筋脉通对高糖培养雪旺细胞炎性因子及神经营养因子的影响

目的探讨中药筋脉通(JMT)对高糖条件下雪旺细胞(SCs)炎性因子及神经营养因子蛋白表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为3组,分别以筋脉通胶囊、神经妥乐平(Ntp)及等体积蒸馏水灌胃制备含药血清和正常大鼠血清;原代培养SCs,分为正常组、高糖组、JMT组和Ntp组,48 h后用CCK-8法检测各组SCs细胞增殖,免疫印迹法检测各组SCs细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、NGF及NT-3蛋白的表达,夹心法酶联免疫吸附法测定各组SCs上清液中IL-6、TNF-α、NGF的表达。结果与正常组比较,高糖组SCs增殖活性减低(P0.01),TNF-α蛋白表达上调、分泌量增加(P0.05),IL-1β、L-10蛋白表达上调(P0.05,P0.01),NGF的蛋白表达下调、分泌量减少(P0.05,P0.01),NT-3蛋白表达下调(P0.05)。与高糖组比较,JMT组细胞增殖活性提高(P0.01),TNF-α蛋白表达量及分泌量减少(P0.05),IL-1β、L-10蛋白表达量减少(P0.01),NGF蛋白表达量、分泌量及NT-3蛋白表达增加(P0.05);JMT组SCs细胞增殖活性提高,SCs中TNF-α表达及分泌受到抑制,IL-1β表达量减少,NGF蛋白表达增加,其作用优于Ntp组(P0.05,P0.01)。IL-6蛋白表达和分泌在各组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 JMT含药血清能够提高高糖培养SCs的增殖活性,降低TNF-α、IL-1β、L-10等炎性因子表达,抑制TNF-α分泌,提高NT-3表达,促进SCs分泌NGF,从而起到防治DPN的作用。     

补阳还五汤对LPS诱导巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路在补阳还五汤抗脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化与自噬中的作用。方法:细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选诱导RAW264.7巨噬细胞活力值的最适LPS浓度。在最适LPS浓度下,利用PI3K阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5 mmol·L~(-1)),Akt阻断剂MK2206(5μmol·L~(-1)),m TOR阻断剂Rapamycin(10μmol·L~(-1)),Beclin-1阻断剂Spautin-1(5μmol·L~(-1))及不同剂量的补阳还五汤含药血清(5%,10%,20%)处理RAW264.7巨噬细胞24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定磷酸化(p-)PI3K,p-Akt,p-mTOR通路蛋白的表达及微管轻链蛋白3(LC3),泛素结合蛋白1(p62),Beclin-1的水平。自噬双标腺病毒转染检测RAW264.7细胞自噬流的变化。结果:CCK-8结果显示10 mg·L~(-1)LPS作用时,细胞活性显著增强。模型组IL-1β,IL-6,TNF-α浓度显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著升高IL-6浓度,其他给药组均可降低IL-1β,IL-6,TNF-α的水平(P0.05,P0.01)。模型组p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量明显低于空白组(P0.05),LC3,p62蛋白表达量显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著降低p-Akt蛋白表达量,不影响p-mTOR表达,补阳还五汤各剂量组与其他各阻断剂组均可明显升高p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量(P0.05,P0.01),降低LC3,p62蛋白表达量(P0.05,P0.01),各组Beclin-1蛋白表达量均无显著性差异。与空白组比较,模型组中有明显的自噬体斑点形成,自噬流顺畅;与模型组比较,补阳还五汤含药血清组,3-MA,Spautin-1组自噬斑点的形成明显减少或消失,MK2202,Rapamycin组自噬体斑点大小明显减小,但自噬活力仍较强。结论:补阳还五汤抗LPS诱导巨噬细胞活化与自噬与抑制巨噬细胞炎症反应,调控PI3K/Akt/m TOR信号通路,抑制自噬的过度发生有关。     

