TNF-α,G-CSF调节CD3AK细胞诱导的HL-60凋亡

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNF α) ,粒细胞集落刺激因子 (G CSF)对CD3AK细胞诱导HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖电泳 ,原位末端标记法分别检测HL 6 0自然凋亡率、CD3AK细胞诱导的HL 6 0凋亡率、TNF α和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率、G CSF和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率。结果 :HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.6 0± 2 .17) % ;CD3AK细胞诱导HL 6 0细胞凋亡率 (2 7.38± 4 .91) % ;TNF α和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率 (33.0 9± 5 .2 2 ) % ;G CSF和CD3AK(7.35± 2 .2 6 ) % (F =96 .80 ,P <0 .0 1)。结论 :TNF α加强CD3AK细胞诱导的HL 6 0凋亡 ,G CSF抑制CD3AK诱导的HL 6 0凋亡     

脐血CD3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡的作用。方法 :用细胞形态学观察、DNA琼脂糖电泳、原位末端标记法检测K5 6 2、HL 6 0细胞。结果 :K5 6 2细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,脐血CD3AK诱导的K5 6 2细胞凋亡率 (2 7.40± 4.6 4) % ;HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.10± 1.10 ) % ,脐血CD3AK诱导的HL 6 0细胞凋亡率(2 1.10± 3 .82 ) % ,均有显著性差异。结论 :脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡 ,而且诱导K5 6 2凋亡的能力更强。     

CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的探讨CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的效果.方法用细胞形态学观察,DNA琼脂糖电泳,原位末端标记法分别检测Jurkat自然凋亡率和CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率.结果 Jurkat细胞自然凋亡率为(4.60±2.17)%;CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率为(27.38±4.91)%,两者之间具有显著性差异(t=15.1P＜0.01).结论 CD3AK细胞能诱导白血病Jurkat细胞凋亡.     

TNF-α对K_(562)细胞细胞毒作用的实验研究

为探讨肿瘤坏死因子 α(TNF- α)对 K5 6 2 细胞的细胞毒作用 ,应用原位末端标记法、细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测分析 K5 6 2 ,经 TNF- α(5 0 ng/ml、1 0 0 ng/ml、1 0 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 。结果显示 ,K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,TNF- α(5 0 ng/m l、1 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 细胞凋亡率分别是 (2 1 .35± 4.46 ) %、(2 7.38±4.91 ) % ,差异有显著性 (P<0 .0 1 ) ;TNF- α(1 0 0 0 ng/ml)诱导 K5 6 2 细胞坏死。说明小剂量 TNF- α诱导 K5 6 2 细胞凋亡 ,大剂量 TNF- α诱导 K5 6 2 细胞坏死     

从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

内毒素诱导小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡不依赖TNF-α的研究

目的 :探讨内毒素 (脂多糖 ,LPS)诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞 (AECⅡ )凋亡的分子机制 ,LPS介导的AECⅡ凋亡是否需要肿瘤坏死因子 α(TNF α)的参与。　方法 :采用文献方法加以修改而建立小鼠 (C5 7、TNFKO)AECⅡ体外培养模型 ,采用LPS和重组小鼠TNF α刺激细胞 2 4h后观察。用ELISA法测定细胞培养上清中TNF α水平 ,而细胞凋亡检测采用TNUEL法。　结果 :①LPS诱导AECⅡ细胞凋亡在C5 7野生型小鼠呈剂量依赖关系 ,LPS 5 0 μg/ml刺激时 ,细胞凋亡率为 (2 2 .7± 2 .1 ) % ,对照组为 (6 .4± 0 .9) % ,P <0 .0 5 ;②LPS在诱导AECⅡ凋亡的同时 ,诱导TNF α水平升高 1 1倍 ;③大剂量的重组TNF α并不能明显诱导AECⅡ凋亡 ;④在TNF基因剔除 (knockout,KO)小鼠 ,LPS仍可明显诱导AECⅡ凋亡。　结论 :①在体外培养条件下 ,LPS可明显诱导AECⅡ凋亡 ;②LPS刺激的TNF α释放并不参与LPS介导的AECⅡ凋亡 ;③LPS诱导的AECⅡ凋亡是通过TNF α非依赖机制进行的     

