WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况,并结合临床病理资料,探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR,MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10）,胃癌组织甲基化率明显高于后两组,差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义;有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系,通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率,为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。     

肝细胞癌中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达的研究

目的 探讨细胞癌中WIF-1基因启动子甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应和实时定量逆转录-聚合酶链反应技术,检测33例肝细胞癌及相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中WIF-1基因启动子甲基化状态和mRNA表达水平,分析上述组织WIF-1基因甲基化及mRN表达与临床资料的关系并分析甲基化对mRNA表达的影响。结果 WIF-1基因在癌组织中甲基化率明显高于癌旁组织和正常组织（Х^2=4．89,P〈0．05）,而癌旁组织和正常组织中WIF-1基因甲基化率相比无明显差异;癌组织中WIF-1基因甲基化与乙肝表面抗原、肝硬化有关;WIF-1基因mRNA表达量在三种组织中比较无明显差异。结论 WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生相关;WIF-1基因启动子甲基化与其mRNA表达的关系有待进一步研究。     

普鲁卡因酰胺诱导肝癌细胞启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达

目的研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系，并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTPI基因重新表达的可能性。方法分别用5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养，甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞中GSTP1基因的甲基化状况，RT-PCR和Western blot分别检测细胞中GSIP1 mRNA和GST-π的表达。结果HepG2细胞在去甲基化药物处理前，GSIP1基因完全甲基化，GSTP1基因不表达；药物处理后，普鲁卡因酰胺组和5-Aza-CdR组GSTP1基因有表达。结论肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化可抑制GSTP1基因表达，普鲁卡因酰胺与5-Aza-CAR一样能使启动子区甲基化的GbTP1基因重新表达。     

槲皮素对膀胱癌细胞生长抑制相关基因的去甲基化作用

本研究观察槲皮素对膀胱癌细胞的增殖抑制效应及对肿瘤细胞生长相关基因高甲基化程度水平的影响,阐明槲皮素抗膀胱癌细胞的相关机制。一、材料与方法1.试剂:槲皮素及噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司。Taq多聚酶和DNA纯化试剂盒购自Promega　公司,引物对购自Invilrogen公司。     

肝细胞癌GSTP1基因启动子区甲基化的研究

基因启动子区异常甲基化抑制转录是基因失活的又一机制，也是人类肿瘤发生的重要机制之一。肝细胞癌（HCC）发生的分子机制仍不十分清楚。我们采用甲基化特异性PCR（MSP法）检测了HCC中GSTP1基因启动子甲基化，探讨其在HCC发生中作用。     

WIF-1基因与肺癌的诊断和治疗

Wnt蛋白是一组对人体生长发育和造血等过程具有重要作用的蛋白,它们所介导的信号传导通路称为Wnt信号通路,Wnt信号通路的异常激活可引起包括肺癌在内的各种肿瘤的发生。WIF-1作为一种抑癌基因,可以抑制Wnt信号通路的异常激活,从而避免肺癌的发生。而WIF-1一旦发生启动子甲基化,便会引起WIF-1表达下调,进而激活Wnt信号通路,导致肺癌的发生。因此,检测WIF-1的甲基化可以有助于肺癌的临床诊断,针对WIF-1甲基化的治疗也可作为肺癌的治疗方法之一。     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

散发性结直肠癌患者血RASSF2和sFRP1启动子区甲基化检测

目的检测散发性结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1启动子区甲基化情况．从而为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。方法使用甲基化特异性PCR检测59例散发性直结肠癌患者和59例健康对照血清sFRP1和RASSF2基因启动子区甲基化的情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果59例结直肠癌患者中RASSF2和sFRP1甲基化者分别为16例（27．1％）和18例（30．5％）;而59例健康对照无一例发现RASSF2或sFRP1基因甲基化,差异有统计学意义（均P〈0．01）。29例（49．2％）结直肠癌患者有至少1个基因甲基化,其甲基化率明显高于RASSF2和sFRP1单-基因甲基化率（均P〈0．05）。结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1基因甲基化率与结直肠癌临床病理特征均无明显关系（均P〉0．05）。结论血清RASSF2和sFRP1基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织异常升高,联合两基因的血清甲基化检测可为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。     

