激活芳香烃受体抑制同种异体小鼠心脏移植物急性排斥反应

目的:验证在小鼠心脏移植中,2,3,7,8-四氯二苯二氧芑(TCDD)激活芳香烃受体(AHR)是否可以诱导调节性T细胞(Treg)扩增以及减轻急性排斥反应。方法:建立小鼠心脏移植模型,给予TCDD,观察对排斥反应及移植物生存期的影响。体外实验评估TCDD对Treg细胞比例的影响。检测受者体内Treg细胞比例及白细胞介素(白介素)-10表达水平。结果:TCDD激活AHR明显减轻心脏移植物内急性排斥反应,延长移植物存活时间[MST=(23.5±7.7)d]。体外实验中TCDD明显提升CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例[TCDD组(15.3±2.6)%;PBS组(4.7±2.4)%,P<0.01)],而受者体内脾脏和移植物内Treg细胞比例相比对照组也明显升高(P<0.05)。同时,TCDD明显提升了受者体内白介素-10的表达水平。结论:术前单次给予TCDD激活AHR可以明显抑制小鼠同种心脏移植物急性排斥反应,其机制可能与扩增Treg亚群有关。     

外周血CTL活化基因在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的：探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA表达与急性排斥反应（acute reiection，AR）的关系。方法：采用TdT介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（TUNEL）检测移植肾脏中的凋亡细胞。另外同时检测血清肌酐水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植肾和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达。并以同基因肾移植为对照。结果：病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9～11天分别发生轻、中、重度排斥。对照组无明显排斥现象。实验组于手术后第5、7、9～11天细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0．01）：肾小管上皮细胞凋亡程度与血清肌酐水平、病理学检查结果一致。RT-PCR结果显示实验组于术后3～5天起，肾组织和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达水平即显著升高，于术后7-9天达到高峰。与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）。外周血和肾组织中FasL、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3～5天开始明显上升，其变化趋势早于血清肌酐。结论：定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生，具有临床诊断参考价值。     

SYBR荧光实时定量PCR检测肝移植受者CD95和CD95L mRNA表达

目的 检测肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达,并探讨其在移植肝急性排斥反应中的意义。方法 采用SYBR荧光实时定量PCR法检测56例肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达。结果 CD95和CD95L mRNA在移植肝急性排斥患者外周血中的表达均显著升高（P〈0．011,时间上平均早于血肝功能酶谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高2d。结论 CD95和CD95L与移植肝急性排斥反应密切相关,CD95和CD95LmRNA可作为移植肝急性排斥反应发生的预测和诊断指标之一。     

ＨＯ-１持续高表达对ＤＡ到Ｌｅｗｉｓ大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的:探讨血红素氧化酶-1(hemeoxygenage-1,HO-1)在DA到Lewis大鼠肝移植中对急性排斥反应的影响及其机制.方法:建立DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,实验分3组,各12对.A组供体术前24 h阴茎背静脉注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24 h阴茎背经脉注射HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体给予HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),移植后持续予相同处理直至受体死亡.术后7天,各组处死6只,取外周血及肝脏标本,测定血清ALT,DBIL水平,组织病理观察排斥反应程度,RT-PCR及Western blot法测定移植物内HO-1 mRNA,Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况,余观察生存期.结果:术后7天,B组血ALT,TBIL水平与A组,c组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);病理示B组移植肝排斥反应程度轻于A,C组;B组HO-1和Foxp3 mRNA及其蛋白的表达均强于A,C组;B组受体存活时间(29.83±1.40)天较A组(13.00±0.52)天与C组(11.67±0.42)天显著延长(P＜0.01),而A,C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:诱导移植肝HO-1持续高表达,可通过促进移植物内Foxp3表达增强,发挥免疫抑制作用,减轻移植肝急性排斥反应.     

豚鼠-大鼠异种心脏移植急性血管排斥反应期组织因子mRNA的表达

目的 通过检测组织因子mRNA在异种心脏移植急性血管排斥反应期的动态表达与排异反应强度之间的关系，初步了解组织因子在该反应期的意义。方法 建立豚鼠-大鼠异种异位心脏移植动物模型，使用CVF抑制超急性排异反应，FK506抑制细胞免疫排斥反应，分别在移植术后4、8、12、16、24h切取移植心脏，通过病理切片观察排异反应和凝血强度，同时通过RT—PCR方法检测组织因子mRNA表达强度，未移植豚鼠心脏作对照。结果 在移植后，移植心脏的排异反应和凝血逐渐加重，豚鼠组织因子mRNA表达强度逐渐减弱，大鼠组织因子mRNA表达强度逐渐增强。结论 组织因子在异种心脏移植急性血管排斥反应期中起重要作用，其中供体的组织因子可能与凝血的激发有关，受体的组织因子可能与凝血的发展有关。     

