尿酸利仙含药血清对TNF-α诱导的人血管内皮细胞ICAM-1基因表达的影响

目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在不同时闻对人血管内皮细胞（Endothelial cell of vessels，ECV）中细胞间粘附分子-1（ICAM-1）基因表达的影响及中药尿酸利仙（含药血清）的干预作用。方法：①体外培养人血管内皮细胞，分别用不同浓度（12．5、25、50μg／mL）的TNF-α刺激，并用25μg／mL的TNF-α分别孵育细胞8、16、24、48h；②用25μg/mL的TNF-α孵育细胞16h，同时用含不同浓度（2．5％、5％、10％）尿酸利仙含药血清的培养液进行干预。用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术测定血管内皮细胞ICAM-1的mRNA表达。结果：①低、中、高浓度TNF-α刺激均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达，且体现了一定的浓度梯度关系，但刺激组间无显著性差异。②25μg／mL的TNF-α在8h、16h、24h和48h均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达，各干预组间无显著性差异。③低、中、高浓度的尿酸利仙含药血清干预均可显著降低ICAM-1 mRNA的表达（P≤0．01），并以中浓度尿酸利仙含药血清作用最为显著。结论：TNF-α能显著上调内皮细胞表面黏附分子ICAM-1的mRNA表达，而尿酸利仙含药血清抑制病理条件下ICAM-1基因水平的过量表达，可能是其减轻TNF-α诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一。     

尿酸利仙含药血清对TNF-α诱导的人血管内皮细胞ICAM-1基因表达的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在不同时间对人血管内皮细胞(Endothelial cell ofvessels,ECV)中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响及中药尿酸利仙(含药血清)的干预作用。方法:①体外培养人血管内皮细胞,分别用不同浓度(12.5、25、50μg/mL)的TNF-α刺激,并用25μg/mL的TNF-α分别孵育细胞8、16、24、48h;②用25μg/mL的TNF-α孵育细胞16h,同时用含不同浓度(2.5%、5%、10%)尿酸利仙含药血清的培养液进行干预。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定血管内皮细胞ICAM-1的mRNA表达。结果:①低、中、高浓度TNF-α刺激均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,且体现了一定的浓度梯度关系,但刺激组间无显著性差异。②25μg/mL的TNF-α在8h、16 h、24 h和48 h均可显著上调内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,各干预组间无显著性差异。③低、中、高浓度的尿酸利仙含药血清干预均可显著降低ICAM-1 mRNA的表达(P≤0.01),并以中浓度尿酸利仙含药血清作用最为显著。结论:TNF-α能显著上调内皮细胞表面黏附分子ICAM-1的mRNA表达,而尿酸利仙含药血清抑制病理条件下ICAM-1基因水平的过量表达,可能是其减轻TNF-α诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一。     

溶栓颗粒含药血清对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF表达影响的研究

目的：探讨溶栓颗粒含药血清对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF表达的影响。方法：用TNF-α损伤大鼠脑皮质微血管内皮细胞（BMECs）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒和中等剂量阿托伐他汀的大鼠血清干预受损的BMECs,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。结果：TNF-α可以造成BMECs损伤,表现细胞数量下降、皱缩;受损细胞的VEGF表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒和阿托伐他汀的大鼠血清能减少VEGF表达,阿托伐他汀的这一作用与大剂量溶栓颗粒相当。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞的VEGF表达,可能是其减缓动脉粥样硬化形成的作用机制之一。     

冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞细胞周期及其分泌VEGF的影响

目的:探讨冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞周期和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响.方法:离体培养人脐静脉内皮细胞,设空白组、含药血清大、中、小剂量组和bFGF组.流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法及逆转录聚合酶链反应(RT - PCR)观察各组内皮细胞分泌VEGF及VEGF-mRNA表达量的变化.结果:冠心合剂含药血清可以增加细胞周期中S期细胞数目,以小剂量组作用明显(P＜0.01);可以促进细胞分泌VEGF,并使VEGF-mRNA表达增加,其中小剂量组作用明显(P＜0.05).结论:冠心合剂促血管新生作用可能与促进血管内皮细胞VEGF的表达与释放有关.     

