丹溪痛风方对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响

目的探讨丹溪痛风方(DGP)对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响。方法胰腺癌BxPC-3细胞随机分成模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组(50μg/ml),DGP高、中、低剂量组(40,20,10μg/ml)。采用台盼蓝染色、MTT法、细胞划痕法分别检测胰腺癌BxPC-3细胞生长曲线、增殖抑制率、运动能力;采用免疫组织化学、RT-PCR法检测胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平。结果与模型组比较,5-FU组,DGP高、中剂量组胰腺癌BxPC-3细胞OD值明显降低(P0.05);运动能力明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1 mRNA水平明显降低(P0.05)。结论 DGP对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1具有抑制作用,可见DGP在胰腺癌治疗中扮演重要角色。     

半夏泻心汤调控Shh信号通路对BMSCs外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响

目的观察半夏泻心汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响,探讨其相关作用机制。方法利用Transwell小室将BMSCs外泌体与BGC-823细胞进行非接触共培养,实验分为空白组、模型组、阳性对照组和半夏泻心汤高、中、低剂量组,荧光染料Dil标记BMSCs外泌体,激光共聚焦显微镜观察BGC-823细胞对BMSCs外泌体的摄取,计算平均光密度(MOD);实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;RT-q PCR检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1及C-myc m RNA的表达。结果与空白组比较,模型组细胞内可见大量红色荧光标记,MOD值显著增加(P0.05);模型组20~50 h细胞指数(CI)显著增加(P0.05),G_1、G2期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著升高(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组红色荧光标记减弱,其中半夏泻心汤高、中剂量组MOD值明显减少(P0.05),半夏泻心汤各剂量组20~50hCI显著减少(P0.05),G_1、G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著降低(P0.05)。结论半夏泻心汤可抑制BMSCs外泌体诱导的BGC-823细胞增殖,其机制可能与下调Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达,抑制Shh信号通路有关。     

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜Sonic Hedgehog信号通路的影响

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9%氯化钠溶液,共10d。23周后将造模组随机均分为模型组,中药高、中、低剂量组,环耙明组。正常组、模型组灌服0.9%氯化钠溶液10mL/kg,中药高、中、低剂量组分别灌服38.4、19.2、9.6g/kg的益气活血方流浸膏,环耙明组腹腔注射0.2mg/kg环靶明,均每日1次,12周后HE染色观察胃黏膜组织病理学变化,免疫组化检测胃黏膜PCNA的表达,qRT-PCR法检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc mRNA的表达,Western Blot检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc、p-c-Myc蛋白表达。结果:与模型组比较,益气活血方高、中、低剂量组和环耙明组大鼠胃黏膜炎症及异型增生程度均显著减轻,PCNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Ptch1及SUFU mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Shh、Smo、Gli-1、CyclinD1及p-c-Myc蛋白的相对表达量显著降低而Ptch1及SUFU蛋白的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血方可能通过下调Shh信号通路的表达起到对胃癌前病变的防治作用。     

辽东楤木叶总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg)ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率,Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡,并观察凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡,且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性;ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高(P0.05,P0.01),且呈明显的量效关系。结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡,其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关。     

羟基红花黄色素A在结直肠癌发生发展中的影响及其机制

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其分子机制。方法采用HSYA低、中、高剂量作用于HT-29细胞,在24 h、48 h、72 h用MTT法检测细胞抑制率,Transwell实验分析HT-29细胞迁移和侵袭情况,流式细胞术分析HSYA对HT-29细胞凋亡及周期分布的影响;免疫印迹法(western blot)检测E-cad、Vi、FN、TGF-β、Smad2和α-SMA蛋白的表达水平。结果 HSYA作用于HT-29细胞后,HT-29细胞体外增殖均受到抑制(均P0.05),其抑制细胞增殖的效果与HSYA的浓度和作用时间有关。HSYA明显抑制HT-29细胞的侵袭和转移(均P0.05),同时HT-29细胞凋亡率也均增高(均P0.05),表现为G0/G1期细胞比例增加(均P0.05),S期细胞比例降低(均P0.05)。HSYA能够通过增加E-cad蛋白表达(均P0.05)和减少Vi和FN蛋白表达(均P0.05)抑制HT-29细胞上皮间质化(EMT)过程的影响。随着HSYA的浓度升高,TGF-β、Smad2和α-SMA蛋白表达均下降(均P0.05)。结论 HSYA能够抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移、EMT和促进结直肠癌细胞凋亡,其机制可能与抑制TGF-β信号通路激活有关,HSYA可能成为结直肠癌的治疗靶点。     