胰腺癌SOCS-1基因异常甲基化研究

目的：探索人类胰腺癌中SOCS—1基因是否由于异常甲基化而表达抑制；查询此现象在胰腺癌的发生、发展中的意义。方法：采集25例胰腺导管腺癌病人的肿瘤标本及5例对应的正常胰腺组织，运用甲基化特异性PCR反应研究胰腺癌组织中SOCS—1基因CpG岛甲基化状态，同时运用实时定量PCR分析SOCS—1基因的表达。结果：25例胰腺导管腺癌病人中有9例（36％）SOCS—1基因呈CpG岛甲基化，而正常组织则无SOCS—1基因CpG岛甲基化；SOCS—1基因CpG岛甲基化组的SOCS—1基因表达量与无SOCS—1基因CpG岛甲基化组相比，其基因相对表达量明显减少（P〈0．05），证明SOCS—1基因CpG岛甲基化可以抑制SOCS—1基因表达。与病人临床病理特征相结合比较．发现SOCS—1基因CpG岛甲基化与年龄、性别、肿瘤体积、肿瘤分化程度及TNM分期等因素无关。结论：在胰腺导管腺癌中存在SOCS—1基因CpG岛甲基化，且由于CpG岛甲基化而促使基因表达抑制。SOCS—1基因CDG岛甲基化在胰腺癌的发生、发展中可能具有一定的作用。     

错配修复基因启动子甲基化与胰腺癌发生的关系

目的通过对胰腺癌错配修复基因启动子甲基化及蛋白表达的检测与微卫星不稳定性的分析,探讨胰腺癌发病的分子机制。方法从35例胰腺癌病人的正常胰腺组织、癌组织中提取DNA;MSP法检测hMLH1及hMSH2基因启动子甲基化状态;SSCP法检测标本中微卫星不稳定性发生情况;免疫组化法检测错配修复基因hMLH1及hMSH2在胰腺癌中的表达情况。结果35例胰腺癌中hMLH1启动子甲基化发生率为60％（21／35）,正常组织中未发现甲基化,两者之间有统计学差异（P〈0.05）;而对于hMSH2仅有1例胰腺癌出现启动子甲基化;35例胰腺癌中微卫星高度不稳定7例,低度不稳定14例,稳定11例,正常组织中没有出现微卫星不稳定,两者之间有统计学差异（P〈0.05）;在微卫星不稳定的21例胰腺癌组织中有19例（90％）出现hMLH1启动子甲基化现象,微卫星稳定的ll例胰腺癌组织中仅有2例（6％）出现hMLH1启动子甲基化。hMLH1启动子甲基化在微卫星不稳定胰腺癌组织中常为缺失表达或低表达,在微卫星稳定胰腺癌组织中呈正常表达。hMSH2无论在MSI-H或MSI-L胰腺癌与正常胰腺组织中均无缺失表达,仅部分低表达。结论胰腺癌组织中错配修复基因的缺陷主要是hMLH1启动子甲基化,与胰腺癌微卫星不稳定性及蛋白表达缺失有关,在胰腺癌发生过程中起重要作用,是胰腺癌发生的重要机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶活性的影响

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶（ERK）活性的影响。方法 采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型，实验分3组：正常对照组、糖尿病模型组和EGCG干预组。EGCG干预组于模型成功后1周给予EGCG5mg·kg^-1·d^-1腹腔注射。以免疫组织化学方法检测肾组织磷酸化ERK（p-ERK）的表达。大鼠肾系膜细胞株分组：正常对照组（NG，葡萄糖5mmol／L），高糖组（HG，葡萄糖30mmol／L），HG＋EGCG1组（100μg／L），HG＋EGCG2组（200μg／L），HG＋EGCG4组（400μg／L），甘露醇组（5mmol／L葡萄糖＋25mmol／L甘露醇）。用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖活性；常规生化分析系膜细胞氧化应激状态；Western印迹检测ERK、p-ERK和p27蛋白表达水平。结果 EGCG呈剂量和时间依赖方式抑制高糖时系膜细胞的增殖活性及抗氧化作用。EGCG干预后糖尿病大鼠肾脏p-ERK蛋白免疫组化染色明显减弱。高糖时系膜细胞p-ERK及p27蛋白表达上调，EGCG呈剂量和时间依赖方式下调高糖时p-ERK蛋白的表达；呈剂量依赖方式下调p27蛋白的表达。结论 EGCG能有效改善糖尿病肾损伤程度，其作用机制可能是通过调节ERK活性，抑制p27蛋白表达而减少糖尿病肾病损害。     

