海生素对K562细胞生长及凋亡基因表达的影响

目的 探讨海生素对白血病K562细胞生长及凋亡基因表达的影响. 方法实验分为对照组、10mg/L海生素组和20rag/L海生素组.采用流式细胞术(FcM)、四唑蓝(MTT)和免疫细胞化学法测定海生素对K562细胞周期、细胞生长及细胞凋亡基因bcl-2和bax表达的影响. 结果海生素浓度为10mg/L和20mg/L时,可阻止K562细胞周期于G1/S期;海生素浓度为20mg/L时对K562细胞有抑制作用,在此浓度下随时间的延长细胞存活率有下降趋势;海生素浓度为20mg/L和40mg,L时,可下调凋亡抑制基因bcl-2的表达,上调凋亡促进基因hax的表达.结论 海生素可明显抑制K562细胞的增殖,使其阻滞于细胞周期的G1/S期;海生素还通过减少bcl-2的表达及增加bax的表达从而促进K562细胞的凋亡.     

生长抑素对人红白血病K562细胞的抑制作用

目的　研究生长抑素对人红白血病K5 6 2细胞的抑制作用。　方法　采用 8肽生长抑素———奥曲肽(octreotide ,SMSZOL 1995 ,SMS)在体外作用于K5 6 2细胞 ,经光镜、电镜观察、3H TdR掺入法和TdT缺口末端标记(TUNEL)技术检测K5 6 2细胞增殖、凋亡的变化。　结果　光镜下观察到 ,加SMS组培养 72h与空白对照组比较 ,细胞碎片增多 ;电镜下可见 ,SMS处理组中部分细胞核染色质靠核膜边集 ,呈块状或新月形 ,部分细胞胞浆中见核碎裂团块与空泡 ,线粒体基质深染、空泡样变和髓样变 ;3H TdR掺入法显示 ,SMS呈浓度依赖性地抑制K5 6 2细胞增殖 ,抑制范围为 2 0 %～ 5 0 % ,以 10 - 6 mol L最有效。在 10 - 1 0 ～ 10 - 6 mol L范围内 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;TUNEL检测见核深染的阳性细胞 ,10 - 6 mol L组与对照组比较 ,凋亡细胞明显增多 (P <0 0 1)。　结论　生长抑素可抑制K5 6 2细胞增殖 ,诱导凋亡。     

舟山眼镜蛇细胞毒素1对K562细胞的抑制作用

目的: 研究舟山眼镜蛇细胞毒素1(CTX1)对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的抑制作用。方法: 应用MTS方法和细胞计数法分别检测不同浓度CTX1作用K562后的细胞相对活力和细胞数;PI染色后用倒置荧光显微镜观察活细胞培养体系中K562细胞死亡情况;流式细胞术检测Annexin V-FITC和PI双染色后细胞凋亡情况。结果: 不同浓度的CTX1(2、5、10 mg/L)作用于K562细胞24 h,细胞相对活力分别为(90.50±3.07)%、(58.33±3.08)%和(27.43±1.99)%(与阴性对照组相比,下同,P<0.05),作用24 h时CTX1对K562细胞的半数抑制浓度为5.77 mg/L。CTX1(8 mg/L)作用于K562 6 h、12 h、24 h,细胞数分别占对照组的(85.01±3.54)%、(56.65±3.59)%和(43.24±4.15)%,P<0.05。随CTX1浓度增加和作用时间延长,荧光显微镜下观察到被PI染色的细胞数逐渐增多。CTX1(8 mg/L)作用于K562细胞6 h、12 h、24 h,细胞坏死率分别为(0.73±0.06)%、(13.90±0.46)%和(23.33±0.86)%;晚期凋亡率分别为(16.27±0.21)%、(26.90±1.23)%和(18.77±0.81)%。结论: CTX1对K562细胞有明显抑制作用,主要引起K562细胞晚期凋亡和坏死。     

RNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用

目的： 探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法：依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在LipofectamineTM 2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果：MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异（P<0.05）,反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6 μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论：以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。     

