雌二醇对大鼠肝星状细胞TGF-β1、CTGF表达的影响

目的 探讨雌二醇对肝星状细胞(HSC)的影响及其可能的作用途径.方法 培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,加药后72小时,噻唑蓝(MTT)法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析其对HSC的转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α-SMA蛋白的表达的影响.结果 MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖;RT-PCR分析雌二醇干预组HSC TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的表达明显下降;免疫细胞化学分析雌二醇干预组HSC α-SMA蛋白表达明显下降;并且都随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性(P＜0.05).结论 雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为:①可以抑制HSC的增殖、活化;②抑制了致纤维化生长因子TGF-β1及其下游信号CTGFmRNA表达.     

血小板衍生生长因子体外对大鼠肝星状细胞表达细胞外基质的影响

目的研究体外大鼠肝星状细胞(HSC)中血小板衍生生长因子(PDGF)信号通路的激活对于HSC表达细胞外基质(ECM)的影响。方法分离、纯化大鼠原代HSC并体外培养;以MTT实验检测PDGF对HSC增殖的作用;以West-ern blot和Real-time PCR方法分别检测PDGF对PDGF-βR与CTGF、ECM成分α-SMA、α1(I)collagen和fibronectin,以及调控ECM降解平衡的MMP-2和TIMP-1表达的影响。结果 MTT实验结果表明PDGF以剂量依赖性和时间依赖性的方式促进HSC的增殖。PDGF可以促进其受体PDGF-βR和CTGF的蛋白与mRNA表达。PDGF还可明显上调ECM成分α-SMA、α1(I)collagen和fibronectin的表达。此外,PDGF影响ECM的降解平衡,表现为TIMP-1的表达上调,而MMP-2的表达下调。结论 PDGF/PDGF-βR信号转导途径可明显促进HSC活化与ECM生成,抑制ECM降解。所得结果可以为药物阻滞PDGF信号转导从而抑制肝纤维化提供依据。     

利福平对肝星状细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的探讨不同浓度的孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)诱导剂利福平对肝星状细胞LX2细胞增殖的影响及对TGF-β1/Smad4信号通路的影响。方法培养肝星状细胞LX2,给予不同浓度利福平终(浓度为10、20和40μmol/L)处理24 h,采用MTT比色法检测肝星状细胞LX2增殖。用实时定量PCR(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad4 mRNA的表达。结果不同浓度利福平能抑制肝星状细胞LX2增殖及TGF-β1及Smad4 mRNA的表达,呈剂量依赖性。结论 PXR诱导剂利福平可抑制肝星状细胞LX2增殖,抑制TGF-β1/Smad4信号通路,为PXR活化抗肝纤维化的作用机制之一。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化TGF-β1及 CTGF表达的影响

目的 研究荔枝核总黄酮（TFL）在胆总管结扎诱导的大鼠肝纤维化模型中的治疗效果及其作用机制.方法 雄性SD大鼠100只,随机分为假手术组、模型组、水飞蓟素（SIL）组、TFL大剂量组（200 mg·kg^-1·d^-1）和TFL小剂量组（100 mg·kg^-1·d^-1）.采用胆总管结扎制备肝纤维化大鼠模型.4周后处死大鼠,放射免疫法（RIA）检测大鼠血清中透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）及Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的水平;HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理改变;采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中结缔组织生长因子（CTGF）的水平;免疫组化检测CTGF 及转化生长因子β1（TGF-β1）在肝组织内的表达.结果 与模型组大鼠比较, SIL和TFL大剂量治疗后大鼠血清中HA、LN和PCⅢ的水平显著降低（P〈 0.01）;肝组织内纤维化程度降低,肝小叶结构趋于正常;TFL大剂量给药组和SIL组血清CTGF水平均显著低于模型组（P〈0.05）;2组大鼠肝组织CTGF及TGF-β1表达明显降低（P 〈 0.05）.结论 TFL能有效地减轻胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠的肝损伤及纤维化程度,其机制可能与抑制肝内CTGF 和TGF-β1 表达有关.     

甲基阿魏酸对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响

目的研究甲基阿魏酸对大鼠肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响。方法采用四甲基噻唑蓝法检测MFA对HSC的毒性;采用酶联免疫法法检测HSC上清液羟脯氨酸、金属蛋白酶组织抑制因子和透明质酸。结果 MFA可以抑制HSC的增殖,呈现剂量和时间依赖性;MFA各剂量组均可显著降低HSC细胞上清液HYP、HA、TIMP-1含量,呈现剂量依赖关系。结论 MFA通过抑制HSC的增殖,从而使ECM合成减少,肝纤维化减轻。     

丹参对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程,是所有慢性肝病共有的病理改变。目前认为肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节,其中以转化生长因子β(TGF-β)最为重要[1]。为此我们拟观察注射用丹参(冻干)对体外培养HSC增殖及TGF-β1表达的影响。     

