核心蛋白聚糖协同白细胞介素24对人外周血单个核细胞作用的体外研究

Objective To investigate the co-effect of decorin (DCN) and interleukin-24 (IL-24) on proliferation and Interferon-γ (IFN-γ) secretion of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Methods Recombinant plasmid pcDNA3. 1 (+)-DCN and pcDNA3. 1 (+)-IL-24 were constructed and transfected into PBMCs by liposome. After transfected with different plasmids, the PBMCs were divided into 6 groups;blank control group, Lipofectamine TM group, empty vector group, DCN group, IL-24 group, DCN and IL-24 group. PBMC proliferation was determined by methyl thiazolyl tetrazolium assay. IFN-7 expression in the supernatant was detected by ELISA. Flow cytometry was used to determine the surface expression of programmed death-1 (PD-1) on PBMCs. Statistical analysis was made using LSD-t test. Results The recombinant plasmid pcDNA3. 1 (+)-IL-24 was constructed successfully. PBMC proliferation and IFN-7 secretion were significantly higher in DCN and IL-24 group, and the expression of PD-1 was also upregulated obviously. Conclusion The combination of DCN and IL-24 could promote PBMC proliferation and strengthen the function of PBMCs in vitro.     

核心蛋白聚糖协同白细胞介素24对人外周血单个核细胞作用的体外研究

Objective To investigate the co-effect of decorin (DCN) and interleukin-24 (IL-24) on proliferation and Interferon-γ (IFN-γ) secretion of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Methods Recombinant plasmid pcDNA3. 1 (+)-DCN and pcDNA3. 1 (+)-IL-24 were constructed and transfected into PBMCs by liposome. After transfected with different plasmids, the PBMCs were divided into 6 groups;blank control group, Lipofectamine TM group, empty vector group, DCN group, IL-24 group, DCN and IL-24 group. PBMC proliferation was determined by methyl thiazolyl tetrazolium assay. IFN-7 expression in the supernatant was detected by ELISA. Flow cytometry was used to determine the surface expression of programmed death-1 (PD-1) on PBMCs. Statistical analysis was made using LSD-t test. Results The recombinant plasmid pcDNA3. 1 (+)-IL-24 was constructed successfully. PBMC proliferation and IFN-7 secretion were significantly higher in DCN and IL-24 group, and the expression of PD-1 was also upregulated obviously. Conclusion The combination of DCN and IL-24 could promote PBMC proliferation and strengthen the function of PBMCs in vitro.     

白塞病患者外周血单个核细胞分泌白细胞介素-10干扰素-γ水平的研究

目的通过检测白塞病(BD)患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)水平,探讨T淋巴细胞亚群与BD发病的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定45例BD患者和20名健康志愿者PBMC培养上清IL-10和IFN-γ水平。结果①BD活动组PBMC自分泌IL-10水平明显升高,与非活动组、对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);非活动组明显高于对照组(P<0.01)。②PBMC分泌IFN-γ水平3组(BD活动组、非活动组、对照组)比较差异无统计学意义(P>0.05)。BD患者PBMC分泌IL-10水平明显升高,增高程度与病情活动性相关,IFN-γ分泌水平无明显变化。结论PBMC分泌IL-10水平对BD诊断和病情活动性检测均有一定临床意义。     

重组人白细胞介素—10对银屑病患者外周血单个核细胞的作用

免疫学与分子生物学的研究表明,银屑病患者ＣＤ４ Ｔ细胞异常活化,而Ｔｈ２细胞合成与分泌的白细胞介素＿１０（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋ＿１０,ＩＬ＿１０）水平降低［１,２］,Ｔｈ１细胞产生的ＩＬ＿２、ＩＦＮ＿γ的ｍＲＮＡ水平明显高于正常人。ＩＬ＿１０是一种具有负向调节免疫功能的细胞因子,可抑制Ｔｈ１细胞增殖与ＩＬ＿２,ＩＦＮ＿γ等细胞因子分泌［３］。本文旨在观察重组人白细胞介素＿１０(ｒｈＩＬ＿１０)体外对银屑病患者外周血中单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生有关细胞因子的作用,为临床应用ｒｈＩＬ＿１０治疗银屑病提供依据。…     

