,B型、C型患者中YMDD变异率分别为21%、19.5%,B、C混合型患者中未发现YMDD变异。HBV DNA与HBV的YMDD变异率无明显相关性(P>0.05)。结论拉米夫定治疗期间,HBV的YMDD变异不受病毒基因型的影响。     

乙型肝炎病毒基因型与YMDD基因区序列突变及BCP突变关系探讨

目的 对湘潭地区HBV感染者的基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变情况进行研究,并对三者之间的关系进行探讨.方法 针对湘潭地区952例不同类型的HBV感染者的样本同时进行基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变检测,并对检测结果进行统计分析.结果 湘潭地区HBV各种基因型分布比例为:B型698例、占73.32%,C型115例、占12.08%,B、C型混合感染139例、占14.60%.YMDD基因区序列突变结果显示:YMDD野生型844例、占88.66%,其余为YMDD突变型,其中YVDD 54例、占5.67%,YIDD 53例、占5.57%,1例为YMDD与YVDD混合感染.BCP区突变结果显示:1762A/1764G(野生型)672例、占70.59%,1762T/1764A(突变型)188例、占19.75%,其余92例为1762T/1764A和1762A/1764G混合型、占9.66%.基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变三者相关性分析显示:HBV B型和C型YMDD基因区序列突变率分别为10.04%、10.43%,差异无统计学意义(χ2=0.017,P＞0.05),HBV B型和C型YMDD基因区序列突变类别差异有统计学意义(χ2=4.836,P＜0.05),HBV C型YVDD突变率(9.57%)要高于B型(5.88%).HBV B型和C型BCP区突变率分别为27.36%、46.09%,差异有统计学意义(χ2=16.478,P＜0.01),C型BCP区突变率要高于B型.HBV YMDD野生型和突变型的BCP区突变率分别为2 8.67%、35.51%,差异无统计学意义(χ2=2.139,P＞0.05),但YVDD BCP区突变率(61.11%)要高于其他类别.结论 (1)湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有南方地区的特点.(2)拉米夫定治疗前通过HBV基因型检测来预测抗病毒应答可能并无实际意义.(3)HBV基因分型、YMDD基因区序列突变、BCP区突变检测的应用,将有助于临床上对乙肝患者的预后和转归进行正确评价,为及时合理的实施干预措施提供了重要依据.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between HBV genotypes and YMDD motif mutations or BCP mutations in Xiangtan of Hunan Province. Methods HBV genotypes, YMDD motif mutations and BCP mutations were analyzed in 952 HBV infected patients. Results HBV genotyping showed that 698 HBV type B patients and 115 HBV type C patients accounted for 73.32% and 12.08% respectively of all the participants. The rest 139( 14.60% )were genotype B and C mixed infection( B + C ). The analysis of YMDD motif mutations showed that 844 YMDD wild-type which accounted for 88.66% of all the subjects and the remainder were YMDD mutation types, of which 54( 5.67% ) carried YVDD, 53( 5.57% ) YIDD,and 1 YVDD and YIDD mixed infection. Basic Core Promoter mutations showed that 1762A/1764G ( wild type )accounted for 70.59% and 1762T/1764A( mutant ) accounted for 19.75%. The rest 92 patients were 1762T/1764A and 1762A/1764G mixed infection. This study showed no significant difference in the rate of YMDD mutation( 10.04% vs 10.43% ,χ2 =0.017,P＞0.05 ) ,but a significant difference in the types of YMDD mutation(χ2 = 4.836, P ＜ 0.05 )between HBV types B and C. The YVDD mutation was more commonly seen in genotype C( 9.57% ) than in genotype B( 5.88% ). The BCP mutation rate showed a significant difference( 27.36% vs 46.09%, χ2 = 16.478, P ＜ 0.01 ). Genotype C was more frequent than genotype B. The BCP mutation rate showed no significant difference between YMDD Wild-type and YMDD mutation types( 28.67% vs 35.51%, χ2 = 2.139, P ＞ 0.05 ), but most of BCP mutations happened in YVDD mutant type( 61.11% ). Conclusions ( 1 ) The predominant HBV genotypes in Xiangtan were genotype B and genotype C, the major genotype was type B, which display the characteristics of epidemiology in Southern China. ( 2 ) Determination of HBV genotypes before lamivudine therapy was probably not an important pretreatment investigation to predict antiviral responses. ( 3 ) Detection of HBV genotypes, YMDD motif mutations and BCP mutations will contribute to the correct evaluation of prognosis and timely proper management of HBV patients.     