金匮肾气汤对糖尿病肾病大鼠HMGB1和自噬信号Beclin1表达的影响

目的:探讨金匮肾气汤(JKSQ)对糖尿病肾病(DN)大鼠高迁移率族蛋白B(HMGB1)和自噬信号Beclin1表达的影响。方法:60只大鼠随机分为对照组、模型组和JKSQ高、中、低剂量组(3.6g/kg/d、1.8g/kg/d、0.9g/kg/d),各12只,均采用高脂饲料联合腹腔注射40mg/kg链脲佐菌素复制DN模型。药物干预3周后,测定空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和IL-1β水平;Western Blot测定HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、微管相关蛋白I轻链3-I(LC3-I)、LC3-Ⅱ、Beclin 1和p62蛋白表达。结果:与对照组比,模型组大鼠FBG、24h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6和IL-1β水平升高(P0.05),HMGB1、TLR4和p62蛋白表达升高(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达下降(P0.05);与模型组比,JKSQ高剂量组大鼠FBG、24h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6和IL-1β水平降低(P0.05),HMGB1、TLR4和p62蛋白表达下降(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达升高(P0.05)。结论:JKSQ可以抑制HMGB1蛋白表达,促进Beclin 1介导的自噬,减轻DN大鼠肾组织损伤。     

知母皂苷元通过AMPK-mTOR-ULK1途径抑制肾小球系膜基质合成和激活自噬治疗糖尿病肾病的研究

目的探究知母皂苷元基于AMPK-mTOR-ULK1途径对糖尿病肾病大鼠的干预作用。方法将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、知母皂苷元低剂量组、知母皂苷元高剂量组和二甲双胍组,每组8只。除对照组外,其余组采用高脂饲料饲喂联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病模型。知母皂苷元低、高剂量组大鼠分别灌胃20 mg/(kg·d)和60 mg/(kg·d)知母皂苷元,二甲双胍组灌胃500 mg/(kg·d)二甲双胍,其余组灌胃等量生理盐水,连续8周。检测各组大鼠血糖、24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐水平,HE染色和PAS染色观察大鼠肾脏病理组织学变化,检测肾组织中α-SMA表达情况和Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量,Western blot法检测肾组织中Beclin-1、LC3、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ULK1和p-ULK1表达量。结果与对照组比较,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐水平和肾重/体重均显著增高(P均<0.05);肾脏组织结构紊乱,肾小球基底膜增厚;肾小球体积、系膜基质面积、α-SMA阳性面积和Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量及p-mTOR/mTOR表达量均显著升高(P均<0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1表达量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,二甲双胍组大鼠血糖和知母皂苷元低剂量组、知母皂苷元高剂量组、二甲双胍组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐水平和肾重/体重均显著降低(P均<0.05);肾脏病理组织学变化得到明显改善;肾小球体积、系膜基质面积、α-SMA阳性面积和Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量及p-mTOR/mTOR表达量均显著降低(P均<0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1表达量均显著增高(P均<0.05)。结论知母皂苷元可通过AMPK-mTOR-ULK1途径抑制肾小球系膜基质合成和激活自噬改善大鼠糖尿病肾病。     

葛根素调节AMPK-mTOR信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的探讨葛根素通过腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)-Unc-51样激酶1(Ulk1)通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组及葛根素低、高剂量(50、100 mg/kg)组。各组大鼠连续给药7 d,末次给药30min后,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1.5 h再灌注24 h后,进行神经功能评分,TTC染色观察脑梗死体积,电镜观察自噬小体的形成,Western blotting法检测海马组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、AMPK、p-AMPK、m TOR、p-mTOR、Ulk1、p S757-Ulk1蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著增加,脑梗死体积明显增大,自噬小体增多,LC3-II/LC3-I显著增加,p62蛋白表达水平显著降低,p-AMPK表达水平显著升高,p-m TOR和p S757-Ulk1蛋白表达水平显著降低。与模型组比较,葛根素各组大鼠的神经功能损伤明显改善,脑梗死体积减小,自噬小体减少,LC3-II/LC3-I显著降低,p62蛋白表达水平显著升高,p-AMPK蛋白表达水平显著降低,p-m TOR和p S757-Ulk1蛋白表达水平显著升高。结论葛根素可能通过调控AMPK-m TOR-Ulk1信号通路抑制自噬的过度发生,从而减轻脑缺血再灌注损伤的发生。     

痰瘀同治方对缺氧复氧诱导心肌细胞AMPK-mTOR自噬信号通路的影响及机制

目的研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用。方法体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10 h后复氧2 h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各组给予相应方剂肠吸收液18 mg/m L孵育2 h后H/R处理。电镜下观察细胞自噬体结构,检测细胞上清液中LDH释放量和SOD活性,蛋白免疫印迹测定细胞内LC3、Beclin-1、P-AMPK和P-mTOR蛋白表达。结果心肌细胞缺氧复氧后自噬体形成并增多。与空白对照组比较,H/R模型组心肌细胞LDH含量、LC3及Beclin-1蛋白表达量增加,p-AMPK表达增强,SOD活性下降且p-mTOR表达减弱(P0.05,P0.01)。与H/R模型组比较,各中药组干预后均能降低LDH、Beclin-1表达,痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可同时提高SOD活性,抑制LC3高表达(P0.05,P0.01)。同时痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可下调p-AMPK水平,并上调p-mTOR蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论缺氧复氧可激活心肌细胞AMPK-mTOR信号通路,从而诱导自噬过度表达加重心肌损伤,痰瘀同治方可通过调控AMPK-mTOR信号通路、抑制自噬而起到心肌保护作用。     