白癜风患者外周血单个核细胞IL-2 IL-10和IFN-γ的表达特点

目的探讨白癜风患者中Th1/Th2型细胞因子表达的情况。方法采用细胞培养技术对白癜风患者和正常对照者的外周血单个核细胞(PBMC)在刀豆素A(ConA)作用下进行体外培养;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素(IL)2、IL10,干扰素(IFN)γ含量。结果①白癜风患者PBMC产生IL2水平高于正常对照组(P<0.05),IL10水平低于正常对照组(P<0.01)、IFNγ水平高于正常对照组(P<0.05)。②患者和对照组PBMC加ConA刺激孔中IL2高于相应自然增殖孔(P<0.05,P<0.01)。结论白癜风患者Th1型细胞因子的表达增高,Th2型细胞因子的表达降低,可能在发病机制中起一定作用。ConA可刺激PBMC分泌细胞因子。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞白细胞介素13的变化

研究小儿原发性肾病综合征时白细胞介素１３的变化。方法对５０例肾病综合征患儿和３０例正常健康儿童外周血单个核细胞进行分离，培养，并应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测培养上清中由Ｔｈ２细胞来源的细胞因子ＩＬ－１３的水平。     

CpG寡脱氧核苷酸对1型糖尿病患者外周血单个核细胞功能的影响

目的:观察CpG寡脱氧核苷酸(ODN)对1型糖尿病患者与健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12以及IL-10表达的影响。方法:将1型糖尿病患者与健康志愿者的PBMC根据刺激物不同分为对照组、CpG组(CpGODN 2 nmol·mL-1)。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBM CIFN-γmRNA、IL-12mRNA和IL-10mRNA的表达。结果:1型糖尿病患者IFN-γmRNA和IL-12mRNA的表达明显低于健康志愿者;1型糖尿病患者与健康志愿者PBMC经CpGODN刺激后,IFN-γ mRNA和IL-12mRNA的表达均高于对照组(P<0.01,P<0.01),IL-10mRNA的表达与对照组相似(P>0.05)。结论:1型糖尿病患者PBMC表达IFN-γ和IL-12下降,CpGODN可促进其表达,增强其免疫调节能力。     

卡介苗对支气管哮喘患者外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的影响

目的:研究减毒活菌卡介苗(BCG)干预对支气管哮喘患者外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的影响。方法:抽取哮喘患者(哮喘组)外周血样本20例,同期健康献血员(对照组)外周血样本10例。分离外周血淋巴细胞并用BCG(100mg/L)干预培养,于培养前后分别采用流式细胞仪测定外周血Th1、Th2百分率及Th1/Th2比,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定培养前后外周血淋巴细胞白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ表达水平。结果:哮喘组经BCG干预前Th1百分率和Th1/Th2均低于对照组,Th2细胞百分率高于对照组;干预后,Th1百分率和Th1/Th2均升高,Th2细胞百分率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。哮喘组经BCG干预前IFN-γmRNA表达水平低于对照组,IL-4mRNA表达水平高于对照组;干预后,IFN-γmRNA表达水平升高,IL-4mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:哮喘患者中Th2型免疫应答占优势,卡介苗干预可在基因表达水平和细胞数量上纠正哮喘患者的Th1/Th2失衡。     

乌苯美司体外对人单核细胞功能的活化作用

观察了国产乌苯美司（乌比美克）体外对人单核细胞功能的影响：①０．０１￣１００μｇ／ｍｌ乌苯美司能直接诱导人单核细胞生成ＩＬ－１；②经０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司作用４ｈ后，人单核细胞即开始分泌ＩＬ－１，２４ｈ达到高峰，以后逐渐下降；③经１０￣１００μｇ／ｍｌ乌苯美司预处理，单核细胞可促进ＮＫ细胞活性，而经０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司处理，单核细胞则抑制ＮＫ细胞活性。     

