核因子κB在被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖中的信号转导作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)是否参与被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMC)增殖及是否是蛋白激酶C(PKC)激活后的下游途径.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMC,以10%非哮喘者血清为对照,并用吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)及12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)干预HASMC,用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术检测HASMC增殖;NF-κBp65免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性.结果 (1)哮喘血清处理的HASMC,S期细胞比例、吸光度值(A值)、PCNA表达阳性率、NF-κBp65阳性率及EMSA灰度值均较对照血清组增加(均P<0.05),PDTC预处理后上述指标均下降 (均P<0.05).(2)PMA+哮喘血清处理HASMC后,S期细胞比例、A值、PCNA表达阳性率、NF-κBp65阳性率及EMSA灰度值分别为(25.52±3.38)%、0.572±0.054、 (81.2±10.2)%、(26.5±5.0)%和71 654±12 293,PDTC预处理后上述指标均下降(均P<0.05).结论 NF-κB参与了哮喘血清被动致敏的HASMC增殖,在其增殖中存在着PKC/NF-κB信号途径.     

腺病毒介导反义AT1R转染对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的观察腺病毒介导反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制-缺陷型重组腺病毒(Ad/CMV*ahAT1),转染体外培养的 VSMCs,用RT-PCR半定量法和免疫组化法检测AT1R的表达,用3H-TdR掺入实验和流式细胞仪检测VSMCs的DNA合成和增殖指数.结果与对照组相比,转染Ad/CMV*ahAT1后48 h的VSMCs,AT1R 的mRNA表达低50%,蛋白表达也显著低于对照组(P<0.01).给予Ang Ⅱ刺激的VSMCs的3H-TdR掺入量和增殖指数明显高于空白对照组(分别为P<0.05和P<0.01);转染Ad/CMV*ahAT1组3H-TdR掺入量和增殖指数则显著降低(与DMEM组比P<0.05,与Ang Ⅱ对照组比P<0.01).结论腺病毒介导的反义AT1R转染,通过抑制AT1R的表达,明显抑制VSMCs的增殖和Ang Ⅱ刺激的VSMCs增殖.     

HMGB1 siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制。方法将体外培养的人胃黏膜上皮GES-1细胞随机分为对照组(正常培养)、A/R组(缺氧复氧培养)、A/R+si NC组(转染Control siRNA后,缺氧复氧培养)和A/R+si HMGB1组(转染HMGB1 siRNA后,缺氧复氧培养),MTT法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中HMGB1、NF-κB p65和IκB-α、Bcl-2和Bax蛋白表达,ELISA法检测LDH含量。结果 A/R处理能够引起GES-1细胞存活率降低,细胞凋亡率和LDH含量升高,Bcl-2和IκB-α蛋白表达下降,HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达上调;HMGB1siRNA则能够抑制A/R的作用,升高GES-1细胞存活率,降低细胞凋亡率和LDH含量,上调Bcl-2和IκB-α蛋白表达,下调HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达。结论缺氧复氧可引起胃黏膜上皮GES-1细胞中HMGB1表达升高,下调HMGB1表达可明显抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

褪黑素抑制大鼠肝脏星状细胞增殖机制

目的 观察褪黑素抑制大鼠肝脏星状细胞增殖的机制。方法 MTT法测定活细胞数量,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期, western blotting 检测NF-κB表达水平,放射免疫法检测细胞内cAMP浓度,免疫荧光法测定细胞内钙离子浓度。结果 Mel作用后HSCs增殖能力下降,亚G1凋亡峰增高,细胞内钙离子浓度、cAMP浓度和NF-κB表达水平下降。结论 Mel可能下调细胞内钙离子浓度、cAMP浓度及NF-κB表达水平而促进HSCs凋亡和G1期阻滞,从而抑制增殖。     

罗格列酮对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞炎症和增殖的影响

目的 探讨罗格列酮(RSG)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的葡萄糖和罗格列酮单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ELISA方法检测培养基中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;采用流式细胞术检测VSMCs细胞凋亡率及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达;Western印迹检测胞浆中VSMCs Bcl-xl蛋白表达及NF-κBp65和IκBα的表达.结果 高葡萄糖浓度(11.2、22.5 mmol/L)培养可明显增加上清中MCP-1的浓度,促进VSMCs增殖,抑制其凋亡,上调Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,同时使NF-κB p65表达增加,IκBα表达下降;30及100 μmol/L RSG以浓度依赖形式减少VSMCs对MCP-1的分泌,抑制高葡萄糖培养下(11.2、22.5 mmol/L)VSMCs Bcl-xl、Bcl-2表达,促进其凋亡;下调NF-κBp65表达,促进IκBα表达.RSG拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗RSG的作用.结论 RSG可能通过对NF-κB通路的调控,减少炎症因子MCP-1分泌,下调Bcl-xl、Bcl-2表达,从而抑制高糖葡萄糖培养下的VSMCs炎症反应并促进其凋亡,从而在2型糖尿病大血管病变的防治中发挥重要作用.     