色钉菇乙酸乙酯相对SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨色钉菇乙酸乙酯提取物对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导损伤的多巴胺能神经元的保护作用。方法以SH-SY5Y细胞系为对象,首先测定MPP+孵育48 h时的半致死量(IC50)。然后用25mg/L、50mg/L、100mg/L等剂量的乙酸乙酯提取物预先孵育4 h,随后加入1.0mmol/L(IC50值)MPP+孵育48 h。通过MTT法检测细胞活性;Hoechst染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测法观察细胞凋亡情况。利用DCFHDA检测色钉菇乙酸乙酯提取物对细胞内活性氧(ROS)水平的影响。结果 1.0mmol/L MPP+孵育48 h时达到半致死剂量,MPP+的损伤浓度确定为1.0mmol/L。预先经色钉菇乙酸乙酯相(50mg/L)孵育,可显著提高SH-SY5Y细胞的活力,降低细胞凋亡率。MPP+损伤后ROS水平急剧升高,而25mg/L、50mg/L、100mg/L乙酸乙酯提取物干预后ROS水平下降。结论 50mg/L色钉菇乙酸乙酯相可显著减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性损伤,具有显著的保护作用。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞复制性衰老的机制

目的 探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老.流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测复制性衰老信号通路相关P21、P53与Rb蛋白表达;透射电镜观察人白血病K562细胞衰老超微形态学改变.结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为20 μmol/L,时间为48h;诱导后的K562细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加(P<0.05);复制性衰老通路相关蛋白P21、P53和Rb表达上调(P<0.05);端粒长度缩短加速(P<0.05);经诱导细胞呈现胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大等衰老形态学变化.结论 Rg1可能经由p53-p21-Rb信号通路诱导K562细胞呈现复制性衰老特征.     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响

目的：观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性，探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时，CCK-8检测其对细胞生长的影响；流式细胞术（AnnexinV）、细胞形态学（光镜及电镜）等方法检测细胞凋亡；同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用；流式细胞术及形态学观察（光镜及电镜）证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡，且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高。苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0．33％和98．36％，对照组分别为74．03％和97．63％。结论：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用，其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡．而不是抑制细胞增殖。苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中，Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达

背景：白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。 目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。 方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。 结果与结论：经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞,这部分细胞比例少,为(2.7±0.5)%;统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中CD34⁺、CD34⁺CD38^-细胞表达率差异有显著性意义,而CD34⁺CD38⁺细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义;侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

中药露蜂房醇提取物对人红白血病K562细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：研究中药露蜂房(Nidus Vespae,NV)醇提取物对K562细胞的作用及其机制。方法：利用^3H-TdR掺入、透射电镜、原位末端标记(TUNEL)技术、免疫组织化学和图象分析等方法。结果：不同浓度NV醇提取物对。K562细胞生长具有明显抑制作用(27％～56％)。NV醇提取物组K562细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Bcl-2蛋白表达显著减弱、Bax蛋白表达显著增强。结论：中药NV醇提取物可明显抑制K562细胞增殖,其作用机制可能是通过Bcl-2、Bax的表达,从而诱导白血病细胞凋亡。     

阿霉素对K562细胞凋亡及FAK mRNA的影响

目的探讨阿霉素体外作用于K562细胞后,观察其对细胞增殖的影响,促进细胞凋亡情况,以及调节细胞周期和粘着斑激酶（FAK）mRNA基因,进一步探讨通过调控FAK表达,研究抗白血病的作用机制。方法应用细胞增殖实验（CCK8法）观察不同浓度阿霉素作用不同时间对K562细胞增殖的影响,应用流式细胞仪观察不同浓度阿霉素对K562细胞细胞凋亡,细胞周期的影响,应用RT-PCR和Western blot技术检测不同浓度阿霉素作用对K562细胞36h后FAK mRNA以及蛋白表达水平的变化。结果随着阿霉素浓度增加及作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高,同一时间不同浓度之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;阿霉素能引起K562细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）;阿霉素能引起K562细胞周期阻滞,多停留在S期;阿霉素能引起K562细胞FAK mRNA表达显著降低。阿霉素能引起K562细胞FAK蛋白表达水平的降低。结论阿霉素抑制分裂期细胞的增殖,诱导细胞凋亡增加,对细胞FAK基因和蛋白水平均显著下调,为进一步研究FAK基因表达的调控与肿瘤细胞凋亡的分子机制提供了实验基础。     

人参皂苷CompoundK对慢性粒细胞白血病K562细胞周期影响的研究

目的探讨人参皂苷CompoundK（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞周期的影响及机制。方法应用MTr法检测CK对K562细胞增殖的影响．用流式细胞仪分析细胞周期,用RT．PCR分析CyclinBl、cdc2、Survivin基因mRNA变化,用Western．blot法分析CyclinBl、p34砌、Survivin蛋白变化。结果人参皂苷cK能显著抑制K562细胞的增殖,呈浓度依赖性,细胞阻滞于G2／M期,cdc2基因mRNA表达下调,CyclinBl、p34出、Survivin蛋白质表达均下调。结论人参皂苷CK能使K562细胞阻滞于GJM期,该效应可能与CK抑制CyclinBl、cdc2基因表达有关,Survivin蛋白表达下调可能是CK抑制K562细胞周期的关键性分子。     