负载供肾抗原的受者DC2细胞可延长肾移植大鼠的存活时间

 【目的】观察负载供肾大鼠抗原的DC2（未成熟DC）在体内特异性抑制急性排斥反应及其对移植物的功能和存活时间的影响。【方法】健康成年BN大鼠65只和Lewis大鼠80只,以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。利用受者大鼠骨髓细胞在体外诱导分化为未成熟的淋巴系DC前体细胞（DC2）,并对其进行免疫表型分析。将所获得DC2负载供肾大鼠抗原,观察DC2在体外抑制混合淋巴细胞反应（MLR）,以及在大鼠同种异体肾移植模型中特异性抑制移植排斥反应发生的情况,Kaplan-Meier生存分析研究对移植大鼠的存活时间的影响。【结果】负载供肾抗原的受者DC2对MLR具有抑制作用（P<0.05）;输注负载供肾抗原的DC2实验组的大鼠肾移植术后中位生存时间是62±6天,输注负载无关大鼠抗原和不负载抗原移植的实验组,术后中位生存时间分别是30±4天和27±5天,各实验组与对照组的血清肌酐和细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的mRNA表达之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】大鼠同系受体来源的负载供肾抗原的DC2具有体外抑制MLR的作用,体内能够预防和抑制急性排斥反应的发生,延长生存时间,提高远期存活率。     

哮喘患者外周血转录因子Foxp3 mRNA表达水平及临床意义

目的:探讨哮喘患者外周血叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达水平及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测63例哮喘患者和40例正常对照组外周血中转录因子Foxp3mRNA表达水平。结果:哮喘组患者外周血Foxp3mRNA表达水平(0.32±0.13)较对照组(1.15±0.31)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);急性发作期患者外周血Foxp3mR-NA表达水平(0.22±0.06)较非急性发作期患者(0.47±0.15)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);急性发作期重度患者外周血Foxp3mRNA表达水平(0.18±0.04)较对照组(0.29±0.07)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:哮喘患者外周血中转录因子Foxp3mRNA表达水平明显降低且与疾病分期及病情严重程度密切相关,Foxp3可能参与了哮喘发病过程。     

外周血穿孔素和颗粒酶B mRNA检测对胰腺移植急性排斥反应早期诊断的价值

目的 研究胰腺移植术后外周血穿孔素和颗粒酶B的基因表达对急性排斥反应早期诊断的价值.方法 实验动物为杂种长白猪,分为3组(n=8):对照组,移植组.免疫抑制剂治疗组.移植手术为同种异体门静脉回流、肠内引流全胰十二指肠移植.免疫抑制剂治疗组在行同种异体胰十二指肠移植的同时应用环孢A 骁悉 甲强龙三联免疫抑制治疗.分别于术前1 d和术后1、3、5、7 d采集受者锁骨下静脉血,抽提总RNA,RT.PCR方法检测静脉血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达,检测受者血糖、胰岛素、胰高血糖素水平.在术后1、3、5、7d,开腹取胰腺组织进行常规病理学检查,与血液中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达水平进行比较分析.结果 ①对照组、移植组、免疫抑制剂组之间受体的血糖、胰岛素、胰高血糖素水平变化差异无统计学意义.②与移植组比较,免疫抑制剂组静脉血淋巴细胞中穿孔索和颗粒酶B的mRNA表达水平下降(P<0.05).③胰腺移植术后静脉血穿孔素、颗粒酶B mRNA表达变化比急性排斥反应病理学改变早2～d.结论 监测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA表达的变化,可以对胰腺急性排斥反应做出早期诊断.     

大鼠心脏移植急性排斥反应过程中穿孔素及颗粒蛋白酶B mRNA的表达

目的通过动态监测大鼠异体异位心脏移植外周血（PB）中穿孔素（pedorin，P）和颗粒酶B（granryme B，OB）的表达水平，判断其与急性排斥反应的相关性。方法实验组（n=16），供受体分别为Wistar和SD大鼠；对照组（n=17），供受体均为SD大鼠，两组术后均未接受抗排斥治疗。于术前及术后不同的时间采血，同时进行活组织病理检查，应用荧光定量RT-PCR（FQ-PCR）的方法，测定P及GBmRNA的表达水平，并与同期的病理检查结果相对照。结果实验组于移植后24hP及GBmRNA的表达上调，术后72h的表达明显增加（P〈0．001），术后3—5d达峰值，7—11d维持高水平，其变化早于病理改变；而对照组P及GBmRNA的表达及病理改变，在同期的观察过程中均没有明显的变化（P〉0．05）。结论同种异体大鼠心脏移植的急性排斥反应过程中，外周血淋巴细胞的穿孔素与颗粒酶BmRNA的表达水平术后呈现递增性，早于病理改变，可以作为急性排斥反应的监测指标。     