定心方抑制PI3K/Akt通路减轻脂质运载蛋白-2诱导巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的：探讨定心方（DXR）含药血清对脂质运载蛋白-2(LCN2)诱导巨噬细胞炎症反应的保护作用及机制。方法：以LCN2作用RAW264.7巨噬细胞,分别加入空白血清、5%DXR含药血清、PI3K抑制剂LY294002及Akt抑制剂Triciribine,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞活力,ELISA法检测细胞培养液炎症标记物白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,Western blot检测巨噬细胞中IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达,透射电镜检测巨噬细胞自噬小体数量,免疫荧光标记自噬标记物LC3-II。结果：与LCN2组比较,DXR含药血清可显著减轻由LCN2诱导的巨噬细胞活力的下降,减少细胞培养液IL-6、TNF-α、hs-CRP水平,下调巨噬细胞中IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达,增加巨噬细胞自噬小体数量,增加自噬标记物LC3-II表达,均有统计学意义（P<0.05）。与DXR含药血清组比较,LY294002及Triciribine可进一步加强DXR含药血清功效（P<0.05）。结论：...     

当归芍药散通过PI3K/AKT信号通路抗血管性痴呆的作用机制

目的探讨当归芍药散(DSS)通过PI3K/AKT信号通路抗血管性痴呆(VD)的作用机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、阳性药组(尼莫地平组,9.45 mg·kg-1)及DSS高、中、低剂量组(6.4、3.2、1.6g·kg-1);采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型;大鼠按上述剂量灌胃给药,给药体积10mL·kg-1,空白组、假手术组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃1个月。采用Morris水迷宫实验检测VD大鼠的学习记忆能力;采用ELISA法检测海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)含量;采用WesternBlot法检测海马组织PI3K、AKT、p-AKT及LC3蛋白的表达;采用qPCR法检测海马组织PI3K、AKTmRNA的表达水平。结果与假手术组比较,模型组第1～4天的逃避潜伏期均明显延长,穿越平台的次数明显减少(P 0.01);海马组织中的TNF-α、NF-κB含量均显著增加(P 0.01),PI3K、AKT、pAKT蛋白表达量均显著降低(P 0.05,P 0.01),LC3-II/LC3-I值明显增高(P 0.01),PI3K、AKT mRNA表达水平均明显降低(P 0.01)。与模型组比较,DSS高、中剂量组第1～4天的逃避潜伏期均明显缩短,穿越平台的次数明显增加(P 0.05,P 0.01);DSS高剂量组的TNF-α、NF-κB含量均显著降低(P 0.05,P 0.01);DSS高剂量组的PI3K蛋白表达量显著升高(P 0.05),DSS高、中剂量组的AKT蛋白表达量显著升高(P 0.05),DSS高、中、低剂量组的p-AKT蛋白表达量均显著升高(P 0.05,P 0.01),DSS高、低剂量组的LC3-II/LC3-I值明显降低(P 0.01);DSS高、中剂量组的PI3K mRNA表达水平显著提高(P 0.05,P 0.01),DSS中剂量组的AKT mRNA表达水平显著提高(P 0.01)。结论 DSS能改善VD大鼠的学习记忆能力,可能通过PI3K/AKT信号通路发挥对VD的治疗作用。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血小鼠半暗带细胞自噬水平的影响

