铁皮石斛试管苗快速生长与栽培研究及多糖含量测定

铁皮石斛（ＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＷａｌｌ．ｅｘＬｉｎｄｌ）是一种名贵的中草药,具有润喉消毒、生律益胃、清热养阴等功效,其主要成分石斛多糖具有增加机体免疫力等功能,铁皮石斛被誉为石斛的上品。由于铁皮石斛自然繁殖力很低,自然资源日趋枯竭,国内许多科研人员进行铁皮石斛试管苗的研究［１～３］。我们对铁皮石斛进行了快速繁殖和栽培研究,并根据文献资料［４］,对铁皮石斛栽培苗与原药材进行多糖含量比较。１　材料１．１　植物激素对铁皮石斛试管苗生长的影响试验　选用原球茎分化得到的小苗,苗高约０．５ｃ…     

铁皮石斛试管苗栽培技术研究

目的:提高铁皮石斛试管苗移栽成活率,以实现产业化生产。方法:采用不同基质、不同来源种苗及在不同海拔高度栽培试验。结果:原球茎增殖超过4代或者茎段增殖超过6代的试管生根苗的移栽成活率显著下降;海拔高度对移栽成活率没有显著影响,但生长质量及石斛多糖含量有明显的差异;移栽的基质以松树皮与碎石、花生壳与碎石综合效果较好,移栽成活率达到95%以上。结论:种苗质量及适当的栽培基质是实现铁皮石斛组培苗产业化生产的根本保证,采用“平地育苗,高山栽培”是保证铁皮石斛药材质量的有效方式。     

利用气升式生物反应器培养铁皮石斛原球茎

目的:探明影响反应器内铁皮石斛原球茎生长及物质合成的因素,为铁皮石斛原材料的大量生产提供一种新方法.方法:利用3L气升式生物反应器,以组培原球茎为材料,研究了接种量、光照强度和通气量对原球茎增殖生长和多糖及石斛碱积累的影响.结果:当接种量为10g· L-1时,培养30 d后原球茎颜色深绿,生长健壮.多糖含量在接种量处理间无差异,但石斛碱含量有差异(接种量10g· L-1处理最高),多糖和石斛碱生产量在10g·L-1接种密度中最高.光照强度1600lx条件下原球茎生长最旺盛,光照对铁皮石斛原球茎多糖的积累起到促进作用,但对石斛碱的积累则有抑制作用,多糖含量和生产量在1 600,2 400 lx光照处理下好于暗条件处理;石斛碱的含量虽然在暗处理中最高,但因原球茎生长不佳,石斛碱的生产量在1 600 lx的光照强度处理中出现最大值.通气量为0.2(空气体积/培养体积/min)时原球茎生长健壮,颜色鲜绿,生长优于0.1,0.3处理,且多糖和石斛碱含量和产量均达最大值.结论:在工作体积为2L的气升式球型生物反应器内,接入10g·L-1原球茎外植体,光照强度调节为1 600 lx,通气量为0.2有利于原球茎生长和多糖及石斛碱的生产,铁皮石斛原球茎生物反应器培养是大量快速生产多糖和石斛碱的有效途径.     

铁皮石斛组织培养研究进展

目的：探讨铁皮石斛种子无菌萌发的最佳条件、原球茎诱导试管苗的最佳配方、不同器官诱导芽分化的最佳条件、试管苗生根的最佳配方。方法：收集、整理、归纳近20年来国内外有关铁皮石斛组织培养的文献资料。结果：将文献中铁皮石斛种子无菌萌发的情况、原球茎诱导试管苗的情况、不同器官诱导芽分化的情况及试管苗生根的情况分别列表进行对照比较。结论：各种外植体都可诱导不定芽的分化,以MS培养基使用量为普遍,试管苗生杭率达到96.67%。     

几种人工栽培“枫斗类”石斛的多糖含量分析

目的:对比不同产地栽培铁皮石斛及其他3种"枫斗类"石斛药材的质量,为药用石斛资源的评价和开发利用提供依据和参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定不同来源石斛的多糖含量。结果:来自7个不同产地的人工栽培铁皮石斛多糖含量在24.32%-38.55%之间,以云南普洱样品多糖含量最高,贵州遵义样品多糖含量最低;采用植株分生苗栽培的齿瓣石斛多糖含量要高于组培苗栽培的样品;人工栽培不同品种石斛的平均多糖含量分别为:铁皮石斛29.30%、兜唇石斛50.12%、齿瓣石斛41.89%及晶帽石斛27.98%。结论:栽培在不同地区的铁皮石斛多糖含量有明显差异;以石斛多糖含量为指标,齿瓣石斛和兜唇石斛具有较大开发价值和应用前景。     

