TGF-β_1对肝星状细胞IGFBPrP1及胶原纤维表达的影响及意义

目的研究转化生长因子(TGF)-β1对肝星状细胞(HSC)中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)及胶原纤维表达的影响及意义。方法①将TGF-β1作用于体外培养的HSC-T624h,采用Westernblot法检测HSC-T6胞质蛋白中IGFBPrP1和培养上清液中Ⅰ型胶原的表达,并进行IGFBPrP1与Ⅰ型胶原的相关性分析;②应用IGFBPrP1处理HSC-T648h,采用Westernblot法检测上清中Ⅰ型胶原的表达。结果①与正常对照组相比,TGF-β1处理组IGFBPrP1和Ⅰ型胶原的表达明显增加(P<0.05),且IGFBPrP1的表达与Ⅰ型胶原的表达呈正相关(P<0.05);②IGFBPrP1处理组Ⅰ型胶原的表达较正常对照组明显增高(P<0.01)。结论 TGF-β1可引起HSC-T6过表达IGFBPrP1;IGFBPrP1可使HSC-T6胶原纤维含量增多。表明IGFBPrP1具有促肝纤维化的作用。     

苦参碱体内外抗大鼠肝纤维化的作用(英文)

目的:研究体外苦参碱对HSC-T6大鼠储脂细胞和NIH3T3成纤维细胞增殖和胶原合成的影响,以及体内对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]脯氨酸掺入法。肝纤维化评价以血清透明质酸和肝中羟脯氨酸含量为指标。结果:苦参碱(1～2mmol·L~(-1))显著减少血清刺激的HSC-T6细胞以及NIH3T3细胞增殖和胶原合成;苦参碱(0.25～2mmol·L~(-1))浓度依赖地抑制血小板源生长因子(PDGF)促HSC-T6细胞增殖以及抑制转化生长因子β_1(TGF-β_1)促胶原合成的作用。体内苦参碱(50,100mg·kg~(-1))均能显著降低血清透明质酸和肝脏羟脯氨酸水平。结论:苦参碱阻断PDG和TGF-β_1的作用,抑制储脂细胞增殖和胶原合成可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原的机制

目的对阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原的机制进行探讨。方法³H-脯氨酸参入法检测胶原合成，ELISA方法检测阿魏酸钠对转化生长因子β₁(TGFβ₁)分泌的影响，Mv1Lu细胞增殖抑制实验考察阿魏酸钠对TGFβ₁活性的影响。结果阿魏酸钠对TGFβ₁处理条件下HSC-T6细胞中胶原的合成有抑制作用；能够降低HSC-T6细胞在氧化应激状态下TGFβ₁的表达水平；对TGFβ₁的活性有影响。结论阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原与其干预TGFβ₁活性，减少氧化应激状态下HSC-T6细胞分泌TGFβ₁的作用有关。     

复方中药对肝星状细胞胶原合成与降解的影响

目的观察中药复方丹参对肝星状细胞胶原合成与降解的影响.方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法观察药物对细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液Ⅰ、Ⅲ、V型胶原含量,RNA-cDNA分子杂交检测细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平.逆转录多聚酶链反应检测间质胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平.结果中药复方丹参明显抑制肝星状细胞增殖且呈剂量依赖趋势,与对照组比较,中药组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低,细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平明显降低,间质胶原酶基因表达水平明显增强,金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显受到抑制(P＜0.01).结论中药复方丹参可能通过抑制肝星状细胞的增殖,抑制胶原的异常合成,促进异常沉积胶原的降解,从而起到抗肝纤维化的作用.     

银杏叶提取物对TGF-β1诱导的人Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响及其机制的初步探讨

目的:观察银杏叶提取物(GBE)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon's囊成纤维细胞(H TCFs)增殖的影响及可能机制.方法:体外培养HTCFs及鉴定;MTT法检测不同浓度的GBE(25、50、100、200 mg/L)对TGF-β1(2 ng/mL)诱导的HTCFs增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达的情况.RT-PCR检测细胞结缔组织生长因子mRNA(CTGF mRNA)的表达.结果:TGF-β1可显著促进HTCFs的增殖,促进细胞由G0/G1期进入S期,上调α-SMA、CTGF在蛋白和mRNA水平的表达;GBE能够抑制TGF-β1的上述作用.结论:GBE具有抑制TGF-β1诱导的人Tenon's囊成纤维细胞增殖的作用,其机制可能是阻止细胞进入S期,下调α-SMA及CTGF的表达.     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨α-肾上腺素激动剂去甲肾上腺素和拮抗剂酚妥拉明对体外活化的肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法：体外对HSC-T6进行复苏和培养传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法检测HSC-T6培养上清液中透明质酸(HA)和III型前胶原（PCIII）的浓度;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属酶-13(MMP-13)蛋白的表达。结果：在体外培养的活化HSC-T6中,去甲肾上腺素（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能促进细胞增殖,升高分泌HA和PCIII水平,增强TIMP-1蛋白的阳性表达并降低其凋亡率;酚妥拉明（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能抑制细胞增殖,促进MMP-13的阳性表达并增加HSC-T6的凋亡率。结论：去甲肾上腺素具有促进肝纤维化的作用,酚妥拉明则具有抗纤维化的作用,该作用与其对HSC-T6增殖、凋亡及HA和PCIII分泌水平调控有关。     