目的:观察补阳还五汤预处理对小鼠局灶性脑缺血后半暗带细胞自噬水平的影响,进一步探讨其神经保护的作用机制。方法:将80只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤+Rapamycin(Rapa)组、Rapa组及5%DMSO组,每组12只,分别给以Rapamycin腹腔注射诱导细胞自噬及补阳还五汤灌胃给药,预处理7d后采用大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法复制小鼠脑缺血模型,造模后3h运用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,计算相对梗死体积,HE染色观察半暗带组织病理形态变化,Western blot法检测自噬标记性蛋白LC3-II/LC3-I比值及P62蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组相对梗死体积增加(P0.05),半暗带组织形态出现缺血后病理改变,LC3-II/LC3-I比值增加(P0.05),P62蛋白则表达减少(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组相对梗死体积减少(P0.05),半暗带组织病理形态明显改善,LC3-II/LC3-I比值减少(P0.05),同时P62表达增加(P0.05),而Rapa组则与补阳还五汤组相反(均P0.05),5%DMSO组无显著差异(P均0.05);与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+Rapa组相对梗死体积增加(P0.05),半暗带组织病理形态恶化,LC3-II/LC3-I比值增加(P0.05),同时P62表达减少(P0.05)。结论:补阳还五汤可能通过抑制脑缺血后半暗带自噬水平,减轻局灶性脑缺血小鼠脑组织损伤,发挥神经保护作用。     

丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路影响并探讨其机制。方法 7日龄SD新生大鼠80只,随机平均分为5组,分别为假手术组、模型组及经丹参酮ⅡA处理的高剂量组(0.1 mg/g)、中剂量组(0.05 mg/g)、低剂量组(0.02 mg/g)。Rice法造模,透射电镜观察新生大鼠大脑皮质神经元变化情况,TTC染色检测脑梗死情况,蛋白免疫印迹检测脑组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR、p-S6蛋白表达情况。结果假手术组神经元结构正常,模型组中观察到皮质神经元中存在大量的自噬体和自噬溶酶体,其中泡状自噬体中包裹有可见的细胞质结构。相较于模型组,高剂量组、中剂量组、低剂量组中自噬体数量明显减少,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中幼鼠脑梗死面积显著增加(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中脑梗死面积显著减小,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著增高(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著降低,且呈剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著降低(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著增加,且呈剂量依赖性(P 0.05)。结论丹参酮ⅡA对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤大脑皮质神经元自噬具有显著的抑制作用,推测其机制可能为通过激活Akt-mTOR信号转导通路实现的。     

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠血清TNF-α和IL-6水平的影响

目的:观察阳和平喘颗粒对哮喘大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的影响。方法:将健康清洁级雄性SD大鼠50只,随机分成5组,每组10只,分别为正常组,模型组,阳和平喘颗粒低剂量组,阳和平喘颗粒高剂量组,地塞米松组。采取卵清蛋白致敏法,长期制敏并激发制备哮喘模型。正常和模型组给予生理盐水取代阳和平喘颗粒或地塞米松灌胃,以苏木精-伊红(HE)染色法制备标本,观察哮喘大鼠在肺组织形态学上的改变,再选用ELISA法检测血清TNF-α,IL-6水平。结果:通过光镜观察发现,与正常组比较,模型组肺组织病理学改变明显,TNF-α,IL-6水平显著升高(均P0.05),与模型组比较,阳和平喘颗粒低、高剂量组以及地塞米松组的哮喘大鼠气道管壁黏膜与其周围血管肺组织的炎性细胞浸润程度有所减轻,气道上皮细胞的增生情况显著减少,阳和平喘颗粒低、高剂量组与地塞米松组血清TNF-α和IL-6水平明显降低(P0.05),而3组间两两比较,IL-6有差异(P0.05)、TNF-α无差异(P0.05)。结论:阳和平喘颗粒能够下调哮喘大鼠血清TNF-α,IL-6的表达,可能为其抑制哮喘慢性炎症的作用机制之一。     

调气汤对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用和机制研究

目的:研究调气汤对类风湿性关节炎的治疗作用和机制。方法:体外培养胶原诱导型关节炎大鼠成纤维样滑膜(CIA-FLS)细胞，将细胞分为对照组、TNF-α组、调气汤40,50和60μg/mL组，TNF-α (10 ng/mL)处理细胞30 min,然后用调气汤处理细胞48 h。检测细胞活力、细胞凋亡和细胞中Atg5、Beclin-1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR的蛋白表达，以及细胞上清中TNF-α、IL-6、TGF-β、IL-17、IFN-γ和IL-10含量。SPF级SD大鼠(雄性，30只)随机分为对照组、模型组、低剂量组(25 mg/kg调气汤的佐剂诱导型关节炎(AIA)大鼠)、中剂量组(50 mg/kg调气汤的AIA大鼠)、高剂量组(100 mg/kg调气汤的AIA大鼠),建立胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型。采用苏木精-伊红染色观察AIA大鼠的组织病理变化，采用ELISA法测量大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量。结果:与TNF-α组比较，调气汤各剂量组细胞活力下降、细胞凋亡增加，且细胞中Atg5、Beclin-1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、PI3K、p...     