米非司酮对早孕蜕膜中TNF-α和NK细胞亚群的影响

①目的　观察应用米非司酮终止妊娠后子宫蜕膜中肿瘤坏死因子α(TNF α)和自然杀伤 (NK)细胞亚群 (CD+ 56CD-16,CD+ 56CD+ 16,CD-56CD+ 16)的变化 ,探讨米非司酮致流产的免疫作用机制。②方法　 4 0例早孕药物流产妇女 ,给予口服米非司酮 2d ,总量 15 0mg ,第 3天加服米索前列醇 6 0 0 μg .采用流式细胞技术对蜕膜组织中NK细胞亚群CD+ 56CD-16,CD+ 56CD+ 16,CD-56CD+ 16及TNF α的表达进行检测。并与 4 0例同孕龄的人工流产妇女 (对照组 )对照。③结果　药物流产组CD+ 56CD-16,CD+ 56CD+ 16,CD-56CD+ 16的百分比分别为 (2 9.2 2± 8.0 5 ) % ,(7.2 4± 4 .11) % ,(10 .0 2± 3.10 ) % ,对照组分别为 (15 .87± 5 .31) % ,(4.34± 1.98) % ,(5 .82± 2 .34) % ,二者比较差异均有显著性(t=4 .0 2 0～ 8.75 5 ,P <0 .0 1)。TNF α的表达程度药物流产组为 (34.4 5± 7.6 5 ) % ,对照组为 (2 1.6 4± 7.4 3) % ,二者比较差异有显著性 (t=7.5 97,P <0 .0 1)。④结论　米非司酮主要作用于早孕母胎界面 ,可使蜕膜中NK细胞和TNF α表达增加 ,从而导致局部免疫微环境的变化 ,诱导胎儿免疫排斥反应 ,这可能是米非司酮致流产的免疫机制之一。     

用重组大肠杆菌生产rhG-CSF高密度发酵的方法

目的 :优化重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)的生产工艺 ,了解菌体生长和产物合成规律 ,为rhG CSF的工业化生产提供依据 .方法 :以摇瓶发酵的研究结果为基础 ,在 5L发酵罐中 ,测定工程菌rhG CSF的生长曲线 ,根据在不同pH值、溶氧和诱导时机时工程菌生长的情况 ,研究重组大肠杆菌DH5(/pBV2 2 0生产rhG CSF分批补料培养的工艺条件 ,确定 5L发酵罐稳定的发酵工艺参数 .结果 :培养工程菌的优化条件为 :发酵前期流加 2mol/L的氢氧化钠控制pH值为 7.2 ,当开始诱导表达时 ,控制pH为 6 .8;溶氧水平控制在 5 0 %以上 ;选择菌体在对数生长中期A60 0nm值为 1 2 .0进行诱导表达 .在此优化的培养条件下 ,菌体A60 0nm值达到 (2 1 .3± 0 .9) ,细胞干质量可达 (1 2 .3± 0 .7)g/L ,细胞湿体积质量为 (4 3.8± 0 .9)g/L ,rhG CSF的表达量为 (4 1 .9± 1 .6 ) % .结论 :pH值、溶氧和诱导时机等培养条件对工程菌生长和表达有显著影响     

TNFα在血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨TNFα引起的血管内皮细胞（VEC）凋亡在皮肤撕脱伤早期血栓形成中的作用. 方法分2组,实验组:内皮细胞(EC)+TNFα,拮抗组：用EC+TNFα+TNFα抗体处理. 采用流式细胞仪分别测定实验组TNFα不同时间、不同浓度以及拮抗组EC凋亡率. 结果 EC凋亡率随TNFα作用时间增加,0～48 h EC凋亡率为(2.6±0.42)%～(40.5±8.3)%;EC凋亡率也随TNFα浓度而增加,0～3000 u*mL-1 EC凋亡率分别为(2.6±0.42)% ～(13.7±2.6)%;TNFα抗体明显拮抗TNFα诱导的EC凋亡（P<0.01）. 结论 TNFα可引起EC的凋亡和死亡,具有时间依赖性和浓度依赖性,人重组TNFα单抗可消除因TNFα引起的毒性作用.     