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的:研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果:鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论:鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

桂郁金对肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨桂郁金对肝纤维化的作用机制。方法:用血小板衍生生长因子(PDGF)诱导肝星状细胞HSC-T6活化,随后采用桂郁金醇提取物进行干预;采用ELISA法测定细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的含量,采用半定量RT-PCR法检测细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 m RNA的表达水平。结果:与空白组相比,模型组中上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的含量明显增高(P0.01),TGF-β1、Smad2、Smad3 m RNA的表达均呈现显著增高(P0.01);与模型组相比,桂郁金醇提取物低浓度组、高浓度组上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量均有所下降(P0.05),TGF-β1 m RNA的表达水平存在差异(P0.05),Smad3 m RNA的表达水平在高浓度组中存在差异(P0.05)。结论:桂郁金可能通过抑制TGF-β1/Smad信号通络,起到抗肝纤维化的作用。     

金雀异黄素和槲皮素对大鼠肝星状细胞增殖、胶原合成及Ⅰ型原胶原nRNA水平的影响(英文)

目的:研究金雀异黄素和槲皮素对HSC-T6大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成及Ⅰ型原胶原mRNA表达的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]-脯氨酸掺入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果:金雀异黄素(25-70μmol/L)和槲皮素(6.25-50μmol/L)浓度依赖抑制HSC-T6细胞增殖和胶原合成,对Ⅰ型原胶原mRNA表达也有抑制作用。结论:金雀异黄素和槲皮素抑制肝星状细胞增殖和胶原合成可能对肝纤维化有保护作用。     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

氟伐他汀对转化生长因子β_1诱导的系膜细胞结缔组织生长因子和Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨氟伐他汀对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的影响。方法选择对数生长期的MCs,分成对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1加不同浓度氟伐他汀(Flu)诱导组,采用MTT法检测MCs增殖,RT-PCR和Westernblot方法检测MCsCTGF表达,ELISA法检测ColⅣ表达。结果5μg.L-1TGF-β1能明显促进MCs的增殖及CTGF和ColⅣ的表达。Flu可呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导下的系膜细胞增殖和CTGF及ColⅣ的表达:1μmol.L-1Flu即能明显抑制MCs的增殖及CTGFmRNA和ColⅣ蛋白的表达,10μmol.L-1Flu即能明显抑制MCsCTGF蛋白的表达。同时,还观察到外源性CTGF呈浓度依赖性地促进MCsColⅣ的表达,2.5μg.L-1CTGF即可明显促进ColⅣ蛋白的表达。结论氟伐他汀可抑制MCs增殖和CTGF介导的ColⅣ表达。     

肝星状细胞HSC-T6体外肝纤维化模型的建立

目的:研究以肝星状细胞HSC-T6为靶细胞,建立体外肝纤维化模型.方法:小鼠腹腔巨噬细胞先后用卡西霉素和脂多糖刺激培养24h制备巨噬细胞条件培养基.肝星状细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和3H-脯氨酸掺入法测定.结果:血清和巨噬细胞条件培养基可显著促进HSC-T6细胞增殖与胶原合成.IL-1、TNF、EGF、FGF和PDGF均可促进HSC-T6细胞增殖,其中PDGF的促增殖能力最强.TGFβ1可剂量依赖地促进HSC-T6细胞胶原的合成.结论:用血清、巨噬细胞条件培养基、PDGF或TGFβ刺激HSC-T6细胞增殖和胶原合成作为体外肝纤维化模型是可行的.     

美洲大蠊浸膏对大鼠HSC和SEC增殖及细胞外基质分泌的影响

目的探究美洲大蠊浸膏(APE)对体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)和肝窦内皮细胞(SEC)增殖及分泌细胞外基质的影响。方法用稀释不同倍数的美洲大蠊浸膏干预大鼠肝星状细胞株(HSCT6)和肝窦内皮细胞(SEC)。M TT法测定HSC-T6和SEC的增殖情况;ELISA测定药物干预后细胞培养上清液中α-SMA、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)的含量。结果美洲大蠊浸膏叮抑制HSC-T6和SEC的增殖,并在一定范围内呈剂量效应关系。美洲大蠊浸膏组细胞上清中α-SMA、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)的含量低于对照组。结论美洲大蠊浸膏可抑制HSC-T6和SEC增殖,并不同程度抑制α-SMA、Ⅳ-C和LN的分泌,有可能成为防治肝纤维化的临床用药。     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H 脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT PCR法测定。结果　染料木素 (2 5 - 70 μmol·L- 1 )和槲皮素 (6 2 5- 5 0 μmol·L- 1 )浓度依赖抑制PDGF促HSC T6细胞增殖和TGFβ1 刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论　染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ1 对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的 研究染料木素和槲皮素对体外肝纤维化的保护作用。方法 细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H-脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果 染料木素(25 ~ 70 mmolL-1)和槲皮素(6.25 ~ 50 mmolL-1)浓度依赖抑制PDGF促HSC-T6细胞增殖和TGFb1刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论 染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFb1对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用。     