γ-干扰素对肝星状细胞分泌细胞外基质影响的研究

目的通过观察IFN-γ对于体外培养的肝星状细胞（HSC）分泌细胞外基质的影响，探讨IFN-γ在治疗肝纤维化中的作用机制。方法采用体外培养大鼠肝星状细胞（rHSC-99），加入不同剂量的IFN-γ，并用放射免疫分析法测定分泌PCⅢ、LN、HA含量的改变。结果IFN－γ对rHSC－99细胞分泌PCⅢ、LN、HA的抑制作用随着用药剂量的增大而明显增强。随培养时间的延长，IFN-γ对rHSC-99细胞分泌PCⅢ、LN、HA的抑制作用逐渐增强。除HA外，IFN-γ的浓度和培养时间与rHSC-99细胞分泌PCⅢ、LN值均呈显著负相关。结论IFSI-γ对rHSC-99细胞分泌PCⅢ、LN、HA具有抑制作用，具有浓度—效应依赖关系、时间-效应依赖关系。     

BMP-7对TGF-β_1诱导人肾小管上皮细胞外基质表达的影响

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)成分表达的影响,以探讨其延缓肾间质纤维化病变的作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞分为空白对照组,3μg.L-1TGF-β1组,BMP-7组,TGF-β1加不同浓度BMP-7组。免疫荧光检测FN的表达;RT-PCR和Western blot分别检测FN、ColⅠα1mRNA及蛋白的表达。结果免疫荧光检测结果显示,3μg.L-1TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN表达明显增强;加入200μg.L-1BMP-7干预后荧光明显减弱。RT-PCR和Western blot结果显示,TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN、ColⅠα1mRNA及蛋白表达均明显高于对照组(P<0.01);BMP-7(100～400μg.L-1)可在mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下调TGF-β1诱导的FN、ColⅠα1的表达。结论BMP-7能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞FN、ColⅠα1的合成。表明BMP-7抑制肾小管间质纤维化的进展、改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

乌索酸对人肝星状细胞凋亡及TGFβ_1 mRNA表达的影响

肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是肝纤维化形成的主要效应细胞,TGFβ_1是目前已知最重要的致肝纤维化细胞因子之一~([1]).因此,降低TGFβ_1表达,抑制HSC增殖,诱导其凋亡是治疗肝纤维化的重要策略~([2,3]).国内外研究资料显示乌索酸具有护肝作用~([4～7]),本研究拟观察乌索酸对人HSC凋亡及TGFβ_1 mRNA表达的影响,以探索其在抗肝纤维化方面的作用.     

银杏叶提取物对糖尿病模型大鼠肾脏ET-1、TGF-β_1的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对糖尿病模型大鼠肾组织中内皮素-1(ET-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平变化的影响。方法:SD大鼠24只随机分为3组,即正常对照、糖尿病模型和EGb组,经相应处理后8周,观察大鼠血糖、胰岛素、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肌酐清除率(Ccr)、尿白蛋白排泄率(UAE)、尿β2微球蛋白排泄率(β2-MG)等水平变化;以放射免疫法检测血浆、尿液及肾组织中ET-1水平;以ELISA法检测血清、尿液中TGF-β1水平。结果:糖尿病大鼠的血糖、胰岛素、TC和TG升高;经EGb治疗后,血糖、血胰岛素、TC和TG显著降低。糖尿病模型组血、尿中ET-1、TGF-β1及肾组织中ET-1水平均显著高于正常对照组;EGb可显著降低血、尿中ET-1、TGF-β1和肾组织中ET-1水平及Ccr、UAE、β2-MG。结论:EGb对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,而抑制糖尿病大鼠ET-1、TGF-β1水平可能是其重要作用机制。     

枇杷叶熊果酸对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPAR-γ、TGF-β1表达的影响

目的研究枇杷叶熊果酸对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用及对PPAR-γ、TGF-β1表达的影响,探讨枇杷叶熊果酸抗肝纤维化的可能作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,随机分为空白组,罗格列酮对照组,枇杷叶熊果酸低、中、高浓度组,分别干预24、48、72 h后,运用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;ELISA法检测各组细胞培养上清液中的Ⅰ型胶原蛋白含量;Real-time PCR法检测各组PPAR-γ、TGF-β1 mRNA的表达;免疫细胞化学法检测各组PPAR-γ、TGF-β1蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,随着熊果酸作用时间的延长,药物对细胞的增殖的抑制率增高(P<0.01);ELISA结果显示,随着熊果酸药物浓度的增加,上清中的Ⅰ型胶原蛋白含量下降(P<0.01);Real-time PCR结果显示,随着熊果酸药物浓度增加,PPAR-γmRNA的表达量增加,TGF-β1 mRNA的表达量下降(P<0.01);免疫细胞化学结果显示,随着熊果酸药物浓度增加,PPAR-γ蛋白的表达增强,TGF-β1蛋白的表达减弱(P<0.01)。以上作用具有剂量-效应关系,高浓度组作用较对照组强。结论枇杷叶熊果酸能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与上调PPAR-γ表达,下调TGF-β1表达有关。     

化淤软肝胶囊的抗纤维化作用及对TGF-β1表达的影响

目的 研究化淤软肝胶囊对四氯化碳致肝纤维化大鼠的抗肝纤维化作用及对肝组织中TGF-β1表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、化淤软肝胶囊组(高、中、低剂量组)、秋水仙碱组,除正常组外,采用多因素方法建立四氯化碳致肝纤维化大鼠模型.连续给药4周后,检测各组大鼠血清的肝功能和肝纤维化指标,HE染色观察肝组织病...     

