4-苯基丁酸对脓毒症大鼠肺血管渗漏的作用及机制

目的探讨4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)对脓毒症大鼠肺血管渗漏的作用及机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型,观察给予4-PBA后大鼠的肺血管通透性、内质网应激标志蛋白如葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(glucose regulated protein94,GRP94)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)表达的变化。培养大鼠肺静脉内皮细胞,观察给予脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和4-PBA对细胞应力纤维(F-actin)的影响。结果与假手术组比较,脓毒症大鼠肺血管通透性显著升高,内质网应激标志蛋白(GRP78、GRP94、CHOP)的表达增高,4-PBA预处理后,脓毒症大鼠肺血管的通透性下降,内质网应激标志蛋白表达下降。与正常肺静脉内皮细胞比较,LPS组肺静脉内皮细胞应力纤维增多,细胞呈收缩状态。而4-PBA预处理组肺静脉内皮细胞形态则近似正常。结论 4-苯基丁酸可能通过抑制应力纤维形成,改善细胞收缩状态,降低脓毒症大鼠肺血管的通透性。     

内质网应激对肝细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的探讨不同严重程度内质网应激对过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)表达的影响。方法以小鼠肝细胞AML-12为研究对象,内质网应激诱导剂衣霉素(Tunicamycin,TM)以时间梯度、浓度梯度细胞诱导不同严重程度的内质网应激。采用实时荧光定量PCR方法和免疫印迹方法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、PPARα在内质网应激过程中的基因和蛋白动态表达;用免疫荧光染色方法检测PPARα蛋白在内质网应激过程中的表达情况和位置变化。结果在TM分别以不同时间和不同浓度诱导AML-12细胞内质网应激的过程中,随TM刺激时间延长与浓度增加,CHOP、GRP78 mRNA和蛋白水平也逐渐升高;而PPARαmRNA和蛋白呈现先升高后下降的表达趋势。在免疫荧光检测中,TM刺激早期PPARα主要在细胞质中表达,晚期集中在细胞核内;低浓度TM刺激时PPARα的位置主要表达在细胞质,而高浓度TM刺激后,PPARα聚集在细胞核中。结论细胞轻度内质网应激时,PPARα表达升高,而在细胞严重内质网应激时PPARα表达下降。     

内质网应激参与动脉粥样硬化机制的研究进展

<正>内质网是一种存在于真核细胞中并与核膜、高尔基体、细胞膜相互连续,参与分泌蛋白、膜蛋白折叠及Ca~(2+)水平调节的复杂膜性结构。内质网发挥折叠功能需分子伴侣参与,如葡萄糖调节蛋白78k Da(glucose regulated protein 78k Da,GRP78)、钙连蛋白、钙网蛋白帮助新生多肽正确折叠,糖基化修饰酶类(寡糖转移酶、葡糖苷酶、甘露糖苷酶)进行糖化修饰。此外,内质网腔内氧化还原状态和高钙环境也是其发挥     

血红素加氧酶-1对烟草烟雾提取物诱导健康人支气管上皮细胞凋亡的作用

COPD是严重危害人类健康的常见疾病,其主要的病理特征为气流受限不完全可逆并呈进行性发展.烟草中含有4000多种化学物质,是导致COPD的主要元凶之一.我们在前期的研究中发现,过度的内质网应激可启动细胞凋亡[1].分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein,GRP78)与生长停滞DNA损伤可诱导基因153( C/EBP homologous protein/growth arrest-and DNA damage-inducible gene 153,CHOP/GADD153)表达显著增多是发生内质网应激的2个经典标志物[2-3].内质网应激时,CHOP是由抵抗细胞凋亡向促进细胞凋亡转换的重要信号分子[3-4].血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是广泛存在的抗氧化酶,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和抗增生的细胞保护效应.     

血清-葡萄糖剥夺抑制热休克蛋白90致心肌细胞损伤

目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)表达下调是否参与血清-葡萄糖剥夺(SGD)引起的心肌细胞损伤.方法 用血清-葡萄糖剥夺处理H9c2心肌细胞,建立缺血性心肌细胞损伤的体外模型;在血清-葡萄糖剥夺处理前,应用HSP90选择性抑制剂17-AAG预处理心肌细胞60 min;CCK-8比色法检测细胞存活率;Fluo-3AM染色结合荧光显微镜照相术检测细胞内游离钙水平;Western blot检测HSP90和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 血清-葡萄糖剥夺处理24h可明显抑制H9c2心肌细胞内HSP90的表达,诱导细胞内钙超载及上调内质网应激蛋白GRP78的表达.选择性HSP90抑制剂17-AAG预处理不仅可以加重血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞存活率降低,而且进一步加重血清-葡萄糖剥夺引起的H9c2心肌细胞内钙超载及内质网应激蛋白GRP78的表达上调.结论 抑制HSP90可能是血清-葡萄糖剥夺损伤心肌细胞的重要机制之一.     