PcDNA3.1-rhGM-CSF表达质粒的构建及其对K562细胞生长与分化的影响作用

目的:观察GM-CSF对髓系白血病细胞(K562)生长、分化的影响作用。方法:采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体中,构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核表达载体。经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定确认,转染人K562髓系白血病细胞、72小时后采用细胞形态学检测、MTT试验、免疫组化技术观察和分析PcD-NA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其影响该细胞生长与分化的作用。结果:①成功构建PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;②重组质粒PcDNA3.1-rhGM-CSF能在K562细胞中表达,并诱导K562细胞向单核细胞系、巨噬细胞系分化;③K562细胞增殖受到明显抑制。结论:成功构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;转染K562细胞能向单核细胞系、巨噬细胞系分化。     

脐血淋巴细胞低剂量辐射后抗K562细胞效应

目的观察脐血淋巴细胞低剂量辐射后体外抗K562细胞效应。方法脐血淋巴细胞经不同低剂量辐射,辐射后不同时间,不同的细胞浓度与3H-TdR标记的K562细胞混合培养,收获,测定每分钟放射性计数。用杀伤率和NK相对活性表示脐血淋巴细胞NK活性。用流式细胞仪测定其低剂量辐射后细胞表面免疫学标志变化。结果脐血淋巴细胞经2、5、10、20cGy辐射后NK活性明显增强,5cGy辐射后24*!h,NK活性增强最为明显。杀伤率和NK相对活性分别为38.3%和172.0%。当效靶比10∶1不变,效应细胞数达5×106后,增加效应细胞浓度并不能增加NK活性。经5cGy低剂量辐射后,CD3、CD4、CD8、CD19、CD56表达增强。结论脐血淋巴细胞在低剂量辐射下,可增强其CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的表达。     

蜂胶抑制白血病K562细胞增殖机制的初步研究

目的: 探讨蜂胶对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法: 体外培养K562细胞,将不同浓度的蜂胶掺入细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中Nup98 mRNA表达水平。Western blotting检测细胞中Nup98蛋白表达水平。结果: 2 mg/L、20 mg/L和200 mg/L组蜂胶K562细胞的增殖抑制率和凋亡率明显高于对照组,并具有一定的时间和剂量依赖性。高浓度蜂胶作用后,Nup98 mRNA及蛋白表达均明显低于对照组。结论: 蜂胶可抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与下调Nup98的表达有关。     

熊果酸促进K562细胞凋亡

本研究旨在探讨熊果酸在体外对人红白血病K562细胞系的作和机制。采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对K562细胞的增殖抑制和杀伤效应;用慧星电泳分析熊果酸对K562细胞DNA的损伤;Hoechst33258荧光染色观察DNA片段化：细胞免疫化学染色检测Bcl-2和Bax的表达;Western blotting检测K562细胞内Caspase-3和磷酸化酪氨酸的表达和活性。结果显示熊果酸存在体外对K562细胞具有中度增殖抑制效应,并呈浓度和时间依赖性。在熊果酸作用下K562细胞呈现凋亡征象,同时细胞内Bcl-2表达下降,Bax表达升高,Caspase-3被激活,磷酸化酪氨酸表达下降,说明熊果酸存体外对K562细胞有诱导凋亡作用,而提高Bax的表达、诱导Caspase-3活化及降低BCR／ABL的酪氨酸激酶活性可能足其作用机制之一。     