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的:研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果:鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论:鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

表皮生长因子对肝星状细胞c-fos基因表达的影响

目的 了解表皮生长因子(EGF)对肝星状细胞c-fos基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的EGF(终浓度20ng/ml、100ng/ml、500ng/ml),于8h、24h、48h、72h四个时间点分别收集细胞,提取肝星状细胞总RNA;用逆转录定量PCR方法测定c-fos基因的表达水平.结果 EGF三组HSC-T6细胞c-fos基因表达水平在8h、24h、48h、72h四个时间点均显著高于对照组;随剂量加大,HSC-T6细胞c-fos基因表达水平逐渐升高,三组间也有显著差异.结论 表皮生长因子对肝星状细胞c-fos基因表达有明显的上调作用.     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

TGFβ1刺激肝星状细胞的活化与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是各种原因所致的肝损伤的组织学变化,是一种在损害因子持续作用下渐进的病理过程,以细胞外基质(ECM)异常增多过度沉积为病理特征,同时也是进一步向肝硬化,肝癌发展的中间环节.     

银杏叶提取物对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响。方法大鼠气管内一次性滴注博来霉素制备肺纤维化模型,原代培养大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组、GBE 25,50,100 mg/L组,共培养24 h,采用免疫细胞化学法和流式细胞技术检测GBE对各组细胞表达CTGF和α-SMA的影响。结果与对照组比较,50,100 mg/L组细胞表达CTGF和α-SMA依次降低,各组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取物能部分抑制大鼠肺成纤维细胞的表型转化。     

TGF-β_1对肝星状细胞IGFBPrP1及胶原纤维表达的影响及意义

目的研究转化生长因子(TGF)-β1对肝星状细胞(HSC)中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)及胶原纤维表达的影响及意义。方法①将TGF-β1作用于体外培养的HSC-T624h,采用Westernblot法检测HSC-T6胞质蛋白中IGFBPrP1和培养上清液中Ⅰ型胶原的表达,并进行IGFBPrP1与Ⅰ型胶原的相关性分析;②应用IGFBPrP1处理HSC-T648h,采用Westernblot法检测上清中Ⅰ型胶原的表达。结果①与正常对照组相比,TGF-β1处理组IGFBPrP1和Ⅰ型胶原的表达明显增加(P<0.05),且IGFBPrP1的表达与Ⅰ型胶原的表达呈正相关(P<0.05);②IGFBPrP1处理组Ⅰ型胶原的表达较正常对照组明显增高(P<0.01)。结论 TGF-β1可引起HSC-T6过表达IGFBPrP1;IGFBPrP1可使HSC-T6胶原纤维含量增多。表明IGFBPrP1具有促肝纤维化的作用。     

白花丹醌对瘦素刺激人肝星状细胞转化生长因子-β_1表达的影响

目的研究白花丹醌对瘦素刺激体外培养人HSC-LX2TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HSC-LX2,瘦素(leptin)刺激24h,各药物与细胞共孵育24h后,采用荧光PCR检测各组TGF-β1 mRNA的表达和免疫组织化学方法检测TGF-β1蛋白表达情况。结果与leptin组比较,白花丹醌各剂量组作用24h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1 mRNA的水平明显降低,尤以中、高剂量组明显(P<0.01);免疫组化结果显示白花丹醌各剂量组对HSC-LX2细胞TGF-β1蛋白表达有一定的抑制作用,且作用呈剂量依赖性。结论白花丹醌抗肝纤维化作用机制之一是从mRNA和蛋白水平抑制TGF-β1表达,从而抑制HSCECM的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

银杏叶提取物治疗慢性乙型肝炎肝纤维化病人32例

目的：探讨银杏叶提取物(GbE761)对慢性乙型肝炎病人肝组织纤维化的影响。方法：将60例慢性乙型肝炎病人分为GbE761治疗组32例,年龄(34±s 13)a,16～55 a及对照组28例,年龄(34±14)a,17～57a,对照组给予常规治疗,治疗组给予常规治疗加GbE761 20 mL,静脉滴注,每日1次,共4 wk,治疗前后分别检测肝功能、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)。治疗组中5例分别于治疗前后进行肝活检术并行病理组织学检查。结果：治疗后2组的肝功能水平均较治疗前显著好转,但2组比较无差异(P>0．05)。治疗组治疗后PCⅢ,CⅣ,HA,LN及TGF-β_1水平分别下降(139±65)μg·L~(-1),(90±41)μg·L~(-1),(84±51)μg·L~(-1),(93±33)μg·L~(-1),(27±7)μg·L~(-1)(P<0．01),而对照组PCⅢ,CⅣ,HA,LN及TGF-β_1水平无明显变化(P>0．05)。治疗组5例肝活检证实,治疗后肝脏纤维化程度减轻,细胞损伤减轻。结论：GbE761对慢性乙型肝炎有显著的抗肝纤维化作用。