辛夷挥发油对内皮细胞黏附功能的影响

目的:探讨辛夷挥发油对内皮细胞黏附功能的影响。方法:利用TNF-α诱导活化的内皮细胞与人外周血中性粒细胞的体外黏附实验,观察辛夷挥发油对其黏附功能的影响。结果:体外培养的人脐静脉内皮细胞在TNF-α刺激后,与人外周血中性粒细胞发生黏附,而辛夷挥发油处理后,黏附量明显降低,(均P<0.05)。结论:辛夷挥发油能抑制活化的人内皮细胞与中性粒细胞的黏附,具有抗炎与抗黏附效应。     

中药含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的观察中药尿酸利仙(含药血清)对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞(endothelial cell of vessels, ECV)细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule,ICAM-1)基因和蛋白表达的影响.方法1070μmol/L尿酸盐溶液刺激血管内皮细胞,同时用含不同浓度(2.5%、5.0%、10.0%)中药含药血清的培养液进行干预,分别用流式细胞术(FCM)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定细胞ICAM-1的表达.结果①血管内皮细胞在尿酸盐刺激下,ICAM-1基因和蛋白表达均较空白对照组显著上调.② 5.0%浓度中药尿酸利仙含药血清可显著抑制尿酸盐诱导的血管内皮细胞ICAM-1基因表达(P＜0.01);2.5%、10.0%浓度的尿酸利仙含药血清均可显著抑制ICAM-1蛋白表达(P＜0.01).结论中药尿酸利仙含药血清抑制ICAM-1表达的作用是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一.     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。     

肿节风对尿酸盐诱导的内皮细胞IL-1表达的影响

目的：探讨肿节凤对尿酸盐诱导的血管内皮细胞表达IL-1的干预作用。方法：用尿酸盐刺激内皮细胞24小时,并用肿节风进行干预,设立对照组、单纯刺激组、刺激 干预组。用酶联免疫法,在全自动酶标仪上测定内皮细胞培养上清液中IL-1的表达,用MTT法观察细胞活力。结果：对照组与刺激组、刺激组与2%、3%浓度干预组比较统计学处理差异有显著性(P＜0．05),2%、3%浓度肿节风能够降低尿酸盐诱导的内皮细胞表达IL-1,刺激 干预组与正常组比较,IL-1水平仍明显升高(P＜0．05)。MTT观察结果显示,不同浓度肿节风干预对尿酸盐引起的内皮细胞活力下降无明显改善作用(P＞0．05)。结论：尿酸盐能显著促进体外培养的内皮细胞表达IL-1,肿节风对尿酸盐引起的炎症介质IL-1升高有抑制作用,阻断了炎症的级联反应,从而达到保护内皮细胞的作用。     

牛黄参含药血清诱导大鼠肝干细胞分化及调控机制的研究

目的:研究牛黄参含药血清对大鼠肝干细胞系WB-F344增殖、分化及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度含药血清对WB-F344增殖的影响;取增殖的最佳浓度,Westernblot检测含药血清对WB-F344细胞因子HGFR、EGF、EGFR、TGFβ1R、TGFβ2R表达的影响;流式细胞仪检测含药血清对WB-F344细胞凋亡的影响。结果:MTT结果显示10%、20%浓度的含药血清均能促进WB-F344细胞的增殖,且以10%为增殖的最佳浓度(P<0.01);Westernblot结果显示经10%的含药血清干预后,WB-F344细胞HGFR、EGF、EGFR、TGF-β1R、TGF-β2R的表达量上调(P<0.01);流式细胞仪检测结果则显示含药血清干预后WB-F344细胞凋亡率显著下降(P<0.01)。结论:牛黄参含药血清可促进大鼠肝干细胞的增殖、分化,并抑制其凋亡,这可能是其抗肝损伤、促进肝再生的作用机理之一。     