SOCS 3基因对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖及原癌基因mRNA表达的影响

目的探讨细胞因子信号负调控因子(SOCS)3基因对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响.方法实验分pEFSOCS3和pSV2neo共转染组(A组)、未转染组(B组)、pEF和pSV2neo共转染组(C组).以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo 共转染至体外培养的PASMCs中,用免疫细胞化学法测转染前后细胞中SOCS3蛋白表达;用半定量RT-PCR检测转染前后常氧、缺氧2、4、6、8、12 h细胞c-fos、c-jun mRNA表达水平;流式细胞仪测转染前后上述各时相点细胞周期的变化.结果免疫细胞化学法证实转染后细胞中有SOCS3稳定表达.半定量RT-PCR结果,B、C组缺氧2 h c-fos mRNA表达水平达高峰,4 h下降, 6 h降至正常,8 h再次达高峰,12 h 下降;与B组同时相点相比,A组缺氧2、8 h c-fos mRNA表达水平低(P<0.01).B、C组缺氧2 h c-jun mRNA表达水平升高,6 h达高峰;与B组同时相点相比,A组缺氧2、4、6、8 h c-jun表达水平低(P<0.01).B、C组缺氧6 h即出现G0/G1期细胞比例减少,S+G2/M期细胞比例增加(P<0.01);与B组同时相点相比,A组G0/G1期细胞比例增多,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.01).结论缺氧可能通过诱导PASMCs c-fos、c-jun表达而促进PASMCs增殖;SOCS3蛋白可能通过下调c-fos、c-jun基因表达从而抑制缺氧诱导的PASMCs增殖.     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统对胰岛素样生长因子-Ⅰ诱导的兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究血红素氧合酶-1／一氧化碳（HO-1／CO）系统对胰岛素样生长因子-I（IGF-I）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及分子机制。方法体外培养兔主动脉VSMCs,用IGF-I诱导其增殖,用氯化血红素和锌原卟啉-9,分别诱导和阻断HO-1的表达,从而促进和抑制CO生成,通过RT．PCR及Western blot检测HO-1mRNA和蛋白的表达,采用酶联免疫法测定培养上清液中碳氧血红蛋白含量,应用同位素^3H-TdR掺入试验检测VSMCs增殖,采用流式细胞技术检测细胞增殖周期。结果氯化血红素显著诱导VSMCs HO-1 mRNA及蛋白的表达,显著增加VSMCs培养上清液中CO的生成量,呈剂量依赖趋势;梯度浓度的氯化血红素对IGF-I增高的VSMCs ^3H-TdR掺入量抑制率分别为29．6％、45．0％和54．1％,显著抑制细胞周期进程,导致G0／G1细胞显著增多,S期和G2／M期细胞显著减少（P均〈0．01）,与加入的氯化血红素及上清液中碳氧血红蛋白含量呈剂量依赖趋势;锌原卟啉-9则导致相反的结果。结论内源性CO通过抑制VSMCs的DNA合成及细胞周期进程直接参与VSMCs的增殖调节;HO-1表达上调是细胞对抗氧化应激和损伤的保护性反应;HO-1 mRNA及蛋白表达增加是内源性CO抑制VSMCs增殖的基础。     

戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.     