三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究

目的研究开唇兰小菇、石斛小菇、兰小菇等3种小菇属内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛、金线莲生长的促进作用.方法采用植物无菌原球茎及试管苗与真菌进行双重培养,观测原球茎增殖及苗的生长情况.结果接种3种内生真菌后,铁皮石斛苗的生长量高于对照3～5倍,石斛小菇、兰小菇对铁皮石斛原球茎增殖也有明显促进作用(P＜0.05);接种3种真菌的金线莲苗,侧芽及侧根数均显著高于对照.结论3种小菇属内生真菌能够促进铁皮石斛幼苗生长,促进金线莲侧芽及侧根的萌发,对铁皮石斛、金线莲的成功栽培具有实际应用价值.     

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征。方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量。结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基最适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中最大比生长速率0.044·d^-1,倍增时间15.8 d,最适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75％和0.0261％。结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能。     

铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究

目的:研究铁皮石斛种胚萌发和快速繁殖的组织培养技术,为铁皮石斛的繁殖建立最佳培养条件。方法:以成熟的铁皮石斛种胚为研究材料,以1/2MS为基本培养基,接种到含有不同植物生长物质BA(6-苄基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)组合及含有马铃薯提取液、香蕉提取物及活性碳的培养基上,诱导铁皮石斛种胚的萌发、原球茎增殖、分化及试管苗生根。结果与结论:添加20%马铃薯液有利于种胚的萌发,种胚萌发率为79.37%;BA 1.0 mg.L^-1和NAA 0.1 mg.L^-1最有利于原球茎增殖,培养基中添加2%活性碳原球茎增殖倍数高;NAA有助于试管苗的生根,不同含量NAA以0.5 mg.L^-1时试管苗平均根数最多和平均根长最长。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L^-1（诱导子·培养基。）的剂量（高剂量）加入培养基时,铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5．63％）,与对照（3．16％）相比提高了78．2％。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5．92％）,与平均值（4．59％）相比提高了29．0％。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

三种内生真对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究

目的：研究开唇兰小菇，石斛小菇，兰小菇等3种小菇属内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛，金线莲生长的促进作用。方法：采用植物无菌原球茎及试管苗与真菌进行双重培养，观察原球茎增殖及苗的生长情况，结果：接种3种内生真菌后，铁皮石斛苗的生长量高于对照3－5倍，石斛小菇，兰小菇对铁皮石斛原球茎增殖也有明显促进作用（P＜0．05），接种3种真菌的金线莲苗，侧芽及侧根数均显著高于对照.。结论：3种小菇属内生真菌能够促进铁皮石斛幼苗生长，促进金线莲侧芽及侧根的萌发，对铁皮石斛，金线莲的成功栽培具有实际应用价值。     

西双版纳地区铁皮石斛及齿瓣石斛品质的初步研究

目的 对比铁皮石斛与其常用替代品在品质方面的差异.方法 采用苯酚-硫酸法与重量法,研究对比了西双版纳地区不同来源铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量及折干率的差异.结果 铁皮石斛的多糖含量及折干率分别为20.29%,20.16%,齿瓣石斛为16.93%,18.92%.结论 不同栽培类型的铁皮石斛存在品质差异;齿瓣石斛的野生苗品质优于组培苗.     

两种石斛多糖提高小鼠免疫活性的初步研究

 目的 初步评价齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖对小鼠免疫功能的影响。方法 体外培养小鼠脾淋巴细胞,观察齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖分别与刀豆蛋白协同作用下对脾淋巴细胞增殖和细胞中γ-干扰素及白细胞介素-2含量的影响;动物实验中,分别灌胃给予不同剂量的齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖,连续给药14 d后,复制绵羊红细胞致小鼠足肿胀模型,观察两种石斛多糖对小鼠足趾肿胀度和胸腺、脾脏指数的影响。结果 齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖中剂量组均能显著刺激脾淋巴细胞的增殖,中、高剂量组均能促进脾淋巴细胞中γ-干扰素和白细胞介素-2的分泌;此外,两种石斛多糖高剂量组均可明显增加小鼠足趾肿胀度和脾脏指数,但各剂量组对小鼠胸腺指数无影响。结论 齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖能一定程度上提高小鼠的免疫活性。     

响应曲面法优化铁皮石斛多糖提取条件△

目的:应用响应曲面法优化铁皮石斛多糖提取的最佳工艺条件,为应用于生产提供参考。方法:在单因素试验的基础上,采用响应曲面法的中心组合设计,考察分析提取温度、提取时间、提取次数、液料比4个主要因素对石斛多糖提取率的影响,对铁皮石斛多糖的提取工艺参数进行优化分析。结果:铁皮石斛多糖提取的最优条件为:提取温度为100℃、提取时间为2.5h、料液比1∶17.2(m/V)、提取次数为3次。在此条件下,理论计算提取率达到51.12%,实测提取率为51.08%,与模型高度拟合。结论:该工艺便捷、快速、易操作、得率较高,可用于铁皮石斛多糖的提取。     

