检测病毒性肝炎患者血清中SEN病毒及其临床意义

目的：检测病毒性肝炎患者血清中SEN病毒D和H(SENV-D、SENV-H),并探讨其临床意义。方法：采用巢式聚合酶链反应法（nPCR）检测甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲－戊型肝炎患者血清中SENV-D和SENV-H DNA。结果：在180例病毒性肝炎患者血清中，SENV-D和SENV-H检出率分别为17.2%(31/180)和5.6%(10/180)，总检出率为18.3%(33/180)、甲、乙、丙、戊型肝炎患者的SENV-D/H检出率高于非甲－戊型肝炎患者。从甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲－戊型肝炎患者分离的SENV-D/H核苷酸序列，与SENV-D/H原型株比较，其同源性在94％以上。甲、乙、丙和戊型肝炎患者有无SENV-D/H合并感染，其血清生化学指标无明显差异。结论：SENV-D/H可能不是非甲-戊型肝炎的病原，甲、乙、丙和戊型肝炎患者合并感染SENV-D/H并不加重病情。     

SEN病毒D亚型中国株流行病学及序列变异

目的 了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法 分析已知的基因序列设计引物，建立半套式PCR检测方法，对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-D亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果 无偿献血者中SENV-D亚型感染率为45％，在non-A-E肝炎患者中SENV-D亚型感染率为48％，两者间差异无显著性；但在无偿献血者中SENV-D亚型的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明，各测序株均与已知的SENV-D株序列有很高的同源性，并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论 建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测；SENV-D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-D株序列之间有变异。与无偿献血者相比，non-A-E肝炎患者血清SENV-D株无进化上的显著倾向性。在测序的部分ORFl序列中存在一个核苷酸高变区。     

SEN病毒研究概况

20 0 0年意大利学者 Prim i等〔1〕从 1例感染 HIV的毒瘾者血清中分离到一株单链 DNA病毒 ,以该患者的姓名第一个字母命名为 SEN病毒 (SENV)。1　 SENV的命名SENV为无包膜的单链环状 DNA病毒〔2 ,3〕。该病毒有 8个成员 ,分别命名为 SENV- A～ H。对 8株 SENV、 6株TTV原型株、 7株 TTV变异株 (SANBAN、TUSO1、PMV和 4株 YONBAN)、TTV样微小病毒 (TL MV)及鸡白血病病毒 (CAV)的 ORFs全序列分析比较发现 ,SENV的 ORF1氨基酸残基为 6 4 2 - 76 2个 ,N末端富含精氨酸 /赖氨酸区相对保守 ,与 TTV原型株、SAN…     

SEN病毒的研究进展

新型肝炎病毒的发现和确定一直是肝炎研究的热点之一.新近发现的SEN病毒被认为是一种新的肝炎病毒,与输血后非甲～非戊型肝炎密切相关.本文就其病原学、检测方法、流行病学及与肝炎的相关性等作了综述.     

SEN病毒的研究进展

新型肝炎病毒的发现和确定一直是肝炎研究的热点之一。新近发现的SEN病毒被认为是一种新的肝炎病毒，与输血后非甲－非戊型肝炎密切相关。本文就其病原学、检测方法、流行病学及与肝炎的相关性等作了综述。     

丙型肝炎病毒核心抗原在静脉吸毒者血清中的检测

目的 调查丙型肝炎病毒核心抗原（HCVcAg）在静脉吸毒者血清中的检出状况。方法 对93例静脉吸毒者血清同时进行HCVcAg、HCV RNA定量、抗HCV IgG、HBsAg检测,分析HCVcAg检出率与HCV RNA定量及合并HBV感染之间的关系。结果 在93例静脉吸毒者中,抗HCV IgG阳性79例,HCV RNA阳性68例,HCVcAg阳性37例。以HCV RNA作比较,HCVcAg检测的特异性和敏感性分别是100％和54％;HCVcAg检出率与HCV RNA载量对数值呈正相关,r=0.958,P=0.010;HCV RNA阳性静脉吸毒者中,HBsAg阳性和HBsAg阴性时HCVcAg的检出率分别为38％和69％,两者比较P＜0.01;2例抗HCV IgG阴性、HCV RNA阳性静脉吸毒者,HCVcAg检测呈阳性。结论 HCVcAg在静脉吸毒者血清中检测其特异性好,而敏感性较差;HCVcAg的检出率与HCV RNA载量的对数呈正相关;在静脉吸毒者,合并HBV感染可能是血清HCVcAg检测的干扰因素,可能是HBV抑制了HCVcAg的表达。     