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞表型保护作用的研究

目的：探讨复方积雪草含药血清对炎症介质诱导的肾小管上皮细胞表型转化的干预作用。方法：用IL-1β（10ng／m1）刺激原代小鼠肾小管上皮细胞，并用低、中、高浓度复方积雪草含药血清进行干预。应用MTT法测定复方积雪草含药血清的细胞毒性；Western-blottlng和逆转录-聚合酶链反应（RT-PER）分别测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白和基因表达。结果：IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加，基因表达亦显著上调；各个浓度的复方积雪草含药血清干预均可显著降低α-SMA、Vimentin蛋白质、基因的表达。结论：复方积雪草含药血清可抑制免疫炎症因子诱导的肾小管上皮细胞表型转化，从而在防治肾小管间质纤维化中发挥其作用。     

降糖通脉方对葡萄糖、胰岛素和氧化低密度脂蛋白诱导损伤的血管内皮细胞ET-1、NO的影响

目的:观察降糖通脉方对由葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐带静脉内皮细胞损伤模型为受试对象,观察降糖通脉方(JTTMF)对该损伤细胞膜型的保护作用。各实验组细胞分别施加不同处理因素48小时后,观察各组细胞活性及细胞培养液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量的变化。结果:各组细胞继续培养48小时后,模型组细胞活力较正常组明显下降(P<0·01),NO含量明显下降(P<0·05),ET-1含量明显升高(P<0·05),而不同剂量的JTTMF用药后可以显著地改善细胞活力(P<0·05),显著升高NO含量(P<0·01),抑制ET-1分泌(P<0·05)。结论:降糖通脉方具有一定的保护血管内皮细胞的作用,可能与调节血管舒缩功能有关。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF、Ang-2基因表达的影响

目的:观察芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)VEGF、 Ang-2基因表达的影响,探讨芎芍胶囊促血管新生的作用机制.方法:芎芍胶囊高、中、低不同剂量含药血清作用于HUVEC,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法观察细胞增殖情况,RT-PCR法检测VEGF、Ang-2 mRNA的表达.结果:芎芍胶囊含药血清各剂量组均有促HUVEC增殖作用(P<0.01),高剂量组具有显著促进VEGF表达作用(P<0.01);而中、低剂量组作用不明显;高、中剂量组具有明显抑制Ang-2表达作用(P<0.05～0.01),低剂量组的作用不明显.结论:芎芍胶囊可促进VEGF的表达,降低Ang-2的表达,其促血管新生作用机制与此两条通路有关.     

姜黄素对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞FKN表达的干预作用

目的:观察姜黄素对TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的不规则趋化因子(Fractalkine,CX3CL1,FKN)表达的影响。方法:MTT法筛选HUVEC的姜黄素最佳药物浓度,检测不同浓度TNF-α对HUVEC FKNmRNA表达的上调作用,比较不同时间段TNF-α0.5ng/ml对HUVEC FKNmRNA表达的影响,比较0~5μmol/L姜黄素联合TNF-α0.5ng/ml对HUVEC FKNmRNA表达的影响,荧光定量PCR和Western-blot检测FKNmRNA及蛋白质水平变化。结果:MTT法筛选出HUVEC的姜黄素最佳药物浓度为5μmol/L,0.5ng/ml TNF-α能明显提高HUVEC FKNmRNA表达,刺激16小时0.5ng/ml TNF-α能显著增加HUVEC FKNmRNA表达量,荧光定量PCR及Western-blot检测表明姜黄素2~5μmol/L联合TNF-α0.5ng/ml能明显抑制HUVEC FKNmRNA的表达量及蛋白质表达水平。结论:Cur可抑制TNF-α刺激HUVEC的FKNmRNA及蛋白表达。     