钩吻总碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化。结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L~(-1)钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17%。DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡。RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P0.05)。结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过Hedgehog信号诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡的机制研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌HCT-116细胞的抑制作用和机制。方法:MTT实验检测细胞活力,并计算表没食子儿茶素没食子酸酯的IC_(50)值,确定有效给药剂量。采用5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照药;EdU掺入法测定细胞增殖情况;JC-1染色测定线粒体膜电位;流式细胞术测定肿瘤细胞凋亡;RT-PCR法测定凋亡相关基因B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)mRNA表达;Western blot测定Smo、Gli-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和核凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达情况。结果:与模型对照组比较,32μmol/L和64μmol/L的表没食子儿茶素没食子酸酯显著抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖(P<0.01),诱导线粒体膜电位显著降低(P<0.01),显著诱导细胞凋亡(P<0.01)。与模型对照组比较,表没食子儿茶素没食子酸酯的应用在mRNA水平下调Bcl-2表达,上调Bax表达(P<0.01),在蛋白水平上调Caspase-3和AIF表达(P<0.01),下调Smo和Gli-1表达(P<0.01)。结论:表没食子儿茶素没食子酸酯抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能通过抑制Smo/Gli-1信号通路的表达实现。     

EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制。方法:采用不同浓度的EGCG干预人胃癌MGC-803细胞。MTT比色法观察EGCG对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;分光光度法检测细胞caspase-3活性;电泳法检测Smo、Gli-1蛋白表达;RT-PCR测定bcl-2,bax mRNA表达水平。结果:EGCG(10,20 mol/L)以剂量依赖性地抑制MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡,增加caspase-3活性,抑制Smo、Gli-1蛋白表达,上调bax mRNA表达水平的同时下调bcl-2 mRNA表达水平。结论:EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡。     

常绿钩吻碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨常绿钩吻碱促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:常绿钩吻碱体外培养HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察HT-29细胞的凋亡情况,蛋白印迹法(western-blot)观察HT-29细胞的B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:常绿钩吻碱可抑制HT-29细胞增殖,8μg/mL常绿钩吻碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达58.81%。DAPI染色法观察到常绿钩吻碱可促进HT-29细胞凋亡。western-blot法观察到常绿钩吻碱能降低HT-29细胞Bcl-2蛋白表达(P<0.05),对Bax蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:常绿钩吻碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bcl-2/Bax途径诱导细胞凋亡相关。     

冬虫夏草提取物对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨冬虫夏草提取物对结肠癌细胞株HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:利用不同浓度冬虫夏草提取物(0.5~6.5 mg/m L)作用HT-29细胞24、48和72 h,采用MTT、平板实验、流式细胞检测和WB检测冬虫夏草提取物对HT-29细胞生长增殖作用、细胞集落数的形成、对细胞凋亡率的影响以及对细胞凋亡相关分子Caspase-3蛋白表达的影响。结果:MTT结果表明,提取物能够显著抑制HT-29的生长增殖,呈一定的量时效关系,半数抑制浓度为3.5 mg/m L;流式细胞仪分析表明,冬虫夏草提取物呈浓度依赖性诱导HT-29细胞凋亡,浓度为6.5 mg/m L时,HT-29凋亡率(12.57±0.16)%;Western blotting表明,HT-29细胞与对照组相比,经不同浓度提取物诱导后,Caspase-3表达逐渐增强。结论:冬虫夏草提取物具有抑制HT-29细胞增殖作用,这可能与增加Caspase-3蛋白表达、诱导细胞调亡有关。     

夏枯草促人结肠癌细胞凋亡的实验观察

目的：观察夏枯草对人结肠癌细胞凋亡的影响。方法：以人结肠癌细胞（HT-29）为研究对象,观察不同浓度的夏枯草（0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml）对HT-29细胞的影响,采用MTT检测细胞增殖抑制率,分别应用RT-PCR、分光光度法检测Bcl-2、Bax基因表达和Caspase-3的活性。结果：与空白对照组（0mg/ml）比较,3个夏枯草药物组（0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml）对HT-29细胞均有抑制增殖和促进凋亡作用,且有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并呈现明显的时间、剂量依赖。结论：夏枯草对人结肠癌细胞（HT-29）有促进凋亡作用。     

白藜芦醇对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用研究

目的:观察白藜芦醇对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用。方法:使用不同浓度白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HT-29后,运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测白藜芦醇对HT-29细胞生长的影响,流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇对HT-29细胞凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性(P0.01)。FCM法检测结果提示,与阴性对照组比较,不同浓度的白藜芦醇可以提高HT-29细胞凋亡率(P0.05)。结论:白藜芦醇对人结肠癌HT-29细胞的增殖有抑制作用,且能诱导HT-29细胞凋亡,是一种高效低毒的药物,其具体机制有待进一步探讨。     

多烯紫杉醇对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响

目的 观察多烯紫杉醇对结肠癌 HT-29 细胞株增殖和bcl-2 和bax 表达的影响.方法 采用体外常规培养结肠癌HT-29 细胞,以不同浓度多烯紫杉醇干预24h,观察细胞形态变化;MTT 法测定不同浓度药物对HT-29 细胞增殖的影响;RT-PCR 检测药物作用后的bax 和bcl-2 的表达.结果 多烯紫杉醇作用后,细胞数量明显减少,细胞变小,细胞增殖受到抑制,并呈现出量-效作用;bcl-2 的表达随药物浓度增加而减少,bax 的表达随药物浓度增加而增加.结论 多烯紫杉醇能明显抑制结肠癌HT-29 细胞的增殖,通过下调bcl-2 和上调bax 的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29 细胞的作用.     