乙型肝炎病毒基因型、YMDD变异与病毒复制水平的关系

目的研究拉米夫定治疗慢性乙型肝炎(CHB)期间乙肝病毒(HBV)YMDD变异的情况及其与HBV基因型和病毒复制水平的关系。方法检测53例CHB患者在使用拉米夫定治疗后的YMDD突变情况,考察其与HBV基因型和病毒复制水平的关系。结果患者在用药9个月和12个月后发生YMDD突变的概率为1.8%和9.4%;基因型B的治疗有效率明显高于基因型C(P<0.05)。基因型C的YMDD突变率明显高于基因型B的YMDD突变率。结论拉米夫定能迅速抑制HBV复制、改善肝功能,但长期用药部分患者会出现耐药,其YMDD突变概率随治疗时间的延长而增加。     

不同基因型的乙型肝炎病毒基因变异状况分析

目的研究不同的HBV基因型前C区的第1896位、基本核心启动子（BCP）区第1762位和第1764位双变异的规律及其与临床的关系。方法分别用基因芯片和基因测序的方法检验HBV—DNA阳性的乙型肝炎病毒携带者（ASC）26例、慢性乙型肝炎（CHB）186例、肝硬化（HLC）69例、肝细胞癌（HCC）26例、重型肝炎（FHF）34例的基因型和部分点突变，并比较基因型与基因变异、临床类型与基因变异的关系。结果各临床型间第1762位和第1764位双变异差异显著，ASC组与CHB组、HLC组、HCC组和FHF组相比较，X^2分别为10．8985、42．4086、14．0159、21．7324，P分别为0．0010、0．0000、0．0002和0，0000；基因型B与C型的第1762位、第1764位双突变相比，X^2=48．1395，P=0．0000。结论基因型的存在决定了HBV的某些其他基因变异的方向和频率，从而也决定了因此而造成的肝损伤的程度。     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗后出现YMDD变异的相关因素分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在服用拉米夫定治疗后发生YMDD变异的相关因素.方法 选择应用拉米夫定治疗后产生YMDD变异和未产生YMDD变异的CHB患者各50例,分析两组治疗前血清病毒载量水平、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBeAg状态与发生YMDD变异的关系.结果 YMDD变异组治疗前HBV DNA水平高于未...     

拉米夫定耐药感染者HBV基因与YMDD变异的相关性探讨

目的探讨拉米夫定耐药感染者HBV基因型与YMDD变异的相关性。方法采用PCR扩增后测序的方法,对162例拉米夫定耐药感染者进HBV基因型的分析。实时荧光定量PCR法检测HBVYMDD变异及HBVDNA载量。率的比较采用Y2检验法,两组均数间的比较采用t检验法。结果162例拉米夫定耐药感染者中,B基因型102例（63．0％）,C基因型60例（37．0％）。YMDD变异111例（68．5％）,其中YIDD变异30例（18．5％）,YVDD变异32例（19．7％）,YIDD／YVDD混合型变异49例（30．3％）。统计结果显示,不同性别之间HBV基因型分布没有显著性差别（P〉0．05）。B型患者的年龄（29．7岁±10．2岁）显著低于C型患者的年龄（35．3岁±11．3岁）,差异有统计学意义（P〈0．05）。YMDD变异的发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义（P〉0．05）。C基因型患者血清的HBVDNA含量（6．08±0．71）显著高于B基因型组（5．73±0．90）（P〈0．05）,而血清ALT水平没有显著性差别（P〉O．05）。结论拉米夫定耐药感染者YMDD变异与基因型无关。但C基因型患者平均年龄、病毒载量显著高于B基因型,可能是导致CHB患者对拉米夫定耐药的重要因素。     

148例肝硬化患者乙型肝炎病毒基因型分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型与肝炎后肝硬化的相关性。方法用PCR荧光基因型分型方法对甘肃地区HBV感染者中148例肝硬化(LC)患者的血清标本进行分型。结果基因型在LC患者中的分布:B基因型39.86%(59/148),C基因型57.43%(85/148),两者差异有统计学意义(χ2=4.69,P=0.036);C基因型患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平明显高于B基因型患者(t=1.99,P<0.05);C基因型患者血清HBeAg阳性率明显高于B基因型患者(χ2=13.33,P=0.000)。结论甘肃地区LC患者主要有B、C两种基因型,以C基因型为优势基因型,C基因型与肝病的严重性有关。     