西达本胺增加慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素的敏感性

目的 观察西达本胺（CDM）能否影响人慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素（DNR）的敏感性,并探讨其可能的分子机制。方法 体外常规培养K562细胞和K562/ADM细胞,给予不同剂量CDM和（或）DNR处理48 h后,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测CDM与DNR对K562和K562/ADM细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价,采用流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡,采用Western blotting方法检测组蛋白2AX（H2AX）、γH2AX（Ser139）、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、p-ATM（Ser1981）、乳腺癌易感蛋白l（BRCA1）和p-BRCA1（Ser1524）的蛋白表达水平。 结果 DNR可剂量依赖性地抑制K562/ADM细胞活力（P<0.05）,半数抑制浓度（IC50）为11.76 μmol/L,耐药倍数为18.09;CDM可协同增强DNR对K562/ADM细胞的抑制作用置信区间（CI）（CI<1）,反转倍数为8.11;与对照组相比,DNR组细胞增殖率显著降低（P<0.05）,G2/M期细胞比例和凋亡率明显升高（P<0.05）,而无毒剂量的CDM可协同增强DNR引起的细胞增殖抑制、G2/M期阻滞和细胞凋亡（P<0.05）;耐药株K562/ADM细胞中ATM和BRCA1蛋白表达水平显著高于其亲代K562细胞（P<0.05）;DNR可上调K562/ADM细胞中H2AX、ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;CDM与DNR联用可使γH2AX蛋白水平进一步升高,但p-ATM和p BRCA1蛋白水平的变化则相反（P<0.05）。 结论 CMD可反转K562/ADM细胞对DNR的耐药性,这可能与上调H2AX蛋白的磷酸化水平以及下调ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平有关。     

人参总皂苷对K562细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562细胞)红细胞生成素受体(EpoR)表达的影响。方法:采用流式细胞仪检测TSPG作用前后的K562细胞膜EpoR阳性率的变化;免疫细胞化学检测TSPG作用前后K562细胞EpoR表达的变化;以免疫印迹法检测TSPG处理前后K562细胞全细胞、细胞膜和细胞质中EpoR含量的变化。结果:K562细胞膜表达EpoR蛋白的阳性率随TSPG剂量的增加而显著下降;免疫细胞化学染色可见对照组K562细胞胞膜着色深,胞质浅淡,核/质比例大;经TSPG 200mg/L作用72h后,K562细胞胞膜着色明显变浅,胞质着色明显加深且丰富,核/质比例明显降低;不同剂量的TSPG作用K562细胞72h后,全细胞总蛋白中的EpoR的表达无明显差异,经200mg/L TSPG诱导后的K562细胞膜中EpoR蛋白表达下降,而TSPG(100、200、300、400mg/L)诱导K562细胞72h后,胞质EpoR蛋白表达增强,且随着剂量的加大更加明显。结论:TSPG能使K562细胞的EpoR位置重塑,为研究TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制提供了依据。     

用共聚焦显微镜研究plk1在秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应中的作用

目的：研究plk1在秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应中的作用。方法：采用Western blotting和共聚焦显微镜检测秋水仙胺、长春新碱及plk1 反义寡核苷酸（Asodn）处理对K562细胞plk1及γ微管蛋白表达的影响。结果：Western blotting 检测结果提示秋水仙胺和长春新碱不影响plk1和γ微管蛋白的表达量，但共聚焦显微镜观察发现秋水仙胺和长春新碱影响plk1在分裂期聚集和中心体形成。plk1 Asodn处理不仅可明显降低plk1蛋白表达，而且影响γ微管蛋白聚合形成中心体。结论:秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应可能是通过plk1介导的抑制γ微管蛋白聚合形成中心体来实现的,plk1具有作为肿瘤治疗靶点的可能性。     

表阿霉素对K562细胞的杀伤作用及与多药耐药基因表达的相关性分析

探讨肿瘤化疗药物表阿霉素(E-ADM)对K562细胞的杀伤作用及其可能的机制。采用流式细胞术对经不同浓度、不同时间E-ADM作用的K562细胞株的自发荧光(SF)、细胞死亡率(PI)及多药耐药基因蛋白(P170)的细胞表达百分率及其表达的平均荧光强度(MFI)进行检测和分析。在E-ADM浓度为0.01μg/mL时,SF 、PI 及P170 细胞即开始上升,后迅速升高,杀伤效果呈现出典型的“S”形曲线分布,24h组的各项指标结果均显著高于72h组。K562细胞在不同浓度E-ADM作用后,SF 、PI 及P170 细胞百分率及其表达的MFI均随E-ADM浓度的增加而增高;3个指标的细胞阳性百分率与E-ADM浓度之间无显著的相关性(P均>0.05),而其MFI与E-ADM浓度之间却有显著的正相关(P均<0.01)。E-ADM对K562细胞有明显的杀伤作用,其杀伤效果与E-ADM浓度呈正相关,E-ADM杀伤K562细胞存在一个杀伤效应的剂量敏感区、一个最佳杀伤浓度和最适作用时间,该结果可为E-ADM的临床应用提供有价值的参考依据。