舒莱预防肾脏移植物急性排斥反应的随机对照试验研究

目的：探讨白细胞介素2受体单克隆抗体——舒莱（Simulect）对移植肾急性排斥反应的预防作用以及用药的安全性与药物的毒副作用。方法：将我器官移植移植中心1999年3月～2002年10月共46例肾移植受者为研究对象，随机分成舒莱组（23例）和对照组（23例），两组肾移植术后均接受以Neoral为基础的三联免疫抑制剂。舒莱组术前2h和术后4d各给予舒莱20mg静脉滴注。观察急性排斥反应、Neoral、皮质激素和硫唑嘌呤用量及药物的毒副作用。实验室检测血CsA浓度和肝肾功能。结果：研究结果表明，舒莱组无1例发生急性排斥反应，对照组术后8周内发生3例4次急性排斥反应。两组均未发生明显的毒副作用。两组间Neoral用量及血CsA浓度无明显差异。对照组因发生急性排斥反应，8周内皮质激素用药量总量大于舒莱组。结论：舒莱对移植肾急性排斥反应具有明显的预防作用，且用药方法简便，疗程短，无明显的毒副作用。     

外周血淋巴细胞LFA-1水平与肝移植急性排斥的关系

【目的】探讨大鼠原位肝脏移植(OLTx)后外周血淋巴细胞表面淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）与急性排斥的关系。【方法】实验动物分为两组,非排斥对照组供体、受体均为SD大鼠,各20只,排斥组供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,各20只。受体大鼠分别于原位肝移植术前1天及术后第1、3、5、7天从尾静脉采血,经免疫荧光抗体-流式细胞术检测淋巴细胞表面LFA-1的表达。【结果】原位肝移植术后,受体大鼠外周血淋巴细胞LFA-1呈低水平表达,与术前相比差异具显著性意义（P<0.01）;受体大鼠发生急性排斥反应时,外周血淋巴细胞LFA-1水平显著增高,与对照组相比差异具显著性意义（P<0.01）。【结论】检测外周血淋巴细胞LFA-1表达水平有助于移植肝脏急性排斥的诊断。     

监测Th1/Th2细胞因子变化对猪胰腺移植急性排斥反应早期诊断的意义

目的研究Th1／Th2型细胞因子IFN-γ／IL-4变化对胰腺移植手术后急性排斥反应早期诊断的意义。方法杂种长白猪24只,分为对照组、移植组和免疫抑制治疗组。移植组为同种异体胰十二指肠移植,免疫抑制治疗组在进行同种异体胰十二指肠移植手术同时应用环孢素A（CsA）＋霉酚酸酯（MMF）＋甲强龙三联治疗方案。术前1d和移植手术后1、3、5、7d采猪静脉血。检测血糖、胰岛素及胰高血糖素水平,流式细胞仪检测Th1／Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4在CD4^＋细胞中的表达,并取移植胰腺组织进行病理学检查及进行评分。结果①术后1～7d移植组IFN-γ表达呈进行性上调,免疫抑制组轻度上调,在术后1、3、5、7d移植组与免疫抑制组IFN-γ的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。②移植组IL-4的表达呈进行性下调,免疫抑制组IL-4表达进行性上调,在术后3、5、7d移植组和免疫抑制组IL-4的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。③与对照组比较,移植组和免疫抑制组血糖、胰岛素及胰高血糖素水平的变化无统计学意义（P〉0．05）。④与移植组相比,免疫抑制组术后5d和7d胰腺排斥反应程度较轻（P〈0．05）。结论监测Th1（IFN-γ）和Th2（IL-4）型细胞因子变化可以早期发现胰腺移植后急性排斥反应。免疫抑制治疗可以下调Th1（IFN-γ）细胞因子表达,上调Th2（IL-4）型细胞因子的表达。     

PRA配型技术在致敏受者肾移植术中的应用研究

目的 探讨群体反应性抗体(PRA)配型技术在致敏受者肾移植中的临床效果.方法 应用抗原板(LAT),采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾移植受者术前的PRA;采用PRA配型技术进行术前配型.结果 12例致敏受者组采用PRA配型技术,肾移植术后肾功能恢复正常,无1例发生超急性排斥反应,术后1个月内急性排斥反应的发生率为25%;同期43例非致敏受者组,术后1个月内急性排斥反应的发生率为18.6%,虽较致敏受者组低,但两组之间差异无统计学意义.结论 PRA配型技术对减少致敏受者肾移植排斥反应,提高移植物存活率具有重要意义.     