黄药子及配伍当归含药血清对肝细胞毒性的实验研究

目的:观察分析黄药子及配伍当归含药血清对体外培养肝细胞存活率和GPT、GOT、LDH酶活性的影响。方法:采用体外实验法,待肝细胞贴壁生长后,加入含药和空白血清,使其终浓度为20%,检测GPT、GOT、LDH活性;同步以MTT法计算细胞相对存活率并观察肝细胞形态。结果:黄药子组正常肝细胞存活率明显下降,与空白组有显著性差异(P<0.05),配伍组细胞的存活率明显提高,与空白组无显著性差异(P>0.05);黄药子组GOT、GPT、LDH活性与空白组比明显升高(P<0.01),而配伍组LDH、GOT、GPT的活性受到抑制,与空白组无显著性差异(P>0.05)。结论:黄药子对正常大鼠肝细胞有明显细胞毒性,而当归对肝细胞有一定的保护作用。     

养心颗粒含药血清对血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察养心颗粒对血管内皮细胞增殖的影响,探讨其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制。方法：将wistar大鼠35只随机分成空白对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、通心络组。采用MTT法检测养心颗粒含药血清对血管内皮细胞增殖的影响。结果：养心颗粒可促进血管内皮细胞的增殖,且养心颗粒高剂量组效果最好,与其它组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：养心颗粒可以改善血管内皮系统功能障碍,促进心肌缺血时血管内皮细胞的增殖。     

尿酸利仙含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞VCAM-1 mRNA表达的影响

目的：观察中药尿酸利仙（含药血清）对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞（Endothelial cell of vessels，ECV）血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）mRNA表达的影响。方法：①体外培养人血管内皮细胞，用终浓度为1070μmol／L的尿酸盐溶液刺激，同时用低、中、高浓度（2．5％、5％、10％）尿酸利仙含药血清的培养液进行干预，用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）技术测定细胞VCAM-1的mRNA表达。结果：尿酸盐可诱导血管内皮细胞VCAM-1的mRNA高表达，差异有极显著的统计学意义（P〈0．01）；各浓度尿酸利仙含药血清干预组细胞VCAM-1的mRNA表达均较尿酸盐刺激组下降，差异有统计学意义。结论：尿酸利仙含药血清可抑制VCAM-1过度表达，是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤及抑制炎症反应的机制之一。     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的大鼠GMC增殖的影响

目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的肾小球系膜细胞增殖的影响,探讨其可能机制。方法:分离培养大鼠GMC,用10-6mol/LAngⅡ刺激GMC,将培养的大鼠GMC随机分为5组:正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度(15、10、5μg/L)的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用MIT法及流式细胞术检测大鼠GMC增殖及细胞周期的变化。结果:雷公藤内酯醇能抑制AngⅡ介导的大鼠GMC增殖,降低S G2/M期细胞比例,其中以高浓度雷公藤内酯醇作用最强(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠GMC增殖。     

含药血清对不同条件下培养视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的 探讨含眼科十四号中药血清对不同条件诱导的牛视网膜血管内皮细胞（BREC）增殖的影响。方法 用MTT法检测含眼科十四号鼠血清对建立的慢性缺氧条件和bFGF刺激下BREC的增殖变化。结果 含眼科十四号鼠血清对不同条件下培养BREC均有明显抑制作用，其抑制率呈量效和时效关系。结论 含眼科十四号鼠血清对慢性缺氧和bFGF刺激下BREC的增殖有明显抑制作用。为中药复方治疗视网膜新生血管形成提供参考。     

化瘀祛痰颗粒剂含药血清对LPS诱导大鼠内皮细胞p65表达的影响

目的:通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞p65mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT—PCR方法观察各组p65mRNA表达情况;用WestenBlot方法检测p65蛋白表达情况。结果:与空白组比较,阳性对照组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05);血清各组在影响p65蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响p65mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。结论:化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制核因子KB,减少炎症因子的基因表达起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF及ICAM-1影响的研究

目的:探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF及ICAM-1表达的影响。方法:用TNF-α(40ng/mL)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降、皱缩、分裂相细胞明显增加;受损细胞的VEGF、ICAM-1表达明显增多;含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少VEGF、ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论:溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞VEGF、ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成,并对稳定动脉粥样斑块稳定性有积极作用。