葡萄糖调节蛋白78在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用

葡萄糖调节蛋白78(GRP78)作为一个重要的内质网分子伴侣,在蛋白质的折叠、转运和内质网应激反应过程中发挥重要作用。GRP78还存在于肿瘤细胞、内皮细胞和单核细胞的表面,可作为病毒进入宿主细胞的受体。内质网应激是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个重要的发病机制。对GRP78功能的深入挖掘,将为探索NAFLD的防御机制提供新思路。     

白芦藜醇对糖尿病小鼠肾脏内质网应激的影响

目的探讨白芦藜醇对糖尿病小鼠肾脏组织内质网应激的影响。方法 8周龄C57bl/6小鼠腹腔注射STZ诱导糖尿病小鼠模型。将实验动物分为正常对照组、糖尿病未治疗组和糖尿病白芦藜醇治疗组。建模5个月后取肾脏组织行Western blot和RT-PCR检测内质网应激通路关键分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)与葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein78,GRP78)表达水平。免疫组织化学染色观察肾脏组织CHOP的表达。结果糖尿病白芦藜醇治疗组CHOP和GRP78表达水平相比糖尿病未治疗组明显减少(P0.05),但两者均高于正常对照组(P0.05)。结论白藜芦醇能明显降低糖尿病小鼠肾脏内质网应激水平。     

葡萄糖调节蛋白78在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用*

葡萄糖调节蛋白78（GRP78）作为一个重要的内质网分子伴侣,在蛋白质的折叠、转运和内质网应激反应过程中发挥重要作用。GRP78还存在于肿瘤细胞、内皮细胞和单核细胞的表面,可作为病毒进入宿主细胞的受体。内质网应激是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个重要的发病机制。对GRP78功能的深入挖掘,将为探索NAFLD的防御机制提供新思路。     

白细胞介素-22对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激的影响

目的观察IL-22对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉内质网应激的影响。方法 24只健康雄性ApoE~(-/-)小鼠(8周龄)被随机分为对照(Control)组、高脂(HF)组、HF+IL-22组,每组8只。Control组给予普通饲料,另外2组给予高脂饲料喂养12周。HF+IL-22组同时腹腔注射用PBS(含5%海藻糖)稀释的重组小鼠白细胞介素(rmIL-22)溶液0.1 mL/d,浓度200 ng/mL,其余小鼠腹腔注射等量的PBS溶液(含5%海藻糖)。实验12周后,检测各组小鼠血脂水平、主动脉内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白(GRP) 78、GRP94、C/EBP同源蛋白(CHOP)]mRNA及GRP78蛋白的表达水平。结果与Control组相比,HF组TC、HDL-C、TG和LDL-C水平显著升高(P0.05),GRP78、GRP94和CHOP的mRNA表达量亦显著升高(P0.05),GRP78蛋白表达量也显著升高(P0.01); HF+IL-22组较HF组TC和LDL-C水平显著降低(P0.05),GRP78、GRP94的mRNA表达量显著降低(P0.001),GRP78蛋白表达量也显著降低(P0.05),且HF+IL-22组较Control组LDL-C、TC、TG、HDL-C水平增高,GPP78、CHOP mRNA、GRP78蛋白表达增高,GRP94 mRNA水平降低(P0.05)。结论 IL-22能够改善高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激。     

Expression of heat shock proteins （HSP27, HSP60, HSP70, HSP90,GRP78, GRP94） in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinomas and dysplastic nodules