乙型肝炎患者HBV-DNA载量及基因型与YMDD变异的相关性研究

慢性持续性乙肝病毒（mV）感染，可导致严重肝病，并可进一步发展为肝硬化和肝癌。拉米夫定具有抑制HBV复制，使肝功能正常化、肝组织病理学改善、副作用小等优点。但服用拉米夫定后，将诱发HBV-DNA聚合酶活性区酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸（YMDD）发生变异，从而导致机体产生耐药，并且这种变异与服药时间的长短有关。作者对128例经拉米夫定治疗20-96周后的乙肝患者进行回顾性分析，检测治疗前后HBV-DNA水平及基因型分析，以及治疗后YMDD变异情况，旨在探讨病毒变异与血清HBV-DNA水平及基因型的相关性，并初步探讨其临床意义。     

乙型肝炎患者HBV-DNA载量及基因型与 YMDD变异的相关性研究

<正>慢性持续性乙肝病毒(HBV)感染,可导致严重肝病,并可进一步发展为肝硬化和肝癌。拉米夫定具有抑制HBV复制,使肝功能正常化、肝组     

苏北地区乙型肝炎病毒基因型分布及临床

目的 探讨苏北地区慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况及基因型与性别、年龄、疾病分类、HBV-P基因YMDD(YMDD)变异的相关性.方法 血清HBV基因型及YMDD变异检测均采用PCR-微板杂交-ELISA法.结果 130例患者中基因型B(B型)占3.1%(4/130),基因型C(C型)占50.0%(65/130),基因型非B非C型 (NBNC型)占46.9%(61/130).男、女两组基因型差异未见统计学意义(χ2 = 1.338,P＞0.05).4例B型均为40岁以下的慢乙肝患者;C型及NBNC型在慢乙肝及肝硬化患者中差异未见统计学意义(χ2 =0.642,P＞0.05).其中12 0例在使用抗病毒治疗前有8例发生HBV-P基因YMDD变异,8例中6例为C型,2例为NBNC型;6例C型中5例为HBeAg阳性的慢乙肝肝脏炎症明显患者.结论 苏北地区基因型分布以C型为主,C型HBeAg阳性、病毒载量高、肝脏损害明显的慢性乙型肝炎患者在使用抗病毒治疗前易发生HBV-P基因YMDD变异,应引起临床注意.     

未经抗病毒治疗的HBV P基因YMDD基因序列变异及与基因型的关系

目的了解有些患者体内HBVP基因酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸（YMDD）基因序列（基序）变异系药物所致，抑或是其本身与野生病毒株共存，以便指导应采用的抗病毒治疗方案。方法应用PCR-微板杂交-ELISA法对未经中西药抗病毒治疗的152例慢性乙型肝炎（慢性乙肝）、18例乙型肝炎肝硬化（乙肝肝硬化）患者共170份血清标本检测了YMDD变异毒株及其基因分型。结果170例患者中有14例（8．24％）检测到YMDD自然变异毒株，14例中慢性乙肝12例、乙肝肝硬化2例，年龄在31～56岁者10例（71．43％）。HBeAg阳性／抗-HBe阴性12例（85．71％），HBeAg阴性／抗-HBe阳性及HBeAg阴性／抗-HBe阴性各1例（各占7．14％），与YMDD自然变异阴性组的性别、年龄、疾病种类及HBeAg阳性／抗-HBe阴性所见相比，差异无统计学意义。ALT大于2倍正常值者9例（64．29％），最高为1072U／L。14例中C型9例（64．29％），9例中有8例为HBeAg阳性／抗HBe阴性，此9例中7例为慢性乙肝，另2例为乙肝肝硬化患者；5例为非B非C（NBNC）型，未见B型和B、C混合型者。HBVDNA定量除1例C型为8．46×10^4拷贝／ml外，余13例（92．86％）均大于1×10^6拷贝／ml，最高为5．70×10^4拷贝／ml，与YMDD自然变异阴性组相比，差异有显著性。结论HBV的YMDD自然变异可在患者体内感染慢性化的过程中发生，与野生毒株同时共存。其发生与性别、年龄、疾病种类及HBeAg是否阳性无关。多见于C型、HBV含量中等以上、有明显肝脏损害者。     

YMDD变异患者病情进展的临床观察

目的:探讨服用拉米夫定YMDD变异者病情进展相关因素,提高抗HBV的治疗效果。方法:选择接受拉米夫定治疗患者267例,平均治疗18个月后进行YMDD检测,分成YMDD(+)组、YMDD(-)组,分析两组间在治疗前1个月、平均治疗18个月后肝功能、血清学肝纤维化、HBV-DNA定量的差异。结果:YMDD(+)组与YMDD(-)组比较,治疗前YMDD(-)组HBV-DNA病毒量普遍较YMDD(+)组低;患者在治疗后YMDD(+)组转氨酶、HA、IVC明显高于YMDD(-)组(P<0.05);蛋白合成指标(TP、Alb)均低于YMDD(-)组(P<0.043);HBV-DNA阳性率明显高于YMDD(-)组。结论:拉米夫定治疗后转氨酶、肝纤维化指标升高、蛋白合成指标下降,HBV-DNA病毒增加应作为YMDD变异患者病情进展的临床指标。HBV-DNA定量较低,ALT较高抗病毒效果较好,发生变异几率较低。     