SEN病毒ORF2基因序列和抗原性的初步分析

目的对SEN病毒(SENV)开放阅读框(ORF)2基因进行序列测定分析和原核表达,并对表达蛋白进行抗原性分析。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增SENVORF2基因,对该基因进行序列测定、系统进化分析,双酶切扩增产物与原核表达载体pRSETB构建成重组质粒,诱导表达后进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果该株SENVORF2与北京株(AY072045)核苷酸同源性为97%,氨基酸同源性为59%;与日本株(AB059352)同源性分别为90%和56%。含有SENVORF2质粒的菌株表达相对分子质量约为19×103的融合蛋白,免疫印迹证明该融合蛋白能与SENVDNA阳性血清发生特异反应。结论表达了158个氨基酸的SENVORF2原核表达蛋白具有一定的抗原活性。     

海洛因静脉吸毒者HBV和HCV感染状况的调查

乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)在不同人群中的感染率不尽相同,国外报告证实静脉吸毒者是HBV和HCV的高危人群,国内个别地区也有报导,本文对94例海洛因静脉吸毒者进行了调查,现将结果报告如下:1 材料与方法1.1 对象 吸毒组:男性69例,女性25例,均为广州某戒毒所收客的吸毒者,年龄18～45岁,吸毒时间1个月至3年,均无肝炎病史,无乙肝疫苗免疫注射史,吸毒方式为静脉注射.对照组:男性62例,女性38例,均为广州医学院教职工,年龄在20～55岁.1.2 血清学检测方法 用ELISA法检测血清中的HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb及抗HCV,试剂购自上海科华实业生物技术有限公司.双份测定阳性的判为阳性,出现任何1项HBV感染指标即为HBV感染.     

人乳头瘤病毒基因型检测及其人群分布特征

目的 探讨河源地区女性感染人乳头瘤病毒（HPV）基因型分布,为预防HPV感染及临床诊治提供实验依据.方法 采用导流杂交技术对6745例宫颈脱落细胞标本行人乳头瘤病毒（HPV）分型检测.结果 检出HPV感染1 701例,总阳性率为25.20％,其中单一感染1 265例（74.40％）,多重感染436例（25.63％）,又以二重感染和单独高危型复合感染较为多见.六重感染和九重感染仅见于≤24岁年龄组,50岁以上年龄组均未见五重以上感染.HPV总阳性率、高危型HPV阳性率和低危型HPV阳性率均呈现“U”型特异性分布.受检21种亚型均被检出,常见的3种高危型为HPV52（25.69％）、HPV16（17.34％）和HPV58（15.52％）,2种低危型为HPV81 （8.23％）和HPV6 （6.94％）.各年龄组中最高感染率型别也有所差异.结论 河源地区受检女性HPV的感染率较高（25.20％）,多重感染者占25.63％.HPV总阳性率、高危型HPV阳性率和低危型HPV阳性率的年龄分布存在双峰现象,出现在≥60岁和≤24岁年龄组.最常见亚型是HPV52,不同年龄组HPV感染亚型分布略有不同.     

中国株庚型肝炎病毒C感染的检测及其部分核酸序列测定

中国株庚型肝炎病毒Ｃ感染的检测及其部分核酸序列测定国内首次采用合成肽抗原筛查高危人群血液中的庚型肝炎病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）抗体。单采浆站供血者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为０．４４％（１１／２５００）；非甲－戊型肝炎患者ＧＢＶ－Ｃ抗体阳性率为６．６７％（２／３...     