斑蝥素阻断核转录因子κB信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探讨斑蝥素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响,以及从核转录因子κB(NF-κB)信号通路角度探讨其机制。方法:组织块贴壁法获取SD大鼠原代VSMCs,以1 mg/L的脂多糖诱导VSMCs增殖和迁移。实验分4组:对照组、1 mg/L脂多糖刺激组、脂多糖刺激后加用5μmol/L斑蝥素组和脂多糖刺激后加用10μmol/L斑蝥素组。观察不同浓度斑蝥素对VSMCs增殖和迁移的影响及从NF-κB信号通路角度探讨其机制。结果:细胞毒性及增殖检测实验显示,斑蝥素浓度在10μmol/L内细胞活性不受影响,脂多糖使用浓度为1 mg/L时VSMCs增殖能力显著提高,但随着脂多糖浓度的进一步提高其增殖能力增速减慢。流式细胞仪检测结果显示,脂多糖可促进VSMCs由S期向G2期转化,而斑蝥素可明显抑制脂多糖的上述作用(P0.05)。Transwell结果显示,脂多糖可显著诱导细胞迁移(P0.01),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制脂多糖诱导的细胞迁移(P0.01)。蛋白免疫印迹法检测显示,脂多糖显著增加磷酸化NF-κB p65水平,同时明显抑制NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的表达,而斑蝥素呈浓度依赖性抑制脂多糖的上述作用(P0.05)。实时荧光定量聚合酶链式反应法和酶联免疫吸附测定结果均显示,脂多糖显著增加促炎因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和单核细胞趋化蛋白-1的表达(P0.05),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制其表达(P0.05)。结论:斑蝥素对脂多糖诱导的VSMCs的增殖和迁移具有显著抑制作用,其机制与抑制NF-κB通路并减轻炎症反应有关。     

血瘀型噎膈患者血清对食管癌EC9706细胞周期及核因子-κB信号通路蛋白表达的影响

目的通过观察血瘀型噎膈患者血清对食管癌EC9706细胞周期及核因子(NF)-κB介导的信号通路蛋白表达的影响。方法将EC9706细胞于37℃,5%饱和湿度的CO_2培养箱孵育24 h,饥饿24 h,分别加入倍比梯度的血瘀证、脾气虚证患者和健康人血清,MTT染色法检测细胞增殖变化;PI染色法观察细胞周期变化;Western印迹法检测NF-κB信号通路蛋白的表达。结果血瘀型噎膈患者血清刺激细胞的50%增殖率为711μl/10 ml培养液体积;细胞周期分析,患者血清刺激的EC9706细胞(38.85±3.11)%处于S增殖期,与各对照组有显著差异(P<0.05);在NF-κB信号通路中,血瘀型噎膈患者血清对EC9706细胞蛋白IKK-β、NF-κB、磷酸化NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达具有特征性促表达作用,与其他各血清干预的细胞比较有显著差异(P<0.05)。结论噎膈血瘀证患者血清提供利于细胞增殖的微环境,该证候的分子机制与细胞周期调节和NF-κB信号通路蛋白超表标达密切相关。     

白藜芦醇通过G2期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

[目的]探讨白藜芦醇治疗结肠癌的作用机制。[方法]以10mg/ml浓度的白藜芦醇处理HCT116细胞,进行损伤愈合实验及克隆集落实验,检测白藜芦醇对结肠癌细胞株迁移及增殖能力的影响。使用Cytation5细胞成像微孔板检测仪动态检测HCT116细胞增殖情况。通过流式细胞术检测白藜芦醇对HCT116细胞凋亡以及对细胞周期的影响。运用Western Blot技术检测白藜芦醇处理后NF-κB蛋白的表达情况。[结果]给予白藜芦醇24h后HCT116细胞迁移能力减弱,增殖减少,凋亡增加,并且使细胞周期阻滞于G2期,蛋白NF-κB表达减少。[结论]白藜芦醇抑制HCT116细胞的迁移和增殖,并且促进凋亡及阻滞其周期于G2期,同时NF-κB蛋白表达降低,提示白藜芦醇上述抗癌效应与NF-κB通路密切相关。     

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。     

RNA干扰抑制cyclin E表达对食道癌细胞Eca-109增殖的影响

目的 探讨利用RNAi技术抑制cyclin E的表达,研究cyclin E在食道癌细胞Eca-109生长、增殖过程中的作用.方法 设计针对cyclin E基因的siRNA序列,合成并克隆入pGFU6/neo质粒中,用脂质体转染法将重组质粒转染Eca-109细胞.采用RT-PCR和免疫印迹试验检测稳定转染的Eca-109细胞中cyclin E的表达水平.台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺人试验、平板克隆形成试验检测干扰cyclin E后对细胞活力以及增殖能力的影响,流式细胞仪测定细胞周期时相分布.Westem印迹检测细胞增殖有关蛋白PCNA、p21、bax和bcl-2表达变化.结果 台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺入试验和平板克隆形成试验显示转染组细胞活力及增殖受到抑制;阻滞在G0/G1期细胞比例增加.Western印迹表明PCNA和bcl-2蛋白表达量下降;而p21蛋白和Bax蛋白表达量上升.结论 沉默cyclin E基因能明显抑制食道癌细胞Eca-109的活力及增殖能力,并且细胞周期被阻滞,机制可能与下调肿瘤细胞内PCNA以及上调p21的表达有关.     