负载冻融抗原的DC诱导特异性CTL杀伤U937细胞的实验研究

目的　探讨树突状细胞 (DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,使其对U937细胞产生特异性杀伤作用。方法　应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 )、基因重组人粒 /单细胞集落刺激因(rhGM CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载U937冻融抗原 ,致敏T淋巴细胞 ,产生CTL。观察负载U937冻融抗原的DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞的特异性杀伤活性。结果　负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,CD86、CD11c、HLA DR表达也较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,而CD83、CD14与培养前相比无明显变化 (P >0 .0 5 )。且负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中 ,CD3+ CD8+ T细胞比例较诱导前明显增高 (P <0 .0 1)。U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K5 6 2细胞的杀伤率分别为 (6 6 .96± 6 .2 1) %和 (9.81± 4 .4 5 ) % ,两者有极显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　经rhGM CSF、rhIL 4培养产生的DC为CD14 -CD1a+ 的DC ,能诱导CTL产生明显的特异性杀伤作用 ;负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中的CD3+ CD8+ T细胞比例明显增高 ,提示CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

电针足三里对溃疡性结肠炎大鼠TNF-α的下调作用

目的 :探讨电针足三里穴对溃疡性结肠炎 (ulcera tivecolitis,UC)大鼠肿瘤坏死因子 α(TNF α)的调节作用及机制 .方法 :将 32只SD大鼠随机分为 4组 :正常对照组 ,UC模型对照组 ,UC模型 +针穴组 ,UC模型 +非穴组 .在诱导产生UC大鼠模型的基础上 ,分别电针其相应部位 ,1 0d后同时处死 4组大鼠 ,观察其结肠质量、结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性及TNF αmRNA表达水平、血清TNF α含量的变化 .结果 :与正常对照组相比 ,UC模型对照组结肠质量 /体质量 (mC/mB)及MPO活性均显著增加 (8.5 3± 2 .5 9vs 2 .4 6± 0 .4 2 ,1 4 5 .2± 2 5 .3vs 2 4 .3± 7.8,P <0 .0 1 ) ;血清TNF α含量和结肠组织TNF αmRNA表达水平分别上升 2 .5倍及 4 .3倍 (2 2 78± 1 70vs 894± 2 4 8,0 .98± 0 .1 1vs 0 .2 3±0 .1 1 ,P <0 .0 1 ) ;电针足三里穴后 ,mC/mB 和MPO活性显著降低 (5 .2 9± 2 .0 4vs 8.5 3± 2 .5 9,1 0 3.5± 35 .7vs 1 4 5 .2± 2 5 .3,P <0 .0 1 ,0 .0 5 ) ;TNF α含量和TNF αmRNA表达水平也分别减少 1 6 %和 4 4 % (1 91 3± 2 32vs2 2 78± 1 70 ,0 .5 5± 0 .1 3vs0 .98± 0 .1 1 ,P <0 .0 1 ) .非穴组与UC模型对照组相比无统计学显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :电针足三里穴能够良性下调TNF α生成     

粒细胞集落刺激因子对THP-1细胞Toll样受体4 mRNA表达的影响

目的　观察不同浓度不同时间下粒细胞集落刺激因子 (G CSF)刺激后 ,THP 1细胞表达Toll样受体 4mRNA以及细胞因子TNF α的变化。方法　实验采用人THP 1细胞 ,以 5 0、5 0 0及 10 0 0ng/mL的G CSF分别刺激 4和 2 4h ,继而以 10ng/mL内毒素刺激 4 5min。以RT PCR法分析Toll样受体 4 (TLR4 )mRNA水平 ,ELISA法测定细胞因子TNF α。结果　细胞经G CSF刺激后TLR4基因表达增加 ,细胞分泌TNF α上升 ,且随着G CSF刺激浓度的增加 ,TNF α分泌随之增加。刺激 2 4与 4h比较 ,TNF α分泌也有增加。结论　G CSF可刺激THP 1细胞TLR4mRNA表达及TNF α分泌 ,且其增加程度与G CSF刺激浓度及刺激时间呈正性相关     