犀角地黄汤对脑缺血大鼠自噬相关蛋白表达的相关研究

目的探讨犀角地黄汤对内毒素诱导下持续性大脑中动脉栓塞模型(pMCAO)大鼠脑组织的自噬相关LC3-II蛋白的表达;以及透射电镜下观察双层膜的自噬体。方法造模后进行分组,并采用不同剂量犀角地黄汤进行干预,分别在透射电镜下观察自噬体;检测自噬体膜标志性蛋白质LC3-II的表达。结果模型组有明显的空泡现象出现,中等剂量的犀角地黄汤治疗组有明显空泡现象。造模后第3天和第6天,LC3-II蛋白表达增强,LC3-II/LC3-l比值增加(P0.05)。结论细胞质LC3-I脂质化形成LC3-Ⅱ。中高剂量组明显降低LC3-II蛋白含量,中剂量组效果更佳,能更好地抑制自噬相关蛋白的表达。     

针灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织自噬相关蛋白的影响

摘要：目的 观察针刺、艾灸对类风湿关节炎大鼠滑膜组织自噬相关蛋白表达的影响,探究针灸治疗RA的可能作用机制。方法 将50只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、针刺组、艾灸组，每组10只，将正常组以外的4组大鼠足跖底部注射0.1ml完全弗氏佐剂造模，阳性药组按照 0.1 mg/100 g 的剂量进行甲氨蝶呤灌胃，1 次/3d（每周2次）；针刺组针刺肾俞、足三里，每穴20分钟；艾灸组艾条温和悬灸针刺相同穴位，每穴20分钟；每组治疗21d；正常组和模型组不予治疗。分别在造模成功后、治疗结束后测量AI指数和足爪容积的指标， ELISA法检测大鼠血清TNF-α，IL-1β水平，Western blot法检测滑膜组织中LC3-II、Beclin-1蛋白表达。结果 造模后大鼠关节均明显肿胀，治疗后的大鼠关节肿胀度均有改善；与正常组比较，模型组LC3-II蛋白表达上升（P＜0.05）、Beclin1蛋白表达明显上升（P＜0.01），阳性药组和针刺组Beclin1蛋白表达上升显著（P＜0.01）；与模型组相比，针刺组LC3-II蛋白表达明显下降（P＜0.01）、Beclin1蛋白表达上升（P＜0.05），艾灸组LC3-II蛋白表达下降（P＜0.05）、Beclin1蛋白表达显著升高（P＜0.01）。结论 针刺、艾灸均对类风湿关节炎有治疗效果，其机制可能与抑制自噬相关蛋白LC3-II、Beclin1蛋白表达有关。     

骨疏颗粒对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及血清细胞因子的影响

目的观察骨疏颗粒对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及血清细胞因子的影响,探讨骨疏颗粒防治骨质疏松症的可能作用机制。方法将3月龄SD雌性大鼠40只,按随机数字表法分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组及骨疏颗粒组。空白组只行假手术,其余3组用去大鼠双侧卵巢复制绝经后骨质疏松症的模型。术后3天分别给戊酸雌二醇及骨疏颗粒灌胃,12周后检测血清白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α及左股骨骨密度。结果(1)与空白组比较,模型组骨密度显著下降,血清IL-1β及IL-6显著增加(P0.01),TNF-α增加(P0.05);(2)与模型组比较,戊酸雌二醇组骨密度显著增加(P0.01),血清IL-1β显著降低(P0.01),IL-6及TNF-α均降低(P0.05);骨疏颗粒组骨密度增加(P0.05),血清IL-1β、IL-6及TNF-α均降低(P0.05)。结论骨疏颗粒对去卵巢骨质疏松大鼠有治疗作用,其作用机制可能是通过降低血清中IL-1β、IL-6及TNF-α细胞因子水平,从而抑制骨吸收。     