核转录因子NF-κB对血管损伤和新生内膜形成的影响

目的:探讨核转录因子NF-κB对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的作用。方法:原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB水平。制作大鼠血管球囊损伤模型,检测血管新生内膜形成及单核细胞化学趋化因子(MCP-1)、NF-κBp65和细胞外信号调节激酶(ERK2)的表达。结果:增殖的平滑肌细胞PCNA和NF-κBp65蛋白水平表达增加。NF-κBp65反义和诱骗寡核苷酸抑制PCNA表达。大鼠血管球囊损伤后第7天,正义组、诱骗对照组、模型组的内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值达到高峰。反义组、诱骗组和反义诱骗组显著降低内膜与中膜比值(P<0.05)。球囊损伤后3d、5d、7d,MCP-1mRNA和蛋白质水平持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义诱骗组在各时间点均能减少MCP-1mRNA和蛋白质表达。Western Blot检测显示血管球囊损伤后7d,NF-κBp65、ERK2的蛋白合成达到高峰。反义组、诱骗组、反义诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞NF-κBp65基因表达增加。NF-κB调控PCNA、MCP-1、ERK2的基因表达和蛋白质水平。局部转染NF-κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制血管新生内膜的形成。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞白细胞介素6表达和核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨同型半胱氨酸（HCY）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）白细胞介素－6（IL－6）表达和核转录因子κB（NF-κB）活性的影响。方法：在大鼠主动脉平滑肌细胞培养基中加和不同浓度的HCY，并孵育不同时间。用ELISA法检测培养上清液中IL－6蛋白浓度，用半定量RT－PCR法检测IL－6　mRNA表达，用电泳迁移率改变法检测NF－κB活性的变化。结果：（1）HCY呈剂量依赖关系（0．01－0．25mmol/L）和时间依赖关系（0－48h）增加大鼠VSMCs IL-6蛋白合成和mRNA表达。（2）HCY可迅速诱导VSMCs NF-κB活化。密度扫描提示，NF－κB活性30min时为对照1．76倍，1h为对照1．91倍，2h为对照1．84倍。（3）HCY刺激VSMCs IL-6mRNA表达的效应能被NF－κB特异性抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲阻滞。结论：HCY能直接增强NF－κB介导的VSMCs IL-6蛋白合成和基因表达，提示高水平IL－6表达引起的血管壁炎性激活可能是HCY致动脉粥样硬化的重要机制之一。     

葛根素对大鼠肝星状细胞生长及NF-κB p65和TGF-β1表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠肝星状细胞生长及核转录因子κB亚基(NF-κB)p65和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法将培养的大鼠肝星状HSC-T6细胞随机分为溶剂组和葛根素组,葛根素组包括0.1、1.0和10.0μmol/L 3个不同浓度组,溶剂组加入二甲基亚砜(DMSO)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的周期分布,酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞中TGF-β1含量,Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达。结果葛根素能够呈浓度-时间效应关系抑制HSC-T6细胞增殖,诱导细胞阻滞于G0/G1期。TGF-β1含量和NF-κB p65蛋白的表达水平均随葛根素浓度的增加而降低。结论葛根素能够抑制HSC-T6细胞生长,其作用机制可能与抑制炎症相关因子TGF-β1和NF-κB信号通路有关。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用观察及机制探讨

目的 探讨川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用及可能机制.方法 取对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,随机分为川芎嗪低浓度组、高浓度组和对照组,川芎嗪低浓度组、高浓度组分别予3、30 mg/mL的川芎嗪,对照组加入完全培养液;48 h后采用四氮唑盐比色法检测MG-63细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布;Westemblot法检测Bcl-2、CyclinD1及NF-κB p65蛋白表达水平.结果 与对照组比较,川芎嗪低浓度组、高浓度组MG-63细胞增殖抑制率、凋亡率及G0/G1期细胞比例均明显升高,NF-κB p65及其靶基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达水平均明显降低,且川芎嗪高浓度组作用更明显;P均＜0.05.结论 川芎嗪对体外培养的MG-63细胞有增殖抑制作用,其机制可能与其促进MG-63细胞凋亡、诱导G0/G1期阻滞、抑制NF-κB及其靶基因的蛋白表达有关.     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF-κB P65表达的影响

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测凋亡相关基因NF-κB P65 mRNA的表达变化;免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达最大值(P<0.05)。20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mR-NA表达,降低NF-κB P65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。