孕妇外周血中胎儿短串联重复序列基因型的检测

目的探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA进行遗传病产前基因诊断的可行性。方法应用9个具有高度多态性的短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点，以多重荧光PCR方法对10名健康孕妇孕早、中、晚期共30份血浆标本和非孕期血浆标本中DNA进行STR等位基因扩增。同时检测孕妇丈夫的外周血本，然后进行基因扫描及对照分析，判断胎儿父源性等位基因在孕妇血浆中的检出情况。结果10名孕妇均足月分娩，男婴3名，女婴7名。10名孕妇血浆中均检出胎儿父源性等位基因，即胎儿DNA。30份孕期血浆标本中有23份检出胎儿DNA，其中孕早期标本6份（6／10）；孕中期标本8份（8／10）；孕晚期标本9份（9／10）。7份标本未见到胎儿DNA。结论应用多重荧光PCR方法对孕妇血浆中DNA进行SFR多态化点的复合扩增，可获得男性和女性胎儿DNA信息，可用于无创伤性产前诊断。     

静脉吸毒者免疫球蛋白及补体水平的探讨

目的　了解静脉吸毒者血清的免疫球蛋白 (IgG、IgM、IgA)及补体 (C3、C4 )水平 .方法　采用免疫透射比浊法测定 5 0例静脉吸毒者和 40例健康对照组IgG、IgA和IgM及C3、C4 值作比较 .结果　吸毒组IgG(2 1.2 9±7.13g/L)、IgM(3.14± 1.35g/L)及补体C3(1.82± 0 .48g/L)、C4 (0 .5 1± 0 .12g/L) ,与对照组IgG(12 .82± 2 .17g/L)、IgM(1.81± 0 .70g/L)及补体C3(1.0 2± 0 .2 9g/L)、C4 (0 .32± 0 .0 84g/L)比较 ,极显著增高 (p <0 .0 1) ,并且吸毒组的IgA(2 .44± 0 .95g/L)比对照组IgA(2 .0 0± 0 .83g/L)显著增高 (p<0 .0 5 ) .结论　静脉吸毒者的体液免疫功能异常 ,与伴发感染有关 .     

TT病毒的检测及部分核苷酸序列比较

目的 为阐明ＴＴ病毒（ＴＴＶ）流行病学特征和基因级异质性以及血清学诊断试剂的研制提供资料。方法 从健康查体者的血清中提取ＤＮＡ，设计一套引物，采用套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｌ－ＰＣＲ）检测ＴＴＶ，对其中７例阳性标本进行了克隆测序，并与２株ＴＴＶ的核苷酸序列作了比较。结果 １１１例正常人中ＴＴＶ的感染率为１２．６％。７株中国株ＴＴＶ间的核苷酸同源性为９０．６％～９５．４％，与日本株ＴＸ０１１（Ｏ）     

应用非变性毛细管电泳检测乙肝病毒基因型B和基因型C

目的 建立非变性毛细管电泳分离乙肝病毒特异性巢式PCR产物方法,用于乙肝病毒B基因型和C基因型判断.方法 建立线性聚丙烯-聚乙二胺-TBE非变性毛细管电泳方法,分离母婴阻断失败患儿血清中乙肝病毒基因型特异性巢式PCR的扩增产物,采用表观分子量鉴定B、C基因型特异性和非特异性扩增产物.结果 毛细管电泳条件为30.2cm×50μm毛细管,分离缓冲液为2％(w/v)线性聚丙烯酰胺+0.4％(w/v)聚乙二醇+lxTBE缓冲液(pH8.3).在9kV电压下12分钟内可分离DNA分子量梯度标准品(50 bp至300 bp)及PCR扩增产物,表观分子量与电泳迁移时间的曲线适合度大于0.9999.B型扩增产物表观分子量范围为282bp至285bp,非特异性扩增产物为276bp至280bp.C型为ll9bp至120bp,当前扩增条件下不产生非特异性扩增产物.结论 非变性毛细管电泳能够方便和准确地判断非特异性的B型扩增产物.     