CD3AK和黄芪多糖联合治疗荷瘤动物的实验研究

目的　探讨CD3AK和黄芪多糖 (APS)对荷瘤动物的治疗作用。方法　将黑色素瘤B1 6细胞移植到C57BL/ 6小鼠腹腔建立动物模型 ,分别用APS、CD3AK及二者联合治疗荷瘤鼠 ,检测荷瘤鼠脾NK细胞活性和脾淋巴细胞IL - 2诱生水平以及荷瘤鼠生存期。结果　单纯APS和单纯CD3AK细胞能延长荷瘤鼠的生存期 ,分别为 1 8.64± 1 .2 1天和 2 5 .34± 3 .68天 (荷瘤鼠对照组为 1 4 .67± 2 .82天 ,P <0 .0 1 ) ;二者联合应用 ,APS能显著增强CD3AK细胞的抗肿瘤作用 ,延长荷瘤鼠的生存期 ,其生存期为 35 .65± 3 .74天 (P <0 .0 0 1 )。通过对荷瘤鼠进行细胞免疫功能观察发现 ,CD3AK细胞和APS均具有抵抗荷瘤鼠NK细胞活性、IL - 2产生能力下降的作用 ;APS对CD3AK仍有显著增强效应。结论　APS是一种实用而有效的生物反应调节剂 ,CD3AK和APS联合应用对晚期肿瘤有一定治疗效果     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

rhTNF-α联合bcl-2反义寡核苷酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60增殖与凋亡的作用

目的　探讨基因重组人类肿瘤坏死因子 α(rh TNF- α)和 bcl- 2反义寡核苷酸 (ASPO)对 HL- 6 0细胞增殖与凋亡的作用 ,进一步认识肿瘤坏死因子 α(TNF- α)和 bcl- 2两者调控肿瘤细胞凋亡的作用及相互联系。　方法　单独和联合应用 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO处理 HL- 6 0细胞 ,通过 MTT法检测 HL- 6 0细胞生长和存活特性变化 ;原位细胞凋亡检测和流式细胞技术检测细胞凋亡 ;应用 RT- PCR、免疫组织化学检测癌基因 bcl- 2表达的改变。　结果　 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO的联合应用明显增强对 HL- 6 0细胞的增殖抑制 ;细胞凋亡率明显升高 ;癌基因bcl- 2在 m RNA和蛋白表达明显下降。　结论　 TNF和 bcl- 2 ASPO在诱导 HL- 6 0细胞凋亡中可能存在协同作用 ,为血液肿瘤的联合治疗提供了新的途径     

慢性重型乙型肝炎血清GM-CSF测定及其意义

目的 :探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (granulocyte macrophagecolonystimulatingfactor,GM CSF)和肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor,TNF α)之间的相关性及其在重型乙型肝炎发病中的作用。方法 :应用酶联吸附试验(ELISA)同期检测重型乙型肝炎、慢性乙型肝炎和健康献血员各 2 0例。结果 :GM CSF和TNF α水平与对照组比较 ,重型肝炎组和慢性肝炎组血清GM CSF水平分别升高至 9.8± 1.2 3(P <0 .0 5 )和 8.36± 1.89(P <0 .0 5 )。在重型肝炎组中 ,血清GM CSF水平与TNF α水平 (r=0 .4 2 6 8,P <0 .0 5 )呈显著正相关。结论 :GM CSF与重型乙型肝炎发病关系密切 ,其机制可能与内毒素血症密切相关 ;GM CSF在慢性乙型肝炎肝损害中能起到免疫激活作用 ,通过激活免疫反应 ,间接造成肝损害     