Taqman MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的:探讨Taqman MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。方法:采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量,Taqman MGB双探针方法和测序方法检测其YMDD变异,以测序方法为参考方法,评价Taqman MGB双探针方法的可靠性。结果:246例HBV DNA阳性患者血清标本中,TaqmanMGB双探针方法阳性检出率100%,100例正常对照全部为阴性;YMDD无突变106例,YMDD有突变(YIDD变异 YVDD变异)140例,与核酸测序方法比较,符合率100%。该方法经过敏感度实验,最低检出下限为1×103copies/ml。结论:Taqman MGB双探针方法能便捷、灵敏、特异地检测YMDD基序变异情况,适用于临床检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗的YMDD基序变异。     

逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨拉米夫定治疗1年后慢性乙型肝炎（CHB）患者发生YMDD基序变异的状况及其检测方法。方法采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量，荧光PCR法和变性高效液相色谱法检测HBV YMDD基序变异。结果61例CHB患者经过拉米夫定治疗1年后，40例（65．6％）HBV DNA阴转；在21例HBV DNA阳性患者中，10例为YMDD野生型，11例出现YMDD基序变异，变异率达18．0％（11／61）。在11例基序变异中，完全变异7例（63．6％），部分变异4例（36．4％）。在完全变异型中，YIDD变异型5例，YVDD变异型2例；在部分变异型中，YIDD变异型3例，YVDD变异型1例。结论CHB患者拉米夫定治疗1年后，出现较高的YMDD基序变异率。利用荧光PCR法结合变性高效液相色谱法检测基序变异，经济便捷，可作为CHB患者YMDD基序变异的常规监测。     

实时荧光PCR监测HBV感染患者拉米夫定治疗病毒YMDD变异

目的 建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测HBV感染患者经拉米夫定治疗后YMDD变异情况.方法 首先用PCR法筛选HBV DNA阳性血清157例,HBV DNA含量为2.0×103～8.0×108拷贝/ml,HBV DNA阴性血清30例,然后采用TaqMan探针技术和选择性引物的实时荧光PCR对其进行YMDD变异检测.通过变异株和对照管的循环阈值(cycle threshold,Ct值)差来计算血清中总HBV中的YMDD变异株含量,并用PCR产物直接测序方法随机对69例HBV DNA阳性标本RT区进行基因序列分析,验证所建立方法的准确性.结果 187例接受拉米夫定治疗患者血清标本中,发生YMDD变异88例,其中YIDD变异39例,YVDD变异38例,YIDD与YVDD混合变异11例.突变株的含量为10%～100%.30例HBV DNA阴性血清的C管循环40次,69例测序结果显示68例两种方法检测结果完全相同,符合率为98.55%.结论 采用选择性引物和TaqMan探针技术建立实时荧光PCR方法能快速准确地检测YMDD变异情况,并能检测患者变异株在HBV总量中的比例,为临床使用拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染监测耐药性提供一种有效方法.     

乙型肝炎病毒第1 896位点变异与基因分型同肝脏功能的相关性分析

目的分析乙型肝炎病毒前C区第1896位点变异与HBV基因型与肝功能指标之间的关系。方法对50例慢性乙肝患者采用测序和荧光定量PCR等方法检测相关指标。结果第1896位点变异患者的ALT水平与野生型患者有显著性的差异;乙型肝炎病毒前C区第1896位点变异与基因型无关。结论乙型肝炎病毒前C区第1896位点变异可能与病毒持续侵入肝细胞有关。     

江苏地区乙型肝炎患者HBV基因分型与血清HBV DNA水平研究

目的了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平、患者年龄之间的关系。方法采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测。结果176例血清中,C型117人(66.5%),B、C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%)。C型与B、C混合型在HBV DNA水平上存在显著差异(t=2.413,P<0.05),B、C混合型的HBV DNA水平明显高于C型。C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无显著性。HBV DNA各基因型在患者年龄水平上没有明显差异(P>0.05)。结论江苏地区HBV基因型以C型为主、B、C混合型次之,B型较少,D型、A型极少;B、C混合型患者的HBV DNA数量水平显著高于C型。