表没食子儿茶素没食子酸酯下调胃癌细胞血管内皮生长因子表达的分子机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）通过抑制转录活化因子（Stat3）活性下调胃癌细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的分子机制。方法采用Westernblot法检测AGS胃癌细胞分别在50μg／L IL-6加0、5、10、25、50μmol／LEGCG作用下,VEGF、总Stat3（tStat3）和活化Stat3（pStat3）的表达情况：检测Stat3信号通路抑制剂对IL-6诱导的VEGF蛋白表达水平的影响。酶联免疫吸附法检测肿瘤细胞培养液中VEGF蛋白水平。RT-PCR法检测胃癌细胞VEGFmRNA表达水平。制备细胞核提取液,WestemMot法检测肿瘤细胞核内pStat3表达;同时采用染色体免疫沉淀方法检测Stat3与DNA的结合活性。结果IL-6可以诱导AGS胃癌细胞VEGF表达．与未添加组比较,添加IL．6组胃癌细胞VEGF蛋白表达、分泌和mRNA表达分别增加了2．4、2．8和3．1倍（均P〈O．01）：EGCG剂量依赖性地抑制IL-6诱导的胃癌细胞VEGF蛋白表达、分泌和VEGFmRNA表达（P〈0．05）。EGCG和Stat3信号通路抑制剂AG490可以显著抑制IL-6诱导的VEGF表达（P〈0．01）：EGCG处理的胃癌细胞中IL-6诱导的pStat3表达剂量依赖性地减少（P〈O．05）,但EGCG不影响IL-6诱导的tStat3表达（P〉0．05）;同时,EGCG可以直接抑制胃癌细胞自身和IL-6诱导的Stat3核转位和Stat3-DNA结合活性（P〈0．05）。结论EGCG通过抑制Stat3活性．从而下调胃癌细胞VEGF表达。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制胃癌生长和血管生成及其分子机制的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制胃癌生长和血管生成的分子机制。方法建立裸鼠异位胃癌肿瘤模型．检测肿瘤生长及肿瘤组织微血管密度（MVD）。培养SGC-7901胃癌细胞．Western印迹方法检测肿瘤细胞及其组织血管内皮生长因子（VEGF）、总信号转导、转录活化因子（Star3）和磷酸化形式Stat3的表达,同时采用ELISA方法检测肿瘤细胞培养液中VEGF蛋白水平．RT-PCR方法检测胃癌细胞VEGFmRNA的表达水平。结果EGCG组肿瘤组织平均质量（0．32±0．08）g,显著低于对照组（0．81±0．12）g,t=7．24,P〈0．01。EGCG组平均肿瘤抑制率为（60．4±6．1）％：其肿瘤生长曲线也显著低于对照组、EGCG组的肿瘤组织MVD（15．2±4．3）也显著低于对照组（24．6±6．6）（t=3．41,P〈0．01）。EGCG组胃癌组织的VEGF表达也减少78．6％．并呈剂量依赖性地下降：其肿瘤组织中Stat3磷酸化活化也减少了53．5％,也呈剂量依赖性地下降：但并未影响总的Stat3表达。结论EGCG通过抑制Stat3活化减少胃癌细胞VEGF表达．从而抑制胃癌生长和血管生成。     

膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态及其与膀胱癌临床病理关系的研究

目的:研究Wnt抑制因子1(WIF-1)启动子甲基化状态对WIF-1蛋白表达的影响及其与膀胱癌的临床病理关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学方法检测57例膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态和WIF-1蛋白表达情况。以正常膀胱黏膜及腺性膀胱炎组织为对照。结果:膀胱癌、腺性膀胱炎和正常膀胱组织WIF-1启动子甲基化率分别为57.9%,15.0%和0,差异有统计学意义(P<0.01)。WIF-1启动子甲基化阳性率随肿瘤分级、分期的增加逐渐升高(G1、G2、G3级分别为20.0%、56.3%和86.7%;浅表性和浸润性肿瘤分别为43.8%和76%,P<0.01)。膀胱癌组织WIF-1基因启动子甲基化时WIF-1蛋白表达率明显低于未甲基化组(P<0.001,Kappa值为0.783)。WIF-1甲基化与未甲基化组膀胱癌患者之间的5年总生存率分别为60.6%和91.7%(P<0.05)。结论:膀胱癌WIF-1蛋白表达缺失或减少与WIF-1启动子甲基化密切相关。WIF-1启动子甲基化可能是膀胱肿瘤发生的早期事件,而且与肿瘤的进展有关,可作为膀胱癌患者预后判断分子标志物。     