铁超载与铁剥夺对VP-16诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载与铁剥夺对依托泊甙 (VP 1 6)诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :选择 1 0 0 μmol/LFeCl3和 1 0 μmol/L去铁胺 (DFO)与VP 1 6共同作用于HL 60细胞 ,并以单用VP 1 6作对照。光镜观察HL 60细胞形态学变化、DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察铁超载与铁剥夺对VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡的影响。结果 :①FeCl3(1 0 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L) 6h ,1 2h ,2 4h ,细胞凋亡率(APO % )和亚二倍体峰 (Sub G1 ) ,低于单用VP 1 6(1 0 0mg/L)组 ,2组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5)。DNA电泳显示ladder出现时间滞后、数目减少。②DFO(1 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L )组APO %、DNA电泳ladder数目、Sub G1均比单用VP 1 6高 (P <0 .0 1 )。③等量的DFO与FeCl3和VP 1 6(1 0 0mg/L)与单用VP 1 6(1 0 0mg/L)结果相同。结论 :铁超载抑制化疗药物VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺可促进VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 ,白血病患者补铁应慎重     

慢性髓性白血病来源的树突状细胞的体外扩增培养

目的 :探讨慢性髓性白血病 (CML)来源的树突状细胞 (DC)的体外扩增及其功能 .方法 :采用两步法 ,首先将慢性髓性白血病骨髓或外周血CD34+ 细胞与rhFlt3 L和rhTPO共育 7d,再用rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4诱导培养1 4d ;同时以rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4直接诱导体系作对照 .获得的DC通过免疫表型检测、电镜分析及染色体鉴定 ,并用MTT法检测其刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细胞的杀伤作用 .结果 :两步法培养 2 1d ,CML的CD34+ 细胞扩增 (76 . 5 6± 5 . 1 7)倍 ,DC产率 (39. 1 0± 8. 0 3) % ,直接诱导产生DC扩增倍数及比例均低于两步法 (P <0 . 0 1 ) ,且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖进而杀伤CML细胞 .结论 :两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率 ,优于直接诱导培养 ;CML细胞来源的DC可诱导抗白血病免疫应答的产生     

放射线诱导内皮细胞分泌肿瘤坏死因子α的实验研究

目的 :观察照射后内皮细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF α)及地塞米松的影响。方法 :人脐静脉内皮细胞株ECV - 30 4细胞加或不加地塞米松 (10 μg/ml)γ射线照射后 ,取上清液以MTT法检测TNF α的细胞毒活性。结果 :内皮细胞受照射后 ,其培养液中可检测到TNF α的细胞毒活性增加 ,在 5Gy时活性最高〔(2 74.3± 2 .3)u/m〕 ,地塞米松存在时TNF α活性降低〔分别为 (3.6± 1.5 )u/ml,(2 74.3± 2 .3)u/ml,P<0 .0 1〕。结论 :γ射线可诱导内皮细胞分泌TNF α ,并被地塞米松抑制。     

地方性甲状腺肿组织中细胞凋亡的检测

目的 :探讨地方性甲状腺肿病变中细胞凋亡发生的意义。方法 :利用DNA末端标记法 (TUNEL法 )检测2 5例地方性甲状腺肿、43例甲状腺癌、15例甲状腺腺瘤、11例癌旁甲状腺组织中的凋亡细胞 ,计算其凋亡率。结果 :地方性甲状腺肿、甲状腺癌、甲状腺腺瘤、癌旁甲状腺组织的细胞凋亡率分别为 :(9.81± 4.36 ) %、(17.73± 6 .6 2 ) %、(12 .43± 3.6 9) %、(11.37± 6 .6 9) % ,其中地方性甲状腺肿的细胞凋亡率低于甲状腺癌 (P <0 .0 1) ,地方性甲状腺肿、甲状腺腺瘤、癌旁甲状腺组织各组间凋亡率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡与增殖的平衡在地方性甲状腺肿病变的发生发展中起着重要作用