化浊解毒方含药血清对HSC-T6增殖、凋亡及PPARγmRNA表达的影响

目的:研究化浊解毒方含药血清对体外培养的大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及细胞外基质和PPARγmRNA表达的影响,以探讨化浊解毒方治疗肝纤维化的机制。方法:选择健康SD大鼠,每天灌服不同剂量(每L分别含有生药30,60,120 g)的化浊解毒方以及α干扰素(1 000 U.mL-1),按1 mL.(100 g)-1大鼠体质量给药,以制备含药血清;常规培养活化的肝星状细胞(HSC-T6),用不同浓度的含药血清进行干预,用MTT法检测HSC增殖、流式细胞术测HSC凋亡,ELISA法及RT-PCR法分别测细胞上清液中I型及Ⅲ型胶原的含量以及细胞中PPARγmRNA基因的表达。结果:与正常血清组比较,化浊解毒方药含药血清各浓度组均呈现出抑制HSC增殖的作用(P<0.05),以作用48 h最为明显,且呈剂量和时间依赖性。与正常血清对照组比较,化浊解毒方药含药血清各个浓度组在作用48 h后,细胞上清液中的I型及Ⅲ型胶原的含量均降低(P<0.05),并上调PPARγmRNA的表达(P<0.05)。结论:化浊解毒方药能有效治疗肝纤维化可能通过上调PPARγ的表达起到抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡,降低肝星状细胞活性有关。     

翠云草提取物调控miR-145对肝星状细胞增殖、凋亡的影响

摘要：目的:探讨翠云草提取物对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:分别用12.5,25.0,50.0μg·ml-1翠云草提取物处理肝星状细胞HSC-T6,分别记为翠云草提取物低、中、高浓度组;未经任何处理的细胞作为对照组。将miR-145转染至HSC-T6细胞中,记为miR-145组;将miR-145转染至HSC-T6细胞后再用50.0μg·ml-1翠云草提取物处理,记为翠云草提取物+miR-145组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-145表达水平。结果:与对照组比较,翠云草提取物中、高浓度组肝星状细胞的吸光度（A）值、克隆形成数、Ki67表达水平显著降低,细胞凋亡率、caspase-3和miR-145表达水平显著升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。过表达miR-145可抑制肝星状细胞HSC-T6增殖,促进细胞凋亡,且miR-145增强了翠云草提取物对肝星状细胞增殖、凋亡的影响。结论:翠云草提取物可通过上调miR-145抑制肝星状细胞增殖、促进细胞凋亡。     

雌二醇对大鼠肝星状细胞TGF-β1、CTGF表达的影响

目的 探讨雌二醇对肝星状细胞(HSC)的影响及其可能的作用途径.方法 培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,加药后72小时,噻唑蓝(MTT)法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析其对HSC的转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α-SMA蛋白的表达的影响.结果 MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖;RT-PCR分析雌二醇干预组HSC TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的表达明显下降;免疫细胞化学分析雌二醇干预组HSC α-SMA蛋白表达明显下降;并且都随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性(P＜0.05).结论 雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为:①可以抑制HSC的增殖、活化;②抑制了致纤维化生长因子TGF-β1及其下游信号CTGFmRNA表达.     

大黄素抗肝纤维化的细胞学研究

目的 研究大黄素对大鼠肝星状细胞(HSC)T6增殖和细胞外基质合成的影响.方法 应州肝星状细胞株HSC-T6,观察各组细胞在不同浓度大黄素干预后在增殖程度和细胞周期等的变化.通过测定培养液上清中透明质酸(HA)和层黏蛋白(LN)的含量,采用3H-脯氨酸掺入法研究大黄素对HSC胶原合成的影响.结果 5～15 mg/L浓度大黄素能够抑制HSC-T6细胞的增殖.显著降低HA的表达以及胶原合成,这种效应具有浓度依赖性.流式细胞仪检测发现,大黄素能够对细胞的细胞周期产生浓度依赖性阻滞作用,G0/G1期细胞比例则逐渐上升.结论 大黄素在体外对于大鼠肝星状细胞HSC-T6的增殖和细胞外基质合成均具有明显的抑制作用,可能是其抗肝纤维化的机制之一.