AIM: Expression of heat shock proteins (HSPs) is frequently up-regulated in hepatocellular carcinoma (HCC), which evolves from dysplastic nodule (DN) and early HCC to advanced HCC. However, little is known about the differential expression of HSPs in multistep hepatocarcinogenesis. It was the purpose of this study to monitor the expression of HSPs in multistep hepatocarcinogenesis and to evaluate their prognostic significance in hepatitis B virus (HBV)-related HCC. METHODS: Thirty-eight HCC and 19 DN samples were obtained from 52 hepatitis B surface antigen-positive Korean patients. Immunohistochemical and dot immunoblot analyses of HSP27, HSP60, HSP70, HSP90, glucose regulated protein (GRP)78, and GRP94 were performed and their expression at different stages of HCC development was statistically analyzed. RESULTS: Expression of HSP27, HSP70, HSP90, GRP78, and GRP94 increased along with the stepwise progression of hepatocarcinogenesis. Strong correlation was found only in GRP78 (Spearman's r= 0.802). There was a positive correlation between the expressions of GRP78, GRP94, HSP90, or HSP70 and prognostic factors of HCC. Specifically, the expression of GRP78, GRP94, or HSP90 was associated significantly with vascular invasion and intrahepatic metastasis. CONCLUSION: The expressions of HSPs are commonly up-regulated in HBV-related HCCs and GRP78 might play an important role in the stepwise progression of HBV-related hepatocarcinogenesis. GRP78, GRP94, and HSP90 may be important prognostic markers of HBV-related HCC, strongly suggesting vascular invasion and intrahepatic metastasis.     

噪声应激对大鼠心肌葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响与高血压及心肌重构的关系

目的 研究内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在噪声应激环境高血压大鼠模型心肌中的表达,并探讨GRP78和CHOP变化与高血压及其心肌重构的关系.方法 将成年雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠40只随机分为两组:噪声组(采用噪声环境建立高血压模型)和...     

PC12细胞氧糖剥夺不同时间段再灌注后内质网应激及细胞凋亡

目的观察大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12细胞)细胞氧糖剥夺(OGD)不同时间段再灌注(OGD/R)后内质网应激及凋亡的变化,探讨神经元OGD再灌注所致内质网应激与凋亡的关系。方法利用无糖DMEM及三气培养箱对PC12细胞进行OGD,不同时间段OGD后恢复正常培养24 h,根据不同OGD时间段,将细胞分为五组:control、3 h/24 h、6 h/24 h、9 h/24 h、12 h/24 h,OGD/R相应时间后,采用Western印迹检测内质网相关蛋白分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,免疫荧光方法检测GRP78蛋白的表达情况,并利用流式细胞仪检测凋亡率。结果 OGD/R后,与control组相比,6 h/24 h、9 h/24 h、12 h/24 h组细胞中GRP78蛋白及caspase-3蛋白的表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),而PERK蛋白在各组中无明显变化。用Spearman相关性分析结果显示,capase-3蛋白与GRP78蛋白表达水平成呈正相关(R=0.561,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,与control组相比,各组的凋亡率明显增高(P<0.01)。结论 PC12细胞OGD/R后内质网应激及凋亡呈动态变化,且内质网应激蛋白GRP78与凋亡蛋白caspase-3的表达水平有关,这将对缺血再灌注后神经元损伤的研究具有一定的意义。     

GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平。利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组。Real-time PCR和Western blotting方法检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况。结果胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P0.05)。结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用。而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡。     

内质网应激的信号通路及其与肝脏疾病的关系

内质网应激(ERS)表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集以及钙离子平衡紊乱,可激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和固醇调节级联反应等信号通路,既能引发糖调节蛋白GRP78、GRP94等内质网分子伴侣表达而产生保护效应,亦能诱导细胞凋亡。目前,关于ERS参与肝脏疾病的发生发展尚无系统性认识。综述了ERS相关信号通路的新进展及与其相关的部分肝脏疾病新进展,并对ERS介导的细胞凋亡及其在肝脏疾病中的作用进行阐述。干预ERS信号通路有望为未来肝脏疾病研究及治疗提供参考。     

槲皮素在衣霉素诱导的内质网应激介导肝癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨槲皮素(Quercetin,Que)在衣霉素(Tunicamycin,TM)诱导的内质网应激介导肝癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用。方法以衣霉素诱导肝癌细胞HepG2发生内质网应激,细胞分为四组:对照组、衣霉素组、槲皮素组、衣霉素+槲皮素组,采用噻唑蓝法检测细胞活力变化,划痕实验检测细胞迁移距离,PCR和Western blotting法分别检测葡萄糖调节蛋白(GRP78)和EMT因子Snail、E-cadherin及Vimentin的mRNA和蛋白质表达水平。结果槲皮素可显著抑制HepG2增殖;衣霉素组细胞的迁移距离明显大于另外三组(P0.01),槲皮素组小于对照组(P0.01);衣霉素组细胞的GRP78、Snail、Vimentin mRNA及蛋白表达水平显著高于另外三组(P0.05),而E-cadherin低于另外三组(P0.05),与对照组比,槲皮素组GRP78、Snail、Vimentin mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin升高(P0.05)。结论槲皮素可抑制衣霉素诱导的内质网应激及其介导的EMT,从而抑制肝癌细胞增殖转移。     