活血消瘿方含药血清调控AMPK/mTOR通路对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨活血消瘿方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞(TFECs)自噬和凋亡的影响以及作用机制。方法 光学显微镜观察分离培养的SD大鼠TFECs细胞的形态;免疫荧光染色鉴定TFECs中特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)。取对数生长期的TFECs,分为对照组、LPS组、含药血清组、含药血清+compound C(AMPK抑制剂)组、含药血清+MHY1485(mTOR激活剂)组,MTT法检测各组细胞活力;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测各组细胞自噬小体变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡;western blot检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3II、Beclin1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达。结果 光学显微镜观察显示,TFECs形态为梭形、形态均一,且可成簇生长。免疫荧光结果显示,TFECs细胞质中可见较强的Tg荧光染色。与对照组比较,LPS组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著降低,炎性因子IL-6 、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著升高(P< 0.05);与LPS组比较,含药血清组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著升高,炎性因子IL-6 、 TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著降低(P< 0.05);与含药血清组比较,含药血清+compound C组、含药血清+MHY1485组TFECs中相应指标与上述趋势相反。结论 活血消瘿方含药血清对LPS诱导的TFECs自噬的促进作用及细胞凋亡的抑制作用可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

丹酚酸B对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用

目的:探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对脓毒症大鼠心肌损伤的作用及机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组(行盲肠结扎穿孔术复制脓毒症动物模型),Sal-B组低、中、高剂量组(在模型基础上,经尾静脉注射Sal-B 6,12,24 mg·kg~(-1))。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌坏死标志物和炎症因子,包括血清肌钙蛋白T(Tn T),肌酸激酶同工酶(CK-MB),心肌肌钙蛋白I(c Tn I)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-1β,IL-6水平;比色法检测心肌中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理变化;采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬微管相关蛋白轻链3(LC3),Beclin-1表达水平。结果:与假手术组比较,模型组Tn T,CK-MB和c Tn I水平显著升高(P 0. 01);心肌组织TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高(P 0. 01);心肌组织MDA含量显著升高(P 0. 01),SOD的活力显著降低(P 0. 01),TUNEL阳性心肌细胞比率显著升高(P 0. 01),Bax和Caspase-3蛋白表达水平升高,而Bcl-2表达显著降低(P 0. 01),自噬相关蛋白LC3,Beclin-1表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,Sal-B中、高剂量组Tn T,CK-MB和c Tn I水平均显著降低(P 0. 01),心肌组织TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低(P 0. 01),心肌组织MDA含量明显降低(P 0. 05,P 0. 01),同时,心肌组织SOD的活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01); TUNEL阳性心肌细胞比率明显降低(P 0. 05),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01);同时增强自噬反应,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加,Beclin-1表达水平明显上调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:Sal-B通过影响自噬蛋白,降低脓毒症大鼠心肌炎症反应和氧化应激,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻脓毒症大鼠心肌的损伤。     

基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及TNF-α、IL-6影响的实验研究

目的观察心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法将Apo E-/-小鼠按随机数字表法分成4组,予以高脂饲料喂养;野生型小鼠作为空白对照组,予以普通饲料喂养。将成模Apo E-/-小鼠随机分为模型组、心痛泰低剂量组、高剂量组和他汀组。分别予以生理盐水、心痛泰低、高剂量及阿托伐他汀钙片连续灌胃8周后,运用酶法检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),比色法检测低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C),ELISA法检测血清TNF-α、IL-6,免疫组化法观察TNF-α、IL-6。结果与空白组比较,模型组和心痛泰各组均能显著减少TC、TG、LDL-C(P0.05),增加HDL-C(P0.05)水平,控制TNF-α、IL-6浓度,下调TNF-α、IL-6的阳性表达,且心痛泰高剂量组、他汀组优于低剂量组(P0.05),但心痛泰颗粒高剂量组与他汀组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论心痛泰颗粒可调节血脂,控制炎症反应,调控TNF-α、IL-6的阳性表达,干预动脉内斑块形成,从而发挥防治AS的作用。     

自体角膜缘干细胞及羊膜对翼状胬肉TNF-α、IL-6表达的影响

目的 研究自体角膜缘干细胞及羊膜对翼状胬肉肿瘤坏死因子α (tumot necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin IL-6)表达的影响.方法 取门诊患者18例(18眼)翼状胬肉组织,随机分为3组(A组为单纯翼状胬肉组、B组为保存羊膜与翼状胬肉混合组、C组为自体角膜缘干细胞组织与翼状胬肉混合组),培养24小时后取各组翼状胬肉分别制备组织上清液.ELISA法检测TNF-α和IL-6含量.结果 与A组比较,B组的TNF-tx、IL-6含量均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);C组仅有TNF-α含量显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-6含量变化不明显,差异无统计学意义(P＜0.05).结论 保存羊膜可降低翼状胬肉TNF-α、IL-6的表达;自体角膜缘干细胞仅降低翼状胬肉TNF-α的表达.而对翼状胬肉IL-6的表达无影响.