EGCG抑制IL-6诱导肿瘤血管生成的作用及机制

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制IL-6诱导胃癌血管生成的作用及机制。
方法：以50 ng/mL IL-6或不同浓度EGCG培养AGS胃癌细胞株,Western blot免疫印迹法检测胃癌细胞血管内皮生长因子（VEGF）的表达;Elisa法检测肿瘤细胞培养液中VEGF的蛋白水平;RT-PCR检测胃癌细胞VEGF mRNA表达;制备胃癌细胞条件培养液培养血管内皮细胞,采用MTT法检测血管内皮细胞的体外增殖;小管形成实验检测血管内皮细胞体外小管形成;基质胶（matrigel）塞实验检测体内血管形成。
结果：IL-6诱导胃癌细胞VEGF蛋白表达增加2.4倍,VEGF蛋白分泌增加2.8倍,而VEGF mRNA表达增加3.1倍;EGCG呈剂量依赖性地抑制IL-6诱导的胃癌细胞VEGF蛋白的表达、分泌和VEGF mRNA表达。VEGF中和抗体及EGCG在体外可以显著抑制IL-6诱导的血管内皮细胞增殖（t=3.02,P＜0.01;t=2.56,P＜0.05）和小管形成（t=3.38,P＜0.01;t=3.61,P＜0.01）以及在体内的血管生成（t=2.66,P＜0.05;t=3.77,P＜0.01）。
结论：EGCG通过下调胃癌细胞VEGF的表达,而抑制IL-6诱导的肿瘤血管生成。

     

Assessment of the neuroprotective effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on spinal cord ischemia-reperfusion injury in rats

Objective: Paraplegia or paraparesis due to spinal cord ischemia is one of the complications following thoracoabdominal aortic surgery. Recent studies revealed the neuroprotective effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on a variety of neurological disorders. The purpose of this study was to determine the neuroprotective effects of EGCG following spinal cord ischemia-reperfusion injury (IRI).Design: The present study was conducted on four groups of rats each as follows: Sham-operated group (laparotomy alone); Control group (with IRI); EGCGI group (50-mg/kg, i.p., before IRI), and EGCGII group (50-mg/kg, i.p., after IRI). Neurological function evaluated with motor deficit index (MDI) test. Spinal cord samples were taken 48 h after IRI and studied for determination of malodialdehyde (MDA) level, histopathology, and immunohistochemistry of caspase-3, TNF-α, and iNOS.Setting: Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran.Results: The level of MDA was significantly decreased in EGCG-treated rats. Attenuated caspase-3, TNF-α, and iNOS expression could be significantly detected in the EGCG-treated rats. Also, EGCG reduced the extent of degeneration of the spinal cord neurons, in addition to a significant reduction of MDI.Conclusion: The results suggest that pre- and post-treatment with EGCG may be effective in protecting spinal cord from IRI.     

(-)-Epigallocatechin-3-gallate,reduces corneal damage secondary from experimental grade II alkali burns in mice

Background

Since recent reports have shown that (-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) could be used for treating proliferative and inflammatory disorders, we explored its use for the management of corneal chemical burns.

二甲基亚砜诱导人肺癌细胞凋亡的研究

目的：研究二甲基亚砜（DMSO）对人肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法：用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肺癌细胞A549,应用普通光镜,荧光显微镜,MTT分析方法和流式细胞技术（FCM）检测肺癌细胞凋亡的形态学变化,细胞存活率,凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果：DMSO诱导A549细胞核DNA凝缩和核片段化,最后形成凋亡小体,随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率明显下降,其IC50为3．2％,4％的DMSO处理细胞12h,凋亡率高达33．0％,同时G0／1期细胞明显增加,S期和G2／M期细胞明显下降。结论：DMSO可诱导人肺癌细胞凋亡,并使细胞受阻于G0／1期而进入凋亡程序。