白细胞介素2活化骨髓单个核细胞抗肿瘤活性的体外观察

采用３Ｈ－ＴｄＲ前标记释放法和半固定培养等方法，观察了白细胞介素２活化骨髓的单个核细胞对白血病细胞珠Ｋ５６２细胞和ＨＬ－６０细胞的抗肿瘤活性。活化的最佳条件是细胞浓度１×１０６、白细胞介素－２浓度１０００ｕ／ｍｌ、效靶比例１００：１。骨髓经白细胞介素激活后，其造血祖细胞的活性均不受影响。活化２４小时即可产生杀伤作用，７２小时左右杀伤作用最强。活化培养７２小时后，免疫表型发生明显变化，２４小时后即有肿瘤坏死因子及白细胞介素６的生成，７２～９６小时生成更多，活化培养２４小时骨髓细胞中均有大颗粒淋巴细胞生成，与Ｋ５６２细胞与ＨＬ－６０细胞作用２４小时后活化骨髓细胞和ＨＬ－６０细胞密切接触，Ｋ５６２细胞和ＨＬ－６０细胞呈凋亡形态特征     

哮喘患者白细胞介素-12-13和-18分泌水平以及地塞米松 干扰素-γ对其的影响

目的　探讨白细胞介素 (IL) - 12、- 13和 IL- 18对哮喘患者 Th1/ Th2细胞活性的影响以及不同药物对它们的作用。方法　采用 Ficoll- Hypaque密度梯度离心法对 30例支气管哮喘患者和 15例健康对照者外周静脉血进行分离 ,分别收集外周血单个核细胞 (PBMC) ,分为空白组、地塞米松组和干扰素 -γ(IFN-γ)组共同培养2 4 h,用 EL ISA法检测细胞培养上清液中 IL - 12、IL - 13和 IL - 18的水平。结果　细胞培养上清液中哮喘组 IL -12和 IL - 18的水平显著高于健康对照组 ,而 IL - 13的水平明显低于健康对照组 ,统计学上差异有显著性 (P<0 .0 5 )。哮喘组加地塞米松后 ,3种细胞因子水平均比空白组降低 (P<0 .0 5 ) ;加 IFN- γ后 ,IL- 12明显高于空白组(P<0 .0 5 ) ,而 IL- 13和 IL- 18与空白组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　 1IL- 18可能参与了哮喘的发病过程 ,它通过调节 Th1/ Th2的活性及细胞因子的产生 ,在哮喘的发病过程中发挥作用。2糖皮质激素和 IFN- γ联合应用可能是治疗哮喘的最佳方案     

重组人IL-24的表达及其体外抗肿瘤细胞活性的研究

目的 构建重组人白细胞介素24(recombinant human interleukin 24,rhIL-24)表达载体并在大肠杆菌中表达,体外评估rhIL-24的生物学活性.方法 用基因工程方法构建rhIL-24表达载体并在大肠杆菌巾表达rhIL-24.表达的重组蛋白经层析法纯化后,分别用噻唑蓝比色法和蛋白印迹法检测rhIL-24对肿瘤细胞生长的影响和对内源性IL-24的诱导,用实时PCR检测不同肿瘤细胞与rhIL-24共孵育后细胞内的胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA变化.结果 rhIL-24能在大肠杆菌中高效表达,并能明显抑制多种肿瘤细胞生长.rhIL-24能诱导正常MRC.5细胞和多种肿瘤细胞产生内源性IL-24,并能改变肿瘤细胞的胱天蛋白酶3水平.结论 rhIL-24能在大肠杆菌中高效表达,且具有生物学活性.     

