激活T细胞负性共刺激信号对大鼠同种异体肾移植存活的影响

目的观察激活负性共刺激信号程序性死亡因子及配体(PD1-PDL1)对延长移植肾存活的效能。方法以PDL1Ig基因重组腺病毒为载体,将PDL1Ig基因转入BN大鼠供肾,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化。结果转染组移植肾存活(36±7.3)d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低。结论PDL1基因局部转染可明显延长移植肾存活时间。     

CD154胞外区基因局部修饰对大鼠移植肾存活的影响

目的观察CD154胞外区基因局部修饰大鼠供肾对延长移植肾存活的效能.方法以CD154基因重组腺病毒为载体,将CD154胞外区基因转入BN大鼠供肾,以Lewis大鼠为受体,行同种肾移植为转染组,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.结果转染组移植肾存活(28±7.3) d,较对照组移植肾存活时间(8.6±1.2)d明显延长;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低.结论 CD154基因局部转染可明显延长移植肾存活时间.     

CTLA4Ig转染供者DC对同种异体胰岛移植存活的影响

目的 探讨共刺激信号阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)对胰岛移植存活的影响.方法 以BN、Lewis大鼠为胰岛移植供、受体;用CTLA-4Ig基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达CT-LA-4Ig;将供、受体DC于胰岛移植前24 h经股静脉分别注入受体(设为组Ⅰ、组Ⅱ),供、受体DC混合后注入受体(组Ⅲ),注射生理盐水的为空白对照组(组Ⅳ);观察各组糖尿病鼠高血糖改善情况及存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果 与对照组相比,组Ⅰ和组Ⅲ血糖维持正常时间和受体存活时间显著延长[组Ⅰ:(28.75±13.60)d和(35.38±13.21)d,P＜0.01;组Ⅲ:(41.25±13.74)d和(49.50±13.87)d,P＜0.01],组Ⅱ移植胰岛存活时间无延长[(8.75±3.33)d与(7.33±1.97)d相比,P＞0.05].术后第20天,组Ⅰ、组Ⅲ脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照[(0.24±0.05)和(0.21±0.05)与(0.70±0.09)相比,P＜0.01],而对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.66±0.07)和(0.66±0.07)与(0.69±0.05)相比,P＞0.05].结论 CTLA-4Ig基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植胰岛的存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植胰岛获得更长的存活时间.     

同种异体肾移植术的护理

肾脏移植已成为肾脏终末期病变的有效治疗手段,随着手术操作技术水平的提高,肾脏移植成功率越来越高[1]。我院自1998~2004年12月共作肾移植8例。经过医护人员的共同努力取得满意效果,现将体会介绍如下。1临床资料肾脏移植8例中,男性5例,女性3例。年龄最大59岁,最小27岁。均为慢     

同种异体肾移植术的护理

肾脏移植手术是终末期肾病的有效治疗方法。我科自1996～ 2 0 0 0年共进行肾脏移植手术 4例 ,经过医护人员的辛勤努力 ,除 1例出现超排取出移植肾脏外 ,其余 3例均获成功。现将护理体会报告如下。1　临床资料肾脏移植 4例中 ,男性 3例 ,女性 1例 ,年龄在 32～ 38岁之间 ,均为慢性肾炎尿毒症患者 ,肾移植前血液透析时间最长4年 ,最短 6个月 ,其中 1例至今生存 ,且生活自理 ,生活质量如正常人。2　护理2 .1　术前准备2 .1.1　心理护理 :肾移植手术是尿毒症病人接受治疗的最后一站。在此之前 ,患者曾接受各种治疗 ,使病人在精神上及经济上受到…     