诺如病毒广州株全基因组序列测定及分析

目的 探讨广州地区儿童感染的诺如病毒基因组分子结构特点和基因组类型。方法 参考GenBank上的诺如病毒MD145-12基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增诺如病毒基因组，克隆于T载体上，测定序列，用Clustal W／X、DNAStar、RAT（recombination analysis tool）等软件分析基因组序列。结果 诺如病毒NVgz01全基因组为7558bp，提交到C,enBank上的序列号为DQ369797，3’端非编码区末端长45bp，病毒基因组有3个开放阅读框（ORF），ORF1长5100bp（5～5104nt），ORF2基因长1623bp，位于基因组中5085～6707nt之间，ORF3基因长807bp（6707～7513nt），其中ORF1、ORF2两基因有19个核苷酸的重叠区；NVgz01全基因组核苷酸序列与GenBank上诺如GI组Norwalk68、Southampto、BS5、Chiba、WUG1的同源相似性在43％～44％之间，与GⅡ组MD145、Farmington　Hills、B4S5、Hawaii、Lordsdale、SaitamaU1、Mc37同源相似性在76％～90％之间。NVgz01的ORF1与Mc37核苷酸序列同源性为94％，但ORF2与Mc37的同源性只有65％；NVgz01的ORF2与Fannillgton Hills（AY502023）同源性为最高（94％），ORF1的同源性为88％。结论广州地区儿童腹泻感染的诺如病毒NVgz01株全基因组序列为7558bp，GenBank序列号为DQ369797，NVgz01与诺如病毒的GⅡ组同源性较高，确认NVgz01株属于诺如病毒GⅡ组；根据ORF1、ORF2的同源性差异和RAT程序分析初步认为NVgz01可能是重组病毒。     

登革4型病毒包膜蛋白基因的克隆和部分核苷酸序列测定

利用反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术分离并克隆了登革４型０１株病毒的包膜蛋白（Ｅ）基因，并测定了部分核苷酸序列，发现该株与国外发表的一株相应区域核苷酸序列的同源性为９３．４％，由此推测出氨基酸序列的同源性为９２．１％。     

本溪地区乙肝患者病毒基因型分析

根据乙型肝炎病毒S基因序列的同源性可将该病毒分为A、B、C、D、E、F、G 7种基因型 ,各种基因型的分布与感染状况又表现不同的特点。我们对我国东北部重工业基地———本溪地区乙型肝炎患者病毒基因型进行了检测。标本来源于本溪市区及本溪县、桓仁县和南芬区、歪头山区自 2 0 0 1年 10月至 2 0 0 2年 8月就诊的肝炎患者 ,依据2 0 0 0年全国第十次病毒性肝炎与肝病会议 (西安 )修订的关于肝炎病毒诊断标准 ,并排除HAV、HCV、HDV、HEV和其它急慢性肝损害的 36 1份HBV阳性患者血清样本 (通过询诊排除接种乙肝疫苗 ) ,抽取 93名血样…     

吕梁地区宫颈病变患者人乳头状瘤病毒基因型的检测分析

目的调查吕梁地区21种人乳头状瘤病毒基因型的检测分析。方法收集568例女性宫颈病变患者宫颈分泌物中的脱落细胞,应用人乳头状瘤病毒导流杂交快速基因分型技术检测21种人乳头状瘤病毒亚型,包括13种高危亚型(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59和68型)、5种低危亚型(6,11,42,43和44型)和3种中国人群常见亚型(53,66和CP8304型);分析21种基因型的流行病学特征。结果人乳头状瘤病毒感染率41.9%,单一感染率58.4%,混合性感染率39.9%。21种基因型中,高危型以16,53型为主,其次是52,58型,低危型以6,11型为主;人乳头状瘤病毒16型的感染率居首位。结论本地区21种人乳头状瘤病毒基因型的检测分析资料对人乳头状瘤病毒疫苗研究、应用及其感染的防治有重要意义。     

慢性丙型肝炎患者肝免疫标志物和病毒基因型研究

目的研究慢性丙型肝炎患者肝免疫标志物和病毒基因型的关系。方法取28例HFE基因型患者的肝活检标本进行切片染色，并通过形态测定法分析CD8，主要组织相容性复合体-Ⅰ类（major histocompatibility complex class Ⅰ，MHC-Ⅰ），β2微球蛋白（β2 microglobulin，β2-mG），HFE和CD68。其中18例患者的治疗应答性资料有效。结果CD8^＋常聚集于肝汇管区和窦状隙，CD8^＋与MHC-Ⅰ阳性内样细胞相互作用。MHC-Ⅰ和β2-mG主要表达于内皮细胞和枯否细胞，而大多数HFE表达于圆形和树突状CD68^＋细胞。基因型为3a的丙型肝炎患者肝MHC-Ⅰ和HFE强表达，且对干扰素治疗持续应答率较高。结论慢性丙型肝炎患者MHC-Ⅰ的肝脏表达可能与病毒基因型相关。HCV 3a基因型上调MHC-Ⅰ和HFE的表达。