白花蛇舌草通过阻滞细胞周期抑制人结肠癌细胞的增殖

目的观察白花蛇舌草对人结肠癌细胞HT-29增殖及周期的影响,并初步探讨其可能的机制。方法分别采用不同浓度白花蛇舌草体外干预结肠癌HT-29细胞,MTT及集落形成实验观察该药对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测相关基因mRNA的表达。结果白花蛇舌草对结肠癌细胞HT-29有明显抑制作用,且具有一定的量-效关系;对细胞周期的影响主要是阻滞在G1/S期,S期的比例逐渐下降;RT-PCR结果显示周期相关基因CyclinE、CDK2及P27 mRNA的表达随着给药浓度的增加而降低。结论白花蛇舌草可通过调节结肠癌HT-29细胞周期相关基因的表达,阻滞结肠癌HT-29细胞的周期进程,抑制结肠癌细胞增殖。     

山慈菇提取物对结肠癌HT29细胞凋亡的影响

目的:研究山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法检测山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响。结果:不同浓度的山慈菇提取物对HT29细胞增殖均有抑制作用,且抑制率呈时间、剂量依赖关系;山慈菇提取物干预后诱导HT29细胞凋亡(P<0.01)差异有统计学意义;山慈菇提取物诱导细胞凋亡过程中的CytC、Bax、Caspase-3蛋白表达明显增强,Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论:山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞有明显的促凋亡作用,其机制可能与上调Cyt-C、Bax、Caspase-3下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

益气活血法对MNNG诱导萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控作用

目的探讨益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,运用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型。应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血清PGⅠ/PGⅡ和GAS含量显著降低(P0.01),Shh、Ptch基因及蛋白含量均明显下调(P0.05,P0.01),Smo蛋白表达减弱(P0.01)。与模型组相比,三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组PGⅠ/PGⅡ明显升高(P0.01),黄芪组、三七组及黄芪三七组GAS含量显著升高(P0.05)。三七组、黄芪三七组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P0.05),三七组和Purmorphamine组Ptch蛋白表达增多(P0.05),黄芪组、三七组、黄芪三七组和Purmorphamine组Smo蛋白表达显著增强(P0.05,P0.01)。结论益气活血法可激活hedgehog信号通路,对萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜病变起到改善作用。     

半枝莲提取物对人结肠癌细胞HT-29Pim-1和Pim-2mRNA表达的影响

目的探讨半枝莲提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(0.5、1.5、2.5、4 mg/mL)半枝莲提取物组,干预24h。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响,并用2.5 mg/mL浓度干预1、3、6、12、24、48 h观察对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2mRNA的表达。结果半枝莲提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少、细胞变小,抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量一效和时一效作用;Pim-1和Pim-2 mRNA表达随药物浓度的增加而减少。结论半枝莲提取物能显著地抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖,下调Pim-1和Pim-2的mRNA表达。     

黄芩苷对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的基于STAT3/Bcl-2信号通路探究黄芩苷对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为空白组及黄芩苷25,50,100,200,400μg/mL组,空白组用不含黄芩苷Gibco RPMI 1640培养基培养,黄芩苷各组采用相应浓度黄芩苷培养,分别处理结肠癌SW480细胞24 h后,采用CCK-8法、Edu染色法、Annexin V-FITC/PI法检测经上述处理细胞的增殖和凋亡情况,采用Western blot法检测人结肠癌SW480细胞中促进凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3和抑制凋亡相关蛋白Bcl-2以及转录相关蛋白STAT-3的表达情况。结果黄芩苷各组的细胞增殖率均明显低于空白组(P均0.05),且细胞增殖率随着黄芩苷浓度的增高而缓慢下降,当黄芩苷浓度达400μg/mL时,增殖率下降1/4;人结肠癌SW480细胞凋亡率有随着黄芩苷浓度的增加而逐渐升高的趋势。随着黄芩苷浓度的增加,Bax蛋白表达量逐渐增加,黄芩苷100,200,400μg/mL组明显高于空白组(P均0.05),但黄芩苷200μg/mL和400μg/mL组比较差异无统计学意义(P0.05);STAT-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,黄芩苷50,100,200,400μg/mL组均明显低于空白组(P均0.05);黄芩苷50,100,200,400μg/mL组Caspase-3蛋白表达量呈下降趋势,但与空白组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论黄芩苷能诱导人结肠癌SW480细胞凋亡并抑制其增殖,且与黄芩苷浓度呈一定的量效关系,其机制可能与调节STAT3/Bcl-2通路有关。     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。