氧化型低密度脂蛋白诱导分子伴侣GRP78在3T3-L1脂肪细胞中的表达

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导3T3-L1脂肪细胞内质网应激相关分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,探讨ox-LDL对脂肪细胞内质网应激的诱导作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,分别给予不同浓度ox-LDL(50,100,200μg/ml)及内质网应激阳性对照诱导剂衣霉素(Tun)处理。用RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达,筛选出最佳干预浓度,用最佳浓度的ox-LDL分别干预脂肪细胞6、12、24 h,分别用RT-PCR、Western印迹法检测GRP78 mRNA、蛋白表达情况。结果 ox-LDL呈浓度依赖方式诱导脂肪细胞GRP78表达,其表达强度随时间延长而增强,24 h达高峰(P<0.05)。结论 ox-LDL可诱导3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激,促使未折叠蛋白反应信号通路的分子伴侣表达增加。     

葡多酚通过缓解内质网应激改善胰岛β细胞功能的机制

目的探讨葡多酚对胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响及机制。方法从克伦生葡萄提取葡多酚后干预高脂(HDF)喂养小鼠和胰岛β细胞株Min-6,检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP)-78、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、长链非编码RNA(lncRNA)GAS5及microRNA(miR)-346表达。通过小分子RNA干扰(siRNA)下调lncRNA GAS5后验证lncRNA GAS5在葡多酚调节内质网应激和miR-346表达水平中的作用。结果葡多酚可降低HDF动物血糖并改善胰岛素抵抗;同时抑制HDF导致小鼠胰腺内质网标志物GRP-78及CHOP升高。葡多酚还上调lncRNA GAS5和下调miR-346。siRNA-lncRNA GAS5可抑制葡多酚介导的GRP-78和miR-346下调。结论葡萄酚通过抑制内质网应激改善胰岛素抵抗和胰岛β细胞,其抑制内质网应激是通过上调lncRNA GAS5继而下调miR-346实现的。     

不同组织学类型食管癌GRP78的表达及其临床病理特征的相关性研究

正食管癌(Esophageal cancinoma,EC)是由食管粘膜上皮和腺体发生的恶性肿瘤,也是最常见的消化管恶性肿瘤之一~([1])。为了早发现、早诊断、早治疗、已达到延长生存期和改善预后的目的,探索一种经济实用、特异性高、敏感性强、适用于人群普查的早期诊断食管癌的方法,成为医务工作者关注的焦点~([2,3])。近期研究发现~([4]),葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD,GRP78)与肿瘤的发生、发展、耐药、复发及     

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导上皮间质转化的发生

目的 观察衣霉素诱导的内质网应激介导胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化(EMT)的发生.方法 以浓度为10 μg/ml的衣霉素(TM)处理胃癌SGC-7901细胞0、6、12、24 h,RT-PCR、Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)表达;取GRP78高表达时间点,以10 μg/ml TM处理SGC-7901细胞,RT-PCR、Western blotting法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达;镜下观察细胞形态学变化.细胞划痕试验观察TM诱导SGC-7901细胞的侵袭能力.结果 10 μg/ml的TM处理胃癌SGC-7901细胞12h后,细胞形态逐渐类似于长梭形并生出伪足.E-cadherin mRNA及蛋白表达下降(P＜0.05),GRP78、N-cad-herin mRNA及蛋白表达同时升高(P＜0.05).胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移能力增强.结论 TM诱导的内质网应激(ERS)可介导胃癌SGC-7901细胞发生EMT.     

过表达葡萄糖调节蛋白78人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231的构建

目的 构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78, GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法 采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒,采用PCR法扩增质粒,后使用EcoRⅠ、NotⅠ限制性内切酶切割质粒,对酶切产物进行测序鉴定,成功构建pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。取对数生长期293FT细胞系（克隆分离株）,在培养皿中加入pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro混合液,培养48 h收集含GRP78慢病毒颗粒的上清液,保存备用。另取对数生长期人乳腺癌细胞系HS578T及MDA-MB-231,置于含GRP78慢病毒颗粒上清液的培养基中培养,培养48 h时在培养基中加入1∶500稀释嘌呤霉素,筛选GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系。加入嘌呤霉素培养48 h采用Western Blotting法检测HS578T、MDA-MB-...