HLA-G expression in the peripheral blood of live kidney transplant recipients

Background The human leukocyte antigen-G (HLA-G) has been considered to be an important tolerogeneic molecule playing an essential role in maternal-fetal tolerance, upregulated in the context of transplantation, malignancy, and inflammation, and has been correlated with various clinical outcomes. The aim of this study was to investigate the clinical relevance of the expression of membrane HLA-G (mHLA-G), intracellular HLA-G (iHLA-G), and soluble HLA-G (sHLA-G) in the peripheral blood of live kidney transplant recipients.

Methods We compared the expression of the three HLA-G isoforms in three groups, healthy donors (n=20), recipients with acute rejection (n=19), and functioning transplants (n=30). Flow cytometry was used to detect the expression of mHLA-G and iHLA-G in the T lymphocytes of peripheral blood from subjects in the three groups. Enzyme-linked immunosorbent assays were used to detect sHLA-G in the plasma from the three groups.

Results There were no significant differences in mHLA-G and intracellular HLA-G among the three groups, but the sHLA-G plasma level was higher in the functioning group than in the acute rejection or healthy group. We found a subset of CD4+HLA-G+ and CD8+HLA-G+ T lymphocytes with low rates of mHLA-G expression in the peripheral blood of kidney transplantation recipients. Intracellular expression of HLA-G was detected in T lymphocytes. However, there was no correlation between acute rejection and the mHLA-G or intracellular HLA-G expression.

Conclusion sHLA-G was the major isoform in the peripheral blood of live kidney transplant recipients and high sHLA-G levels were associated with allograft acceptance.

     

白细胞介素15和骨桥蛋白在大鼠肾移植急性排斥反应早期的表达

目的 研究白细胞介素(IL)15、骨桥蛋白、穿孔素及颗粒酶B在大鼠肾脏移植急性排斥反应(AR)早期的表达变化.方法 以BN大鼠和LEW大鼠分别作为供受体,建立大鼠肾移植动物模型.环孢素A处理组(CsA组):(BN→LEW,术后注射环孢素A);IL-15阻断组:(BN→LEW,术后注射IL-15抗体);AR组:(BN→LEW,术后注射生理盐水);对照组:(LEW→LEW,术后注射生理盐水).对照组6只大鼠,其余组10只大鼠,于移植后1、3、5、7 d取外周血,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测骨桥蛋白、IL-15、穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达,并作移植肾病理分析.结果 AR组、CsA组及IL-15阻断组肾移植术后IL-15、骨桥蛋白mRNA表达逐渐上调,第5天均达到高峰;对照组均处于低水平.术后第5天,CsA组和IL-15阻断组IL-15 mRNA分别为9685±1440、4346±741均低于AR组(17 022±2153,P<0.01),IL-15阻断组明显低于CsA组(P<0.01);CsA组和IL-15阻断组骨桥蛋白mRNA分别为13 226±1565、19 112±2908均低于AR组(24 663±2449,P<0.01),IL-15阻断组明显高于CsA组(P<0.01).术后第5天IL-15阻断组和CsA组穿孔素和颗粒酶B mRNA表达明显低于AR组(P<0.01).移植肾病理组织检查显示,AR组呈现重度急性排斥反应,IL-15阻断组排斥反应征象轻微.结论 大鼠肾移植AR发生早期骨桥蛋白、IL-15、穿孔素和颗粒酶B mRNA在外周血中均高水平表达,通过阻断IL-15/IL-15受体途径可明显下调颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达.     

Effects of combined immune therapy on survival and Th1/Th2 cytokine balance in rat orthotopic liver transplantation

Background The induction of immune tolerance and suppression of allograft rejection has become the focus in the study of liver transplantation. The effect of immune therapy with anti-CD40L mAb alone or in combination with cyclosporine A (CsA) on the recipient survival and Th1/Th2 cytokine profile was studied to elucidate its immunological mechanism and role in rat orthotopic liver transplantation. Methods The model of rat orthotopic liver transplantation was established by modified Kamada’s technique. Recipients were divided into group A (control group): SD→SD; group B (group of rejection): SD→Wistar without any treatment; group C: SD→Wistar with CsA monotherapy from day 1 to day 5; and group D: SD→Wistar with CsA from day 1 to day 5 and anti-CD40L mAb on day 0 and day 2. The survival of the recipients in all groups was observed and ELISA technique was used to detect the level of cytokines in peripheral blood on post-transplant day 7. Results The survival period of recipients in groups A (&gt;60 days) and D (&gt;60 days) was significantly longer than that in group B (13.8±2.4 days). The serum levels of interleukin 2 (IL-2) and interferon γ in group B were significantly higher than those in other groups; the level of tumor necrosis factor α was higher but not statistically significant. In contrast, the serum levels of IL-4 and IL-10 in group D were elevated more significantly than those in group B (P&lt;0.05). Conclusions Combined immune therapy can prolong the survival of allografts. Increased expression of Th2 cytokines, which is closely related to the induction of tolerance and suppression of rejection, is beneficial to the long-term survival of recipients and allografts.