氯通道在阿霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的研究氯离子通道在阿霉素诱导的低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及凋亡性容积减小中的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录氯电流,流式细胞术检测细胞凋亡,活细胞图像分析法检测细胞容积变化。结果 (1)阿霉素诱导CNE-2Z细胞凋亡;(2)阿霉素诱导CNE-2Z细胞发生凋亡性容积减小,细胞外灌流阿霉素2 h,细胞容积减小约10%;(3)阿霉素可激活氯通道,产生一个有较明显外向优势的氯电流;(4)氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoate(NPPB)明显抑制阿霉素诱导的凋亡性容积减小、细胞凋亡和氯电流。结论阿霉素可通过激活氯通道而诱导细胞凋亡,氯通道在阿霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡中发挥重要作用。     

丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞氯通道的激活作用

目的研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性。方法采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的CNE-2Z细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性。结果细胞外灌流1nmol.L-1的丹参酮ⅡA激活CNE-2Z细胞产生一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的电压依赖性和时间依赖性的失活,电流的翻转电位为(-5.9±0.2)mV,接近氯离子平衡电位。渗透性容积缩小可以完全抑制该电流,氯通道阻断剂NPPB可以部分抑制该电流。结论丹参酮ⅡA激活鼻咽癌细胞膜上的氯通道,诱导氯电流,该电流具有容积敏感性。     

姜黄素对人鼻咽癌株CNE-2Z细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨姜黄素(CU)对人鼻咽癌株CNE-2Z细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养CNE-2Z细胞在梯度浓度CU(0、20、40、80μmol/L)干预48 h后,采用MTT法检测其对CNE-2Z抑制增殖的作用,ELISA法检测8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,Hoechst33342染色检测细胞形态学的变化,Western blotting法检测PI3K和Akt磷酸化水平。结果与空白对照组(0μmol/L)比较,CU干预后明显抑制CNE-2Z的细胞增殖(P<0.01),同时减少内源性的8-OHdG生成(P<0.01)。此外,CU干预可有效促进癌细胞凋亡,下调p-PI3K和p-Akt的表达。结论姜黄素具有良好的抗肿瘤作用,其机制与抑制癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及抑制PI3K/Akt通路有关。     

氯通道阻断剂对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的观察氯通道阻断剂对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响,探讨氯通道在RIN-mβ细胞凋亡中的作用。方法采用H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡模型,观察氯通道阻断剂(DIDS、NPPB和NFA)对细胞存活率、形态学变化、凋亡的影响。结果氯通道阻断剂单用时对胰岛RIN-mβ细胞活力无明显影响,但能明显提高H2O2处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。与模型对照组相比,氯通道阻断剂DIDS、NPPB和NFA对抗组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论氯通道阻断剂对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的胰岛B细胞凋亡机制探讨

目的探讨白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的体外培养的胰岛B细胞凋亡的可能机制。方法将10μmol/L白藜芦醇和500μmol/L棕榈酸同时作用于体外培养的胰岛B细胞。共分为3组:空白组(不含棕榈酸)、棕榈酸组(PA组,含500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)、白藜芦醇组(Res组,含10μmol/L白藜芦醇+500μmol/L棕榈酸)。以流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2 mRNA水平。结果与PA组相比,Res能显著降低B细胞凋亡率(95.82%±1.94%vs.11.03%±1.08%,P<0.01),降低Bax mRNA(0.185±0.005 vs.0.161±0.003,P<0.01),升高Bcl-2 mRNA(0.004±0.001 vs.0.008±0.001,P<0.01)。结论白藜芦醇能拮抗棕榈酸诱导的胰岛B细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

冰片对鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道的激活作用

目的探讨冰片对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活CNE-2Z细胞膜电流,分析其电流特性;用活细胞图像法观察并测量冰片对细胞体积的影响。结果细胞外灌流冰片(20μmol·L-1)诱导CNE-2Z细胞膜氯通道开放,产生氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位接近氯离子平衡电位,该电流可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制,细胞外灌流47%高渗溶液完全抑制该电流。细胞外灌流冰片30 min,细胞体积缩小约9.4%,该作用可被tamoxifen完全抑制。结论冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道,导致细胞体积缩小,氯通道在冰片引起细胞体积缩小中起着重要作用。     