人白细胞介素24真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的 构建人白细胞介素24(human interleukin-24,hIL-24)真核表达载体,并在HepG2细胞中稳定表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),从植物血凝素活化的人外周血单个核细胞中克隆得到hIL-24基因目的 片段.应用DNA重组技术将IL-24PCR产物双酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DHSα获得重组载体,进行PCR、酶切及测序鉴定.应用脂质体将鉴定正确的重组质粒转染至HepG2细胞,用G418筛选稳定转染细胞株.采用RT-PCR检测稳定转染细胞HepG2中IL-24 mRNA的表达.结果 通过RT-PCR获得与预期大小一致约600 bp的IL-24基因片段;重组载体pcDNA3.1(+)-IL-24经PCR、双酶切及测序证实,IL-24 eDNA片段已正确插入真核表达载体中;在稳定转染的HepG2细胞株中可见到IL-24 mRNA表达.结论 成功构建了hIL-24真核表达载体pcDNA3.1(+)-IL-24,并获得了稳定转染该重组质粒的HepG2细胞株.     

程序性死亡分子1及其配体与自身免疫病的研究进展

程序性死亡分子1 (programmed death-1,PD-1)及其配体(programmed death-1 ligand,PD-L)是一对新近研究较多的负性共刺激分子.PD-1与其配体结合后,传导的信号能抑制T淋巴细胞增殖,在调节T细胞活化和免疫耐受过程中发挥关键作用,从而对防止自身免疫病的发生、发展具有重要作用.PD-1/PD-L在免疫调节中的作用使其有望成为治疗免疫性疾病新的靶向分子.     

AGEs对胰腺癌细胞株表面PD-L1表达的影响及生物学意义

目的研究糖基化终产物(AGEs)对人胰腺癌细胞株Patu8988表面程序性死亡配体1(PD-L1)表达的影响,探讨AGEs诱导的肿瘤细胞对T细胞增殖的作用。方法以糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)干预细胞株Patu8988为实验组,以牛血清白蛋白(BSA)为对照组,孵育72h后用流式细胞术分析各组细胞表面PD-L1表达的变化;AGE-BSA诱导的Patu8988细胞与人T细胞共培养,72h后用细胞增殖和细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测T细胞增殖。结果 AGE-BSA诱导72h后,Patu8988细胞表面PD-L1的表达呈浓度依赖性升高(P<0.05)。肿瘤细胞经AGEs诱导后抑制T细胞增殖能力增强(P<0.05),用抗PD-L1单抗阻断后抑制作用减弱(P<0.05)。结论 AGEs通过上调Patu8988细胞表面PD-L1的表达抑制T细胞增殖。     

慢性乙型肝炎病毒感染者血清白细胞介素-2干扰素-γ检测及其临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血白细胞介素-2(IL-2)、干扰素(IFN)-γ活性与病毒载量、肝功能以及肝纤维化的关系。方法IL-2检测采用放射免疫法(RIA法),IFN-γ检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。结果HBV-DNA高载量组与低载量组相比IL-2水平明显低下(P<0.05),两组间IFN-γ水平无统计学意义。随着肝功能损害程度加重,IL-2水平逐渐降低,IFN-γ逐渐增高;与非肝硬化组比较,肝硬化组的IL-2的含量显著降低,而IFN-γ显著升高(P均<0.01)。结论在乙型肝炎慢性化过程中,IL-2与HBV清除有关,其降低的程度与肝损伤严重程度及肝纤维化相关;IFN-γ的抗病毒作用不明显,但它作为炎症介质参与了肝脏炎症坏死和肝纤维化的形成过程。     

抗菌药物对PD-1/PD-L1抗体免疫治疗有效性影响的研究

目的 为恶性肿瘤患者在使用免疫检查点抑制剂(Immune checkpoint inhibitors,ICI)期间,合理选用临床抗菌药物方案及改善ICI治疗临床结局策略上提供参考.方法 检索CNKI、万方、PubMed、Web of Science等数据库的国内外文献,对使用免疫检查点抑制剂期间使用抗菌药物的临床研究,...