程序性死亡因子配体1修饰供者DC对大鼠异体胰岛移植存活的影响

目的探讨共刺激信号阻断剂PDL1基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)对胰岛移植存活的影响。方法以BN、Lewis大鼠为胰岛移植供、受体;用PDL1(程序性死亡因子配体1)基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达PDL1;将供、受体DC于胰岛移植前24h经股静脉分别注入受体(设为组1、组2),供、受体DC混合后注入受体(组3),注射生理盐水的为空白对照组(组4);观察各组糖尿病鼠高血糖改善情况及存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果与对照组相比,组1和组3血糖维持正常时间和受体存活时间显著延长〔组1:(22.47±11.72)d和(41.25±12.98)d,P<0.01;组3:(37.67±14.71)d和(52.31±15.47)d,P<0.001)〕差异有统计学意义,组2移植胰岛存活时间无延长〔(3.75±1.33)d与(7.33±1.97)d,P>0.05〕差异无统计学意义。术后第20天,组1、组3脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照(0.27±0.08和0.23±0.06与0.70±0.09,P<0.001),而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无统计学意义(0.66±0.07和0.66±0.07与0.69±0.05,P>0.05)。结论PDL1基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植胰岛的存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植胰岛获得更长的存活时间。     

B7-H1对同种异体小鼠角膜移植免疫反应的影响

目的探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响。方法建立同种异体小鼠角膜移植实验模型。按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组。取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况。结果正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1。结论B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用。     

大鼠同种异体原位肾移植动物模型的建立

目的建立稳定的大鼠原位同种异体肾移植动物模型,为开展器官移植的实验研究提供依据。方法使用SD大鼠作为供受体,取供体左侧肾脏于灌注修整后,原位的移植至受体左侧肾窝,肾动脉采用端端吻合法,静脉则采用简化的端端吻合方式,输尿管则采用带部分膀胱瓣于受体膀胱吻合,受体右肾使用体外延迟结扎,从而复制出大鼠肾移植的动物模型。结果共行大鼠肾移植45对,模型成功率85%,整个手术时间平均(140±28)min,其中肾动脉吻合平均(10±3)min,供肾热缺血时间约3min。简化的肾静脉吻合平均(21±3)min,与传统吻合方法比较明显缩短了吻合时间(t=4.43,P<0.05)。结论该法有效地建立起大鼠原位肾移植模型,且并发症发生少,动物成活率高,简单实用。简化的静脉吻合方法有效的减少了静脉吻合时间。     

P53、PDL1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达相关性及其对预后的影响

目的研究抑癌基因P53(P53)、细胞程序性死亡配体1(PDL1)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及其对预后的影响。方法选择2020年5月-2022年12月广东省农垦中心医院肿瘤科经病理确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤患者40例,收集整理患者的完整病历资料,将其标本制作成组织切片,采取二步法免疫组化检测系统测定DLBCL组织中的P53、PDL1蛋白的表达,同时予以对应的化疗方案,分析P53、PDL1蛋白的表达及其与性别、年龄、Hans分型、分化程度、临床分期、疗效、风险程度、3年疾病无进展生存时间(PFS)及生存时间(OS)率的相关性。结果经检测,发现P53阳性表达率42.5 0%,而PDL1阳性表达率37.50%。P53、PDL1蛋白表达在性别、年龄、Hans分型、分化程度、临床分期上无显著差异(P>0.05),但在疗效、风险程度、3年PFS率及OS率上差异显著(P<0.05)。通过Pearson相关性分析,发现P53、PDL1均与疾病呈现正相关性(P<0.05)。结论P53、PDL1可在弥漫大B细胞淋巴瘤组织上表达,且与患者预后有关,可成为评价预后的重要指标。     

补益方联合免疫治疗对自身免疫性肝炎患者外周血T细胞中PD-1/PD-L1表达量的影响

目的:研究补益方联合免疫治疗对自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者外周血T细胞中程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)及其配体PD-L1表达量的影响。方法:选择2014年5月~2016年12月在我院就诊的56例自身免疫性肝炎患者,随机分为两组,每组28例。对照组给予泼尼松联合硫唑嘌呤常规免疫治疗,观察组给予补益方联合泼尼松、硫唑嘌呤治疗。治疗后12周后,测定两组肝功能、肝纤维化标志分子、T细胞相关细胞因子的含量,采集外周血并测定CD4~+T细胞中PD-1及PD-L1的表达量。结果:治疗12周后,观察组患者外周血中CD4~+PD-1~+、CD4~+PD-L1~+T细胞的荧光强度均显著低于对照组(P<0.05);血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、干扰素-γ(interferon,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin,IL)-17的含量均显著低于对照组(P<0.05),IL-4、IL-10的含量显著高于对照组(P<0.05)。结论:补益方联合免疫治疗能够降低PD-1/PD-L1的表达,调节CD4~+T细胞的功能,减轻肝损伤、抑制肝纤维化,有效治疗AIH。     

肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154的表达研究

目的检测肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154表达的动态变化情况。方法对同种异体移植肾患者于术前1、术后1、3、7、14、21和28d分别取外周血,对AR受体,在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血。对白细胞进行免疫荧光双标记,用流式细胞仪检测各共刺激分子在外周血淋巴细胞中的表达。结果术后1、3d内CD28 、CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞比率均有显著下降,但术后7d逐渐恢复至术前水平;AR时表达上升,其中CD28 和CD4 CD28 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后下降至术前水平。AR时CD40 和CD154 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后恢复至术前水平。结论外周血淋巴细胞CD28、CD40、CD154在移植后排斥反应时表达上调,提示外周血淋巴细胞共刺激分子的表达在临床肾移植急性排斥反应中起重要作用。     

霉酚酸对致耐受性树突状细胞延长移植肾存活效应的影响

目的探讨霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对致耐受性树突状细胞(dendritic cells,DC)延长移植肾存活效应的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;在供体DC培养过程中加入3种浓度MPA,以CTLA-4Ig基因转染DC使之成为表达CTLA-4Ig的致耐受DC;观察DC形态变化并检测受体脾细胞对上述DC的刺激反应。将未处理的致耐受DC以及0.05μmol/L MPA处理DC于肾移植前72h分别注入受体(组1、组2),注入供体DC的受体为组3,未注入DC的受体为对照(组4),观察受体血肌酐变化和移植肾存活时间。结果MPA组DC形态老化延缓,脾细胞对3种浓度MPA处理的DC刺激反应均显著低于对未经MPA处理致耐受DC的刺激反应;与对照相比,组1、组2移植肾存活时间显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),其中组2延长更为明显〔(81.1±14.6)d vs(8.9±0.8)d,P<0.001〕,组3存活时间显著缩短(5.3±0.6d,P<0.05)。术后45d后组2血肌酐水平明显低于组1。结论MPA预处理可降低致耐受DC的抗原提呈能力,提高其延长移植肾存活的效能。     

应用国产雷帕霉素延长肾脏移植物存活的实验研究

目的探讨国产雷帕霉素(rapamycin, RPM)及其与环孢素A(CsA)联合应用延长大鼠移植肾存活的效能.方法肾移植大鼠分为对照组、RPM组、CsA组、RPM 小剂量CsA组和RPM 大剂量CsA 4个治疗组.观察移植肾存活时间、血肌酐浓度和移植肾病理改变.结果与对照组相比,RPM组、CsA组、RPM CsA组移植肾存活时间均显著延长(P<0.01),其中,RPM 小剂量CsA组移植肾存活时间最长(69.2±10.3)d,术后15、30d组血肌酐浓度最低,未见明显的肾小管空泡变性.结论国产雷帕霉素可有效延长大鼠移植肾存活时间;与小剂量CsA合用可避免严重肾中毒,进一步延长移植肾的存活.     

共刺激阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞对移植肾存活的影响

目的探讨共刺激信号阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DC)对移植肾存活的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;用CTLA-4Ig基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达CTLA-4Ig;将供、受体DC于肾移植前24h经股静脉分别注入受体(设为组1、组2),供、受体DC混合后注入受体(组3),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果与对照组相比,组1移植肾存活时间显著延长[(54.1!11.6)dvs(8.4!0.7)d,P<0.01),组3移植肾存活时间延长更为明显(77.5!15.7)d,P<0.001],组2移植肾存活时间无延长(8.1!0.7)d,P>0.05。术后第20天,组1、组3脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照(0.27!0.07)and(0.23!0.06)vs(0.74!0.06),P<0.01,而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无显著性(0.68!0.04)and(0.71!0.05)vs(0.69!0.05),P>0.05。结论CTLA-4Ig基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植肾存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植肾获得更长的存活时间。     

腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染对大鼠移植肾存活的影响

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以及肾血管以下躯体血流后经肾动脉注射在体转染 (C组 )以及对照 ;以免疫荧光法检测基因转染效率 ;以转染效率最高组肾脏行同种移植 ,未转染组为对照 ,观察移植肾存活时间。结果　A组、B组以及对照组肾脏内未见荧光显示 ,C组肾小管显示阳性荧光 ,肾小球内未见荧光显示 ;各组肾脏光镜下结构正常 ;转染组移植肾存活时间较对照组明显延长 ( 2 6 6± 6 9)dvs ( 8 1± 1 60 )d ,P <0 0 1。结论　高滴度CTLA 4Ig基因重组腺病毒可使在体肾脏中肾小管获得有效转染 ;该基因转染的肾脏移植后存活时间明显延长     

抗肾内动脉痉挛在肾移植术中供肾不明原因缺血时的应用

目的 探讨抗肾内动脉痉挛（IRAS）在肾移植术中供肾不明原因缺血时的应用价值。方法 回顾性分析抗IRAS在31例肾移植术中供肾不明原因缺血时应用的效果。结果 29例肾缺血完全消失,证实缺血由IRAS引起,术后肾功能完全恢复正常,其中23例已随访1年以上,移植肾1、2、3、4年有功能存活率分别为91.3%、78.3%、65.2%、65.2%;治疗无效无效切除肾脏2例,术后病理检查证实为超急性排斥。结论 在肾移植术中供肾出现不明原因缺血时采用抗IRAS措施,对其中的IRAS病例具有诊断和治疗的双重意义。     

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植肾存活的影响

目的:探讨共刺激阻断剂CTLA4Ig与雷帕霉素(Rapamycin,RPM)联合应用对大鼠移植肾存活的影响.方法:肾移植大鼠分为对照组、CTLA4Ig组、RPM组和CTLA4Ig RPM组,观察术后血肌酐和移植肾病理改变、移植肾存活时间.结果:与对照组相比,CTLA4Ig组、RPM组、CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间均显著延长(P＜0.01),其中,CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间最长(76.5±17.1d),术后15天、30天该组血肌酐浓度最低;术后30天,仍然存活的CTLA4Ig组移植肾显示较多淋巴细胞浸润,CTLA4Ig RPM组移植肾显示很少淋巴细胞浸润.结论:共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用可有效抑制排斥反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.     

白细胞介素10基因转染延长移植物存活的研究

目的　克隆大鼠白细胞介素 10 (IL - 10 )的cDNA序列并研究IL - 10基因转染对移植物的保护作用。方法　一步法从脂多糖 (LPS)刺激培养的脾细胞中提取细胞总RNA ,逆转录PCR(RT -PCR)克隆出IL - 10的cDNA。将IL - 10cDNA插入pcDNA3载体进行制备、纯化。建立大鼠异位心脏移植模型 ,在脂质体介导下将pcDNA-IL10重组体通过冠状动脉灌注转染移植心脏。观察移植心脏的存活时间 ,半定量RT -PCR法检测移植心脏IL- 10的转录水平 ,ELISA法检测IL - 10的表达水平。结果　大鼠IL - 10cDNA全长序列被成功克隆 ,序列测定证实与基因库报告的结果完全一致。基因转染的移植心脏平均存活时间明显延长 (17.8天vs 8.5天 ,P <0 .0 1) ;RT-PCR法在对照组未发现IL - 10转录 ,而在基因转染组有 3只移植心脏表现高水平转录 ;基因转染后 3天IL - 10的表达明显增加 (2 70 .8ng Lvs 3 1.5ng L ,P <0 .0 1) ,且移植心脏输出静脉血IL - 10高于外周静脉血 (2 70 .8ng Lvs 163 .5ng L)。结论　通过冠状动脉灌注能够进行基因转染 ,IL - 10基因转染可以延长移植心脏的存活时间