氯通道参与姜黄素诱导的乳腺癌MCF-7凋亡

目的： 探讨姜黄素（curcumin）诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡性途径中氯通道是否参与。方法： MTT检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用,及用氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropyl-amino）-benzoate （NPPB）预孵2 h后再加入姜黄素的增殖抑制作用;流式细胞术验证姜黄素诱导细胞的凋亡;采用全细胞膜片钳技术记录加入姜黄素后,细胞氯电流的变化。结果： （1）姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。NPPB组与单加入姜黄素组相比,细胞生存率存在明显差异,提示阻滞氯通道可导致姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的作用减弱。（2）流式结果表示,加入姜黄素（25 μmol·L^-1）24 h后凋亡率33.16%;而姜黄素（25 μmol·L^-1）+NPPB （100 μmol·L^-1）组凋亡率仅为9.16%,相比对照组（6.26%）、NPPB组（7.31%）,氯通道阻断剂明显抑制姜黄素诱导的MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,且对早期凋亡的抑制作用明显。（3）全细胞膜片钳技术结果,细胞外灌流姜黄素（25 μmol·L^-1）可激活乳腺癌细胞MCF-7氯通道的开放,产生氯电流,翻转电位（－3.18±1.30） mV,外向电流密度（3.16±1.42） pA·pF^-1,内向电流密度为（－2.76±1.38） pA·pF^-1,该电流可被氯通道阻断剂NPPB、DIDS完全抑制,细胞外灌流高渗溶液亦可完全抑制该电流。结论： 姜黄素可能通过激活容积敏感性氯通道而诱导细胞的凋亡,氯通道的激活可能在姜黄素诱导肿瘤凋亡通路中起着重要的作用。     

螺内酯诱导人急性白血病细胞Jurkat凋亡的作用研究

目的研究螺内酯对人急性白血病细胞Jurkat体外增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法将终浓度分别是10、50及100μmol/L的螺内酯加入Jurkat细胞的培养体系中,24 h内每隔4 h通过MTT法分析Jurkat细胞的增殖抑制率,Annexin V/PI流式细胞术法分析Jurkat细胞的早期凋亡率。结果螺内酯与Jurkat细胞共同培养12 h后,螺内酯能显著增加对细胞的增殖抑制作用,并且与药物浓度成正相关,各浓度组的抑制率随着培养时间的延长而升高,与药物干预时间成正相关;螺内酯处理Jurkat细胞24 h,各浓度组诱导细胞凋亡率分别为:10μmol/L组(11.2±0.35)%、50μmol/L组(29.8±1.27)%及100μmol/L(56.5±1.41)%,各个浓度组诱导细胞凋亡率与药物浓度成正相关。结论螺内酯对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示该药可能具有潜在抑瘤作用。     

槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响

目的:研究槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测0~200μmol/L槲皮素作用12、24、48 h对NCI-H1395细胞增殖的影响;应用Hochest33258染色法和流式细胞仪检测0、20、50、100μmol/L槲皮素作用24 h对NCI-H1395细胞凋亡的影响;检测100μmol/L槲皮素对经半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)、Caspase-9、Caspase-3抑制剂处理后NCI-H1395细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞的增殖,且与浓度和时间呈正相关。20、50、100μmol/L槲皮素可诱导NCI-H1395细胞凋亡,凋亡率分别为(18.6±4.1)%、(39.1±4.5)%、(58.2±3.5)%。抑制Caspase-8、Caspase-3激活可明显降低槲皮素对细胞的抑制作用(P<0.05)。结论:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞增殖,诱导其凋亡,其作用可能与凋亡外源通路Caspase-8和Caspase-3的激活有关。     

2-甲氧基雌二醇联用抗坏血酸诱导慢性粒细胞白血病细胞凋亡及细胞周期变化研究

目的研究2-ME联合抗坏血酸在诱导CML细胞凋亡中的作用以及细胞周期的变化机制。方法收集2016年1~12月期间汕头市中心医院血液科已确诊的bcr/abl(+)慢性粒细胞白血病患者57例骨髓,应用流式细胞术分选出CML细胞并培养传代并随机分为四组。使用抗肿瘤化合物2-甲氧基雌二醇(2-ME)与抗坏血酸(AA)组合来处理慢性粒细胞白血病(CML)细胞,根据药物浓度分为:(1)未加药组;(2)2-ME组(2μmol/L);(3)AA组(62.5μmol/L);(4)2-ME联用AA组(2-ME:2μmol/L+AA:62.5μmol/L)四组。应用流式细胞术分析药物处理后的CML细胞凋亡情况和细胞周期的变化情况。结果用(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较用F检验。结果 2μmol/L 2-ME+62.5μmol/LAA组可诱导CML细胞凋亡。2-ME+AA以剂量依赖性方式诱导凋亡,在浓度2~8μmol/L时凋亡呈时间-剂量依赖。2-ME+AA可诱导处于G0/G1期的细胞明显增多,处于S期的细胞减少。结论 2-ME联合抗坏血酸可诱导白血病细胞以时间-剂量依赖式凋亡,且与细胞周期抑制有关。