铁皮石斛水溶性多糖含量的动态研究

目的研究铁皮石斛不同采收期和不同生长期水溶性多糖的含量变化规律,以期确定最佳采收期。方法采用3,5-二硝基水杨酸比色法,以葡萄糖为对照测定。结果水溶性多糖含量,冬季采收含量较高,开花前含量最高;开花期,呈现明显的下降趋势;花期后,又开始回升。随着生长期的延长,呈现先升高后下降的趋势。结论以生长期在1～2年间,并在开花前的1～3个月,应为最佳采收期。     

光质与种质对铁皮石斛种苗生长和有效成分的影响

为了揭示光质与种质对铁皮石斛种苗生长和有效成分的影响,采用8种光质(红光、蓝光、黄光、绿光和3个不同比例的红蓝混光),对3个家系(9×66,17×30,78×68)进行组培试验,测定农艺性状及叶绿素、总生物碱、多糖的含量.结果表明,光质和种质对铁皮石斛种苗和有效成分均有极显著的影响,红光有利于种苗根系与苗高生长,蓝光有利于种苗增粗与生物碱积累,红蓝混光有利于叶绿素与多糖含量增加.研究结果为铁皮石斛种苗优质、低碳、高效生产提供了基础,并为优质药材生产给出了有益的提示.     

二种石斛属植物和小叶石仙桃生物碱的组织化学定位

 目的对不同年龄的铁皮石斛、铜皮石斛及其石斛伪品———小叶石仙桃的不同器官进行生物碱组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期。方法采用冰冻切片法,根据生物碱的理化性质,用碘化铋钾染色法对3种植物的生物碱进行组织化学定位。结果生物碱主要存在于3种植物茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中;其总生物碱含量顺序为:二生年的铁皮石斛≈铜皮石斛>小叶石仙桃。此外,在3种植物不同的器官中,其总生物碱的含量都呈现“叶>茎≈根”的规律。结论在种间及同种植物的不同年龄或不同器官中,其生物碱的含量存在差异。其中,以二年生铁皮石斛和铜皮石斛茎叶的生物碱含量较高,表明其药用价值也较高。     

5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较分析

目的:比较不同种石斛部分化学成分的差别。方法:通过定量测定,比较5种石斛种总多糖、氨基酸和甘露糖的含量差异。结果：5种不同种类的石斛的多糖、氨基酸、甘露糖的含量存在较大的差异.多糖含量,细茎石斛、金钗石斛、马鞭石斛相近,其中铁皮石斛明显高于其余4种石斛,鼓槌石斛明显低于其余的4种石斛;氨基酸含量,马鞭石斛高于其它4种石斛;甘露糖含量,铁皮石斛明显高于其余4种石斛。结论：5种不同石斛的总多糖、氨基酸和甘露糖的含量存在较大的差异,但就所含的相同化学成分总体而言铁皮石斛的质量好于其它四种石斛。     

铁皮石斛的SCAR标记研究

目的:建立快速准确的铁皮石斛DNA分子鉴定方法。方法:采用RAPD方法对11种石斛进行多态性分析,获得铁皮石斛特异的RAPD分子标记片段;经克隆、测序,重新设计一对特异性引物转化成稳定的SCAR标记。结果:获得了1条稳定扩增的铁皮石斛特异的片段DS-302,序列测定结果表明,全长302 bp,通过BLAST搜索、同源性比较,结果表明该段序列与已知数据库中的所有序列无显著同源性。根据该序列设计1对特异引物,对11种石斛进行扩增,可在铁皮石斛中扩增获得约300 bp的片段,而石斛属其他种未出现该条带。结论:DS-302成功转化为SCAR分子标记,可对铁皮石斛进行快速有效的鉴定。     

铁皮石斛组织培养研究进展

铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex lindl）又名黑节草、铁皮兰,为多年生附生型草本植物,属国家2级保护的名贵濒危药材[1],《神农本草经》列为上品[2],在《本草纲目》中也被收录。现代药理研究表明,石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的功效[3]。由于受特殊的生物学及生态学特性限制,其自然繁殖力极低、     

声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响

目的:测定特定的声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响程度。方法:以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量。结果:连续刺激24天后多糖含量明显高于对照组。结论:特定的声波刺激可以明显地促进铁皮石斛多糖的合成,对石斛多糖代谢途径有显著的影响。