七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)时心肌细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠48只,随机分4组(n=12),制备离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注30 min后,C组灌注K-H液120 min;IR组缺血30 min,K-H液再灌注90 min;缺血后处理组(IP组)缺血30 min后行4个循环复灌20 s/缺血20 s,再灌注K-H液;七氟醚后处理组(SP组)缺血30 min后灌注含七氟醚的K-H液5 min,K-H液冲洗10 min,再灌注K-H液.IP组和SP组再灌注总时间90 min.灌注期间测定心功能,灌注结束时取心脏测定心梗面积、Bcl-2、细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平,计算心肌细胞凋亡指数(AI).结果 与C组比较,其余各组左心室最大上升或下降速率(±dp/dt)、左心室发展压(LVDP)、HR降低,左心室舒张末压(LVEDP)和AI升高,Bel-2、细胞色素C和Caspase-3蛋白表达上调(P<0.05);与IR组比较,IP组和SP组±dp/dt、LVDP升高,LVEDP和AI降低,心梗面积减小,Bcl-2表达上调,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达下调(P<0.05).结论 七氟醚后处理可减少大鼠离体心脏IR时心肌细胞凋亡,其机制与其下调细胞色素C和Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2表达有关.     

七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤线粒体细胞色素C释放的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响.方法 40只SD大鼠应用随机数字表法随机分为4组(每组10只):对照组(C组),0.75％、1.5％、3.0％七氟烷预处理组(S1、S2、S3组).应用Langendorff离体心脏灌注模型,经主动脉用Krebs-Henseleit( K-H)液逆行灌注.各组均缺血30 min,再灌注60 min.S1、S2、S3组在缺血前分别以含相应浓度七氟烷的K-H液灌注10 min,再冲洗5 min,重复2次.记录平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30、60 min时的心功能指标.再灌注60 min时用DNA原位末端缺口标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling,TUNEL)测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,免疫印迹法测定线粒体和胞浆的细胞色素C水平.结果 与C组比较,S1、S2、S3组再灌注30、60 min时左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)降低、左室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)升高(P＜0.05);与C组比较,S1、S2、S3组凋亡率明显下降(P＜0.05或0.01),再灌注末心肌细胞凋亡率C、S1、S2、S3组分别为(33.10±2.57)％、(28.03±3.11)％、(25.20±3.04)％、(24.06±2.58)％;与C组比较,S1、S2、S3组心肌线粒体细胞色素C释放减少,胞浆细胞色素C的量明显降低(P＜0.05或0.01).结论 七氟烷预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞浆,降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌I/RI.     

性别因素对七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨性别因素对七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 SD大鼠60只,雄雌各半,2月龄,雄性大鼠随机分为对照组(MC组)和七氟醚后处理组(MS组),雌性大鼠随机分为对照组(FC组)和七氟醚后处理组(FS组),每组15只.建立大鼠离体心脏灌注模型,采用全心缺血40 min,再灌注2 h的方法制备缺血再灌注模型.对照组心脏再灌注时给予含氧K-H缓冲液,七氟醚后处理组在复灌的前10min灌注经3%七氟醚饱和的含氧K-H缓冲液,余110 min灌注含氧K-H缓冲液.于缺血前、再灌注期间记录HR、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室发展压(LVDP),再灌注5 min时测定冠状动脉流出液LDH活性和心肌梗死面积,再灌注10 min时测定心肌总蛋白激酶B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达,计算p-Akt与t-Akt比值(p-Akt/t-Akt).结果 与MC组比较,MS组和FC组LVDP升高,LVEDP降低,冠状动脉流出液LDH活性降低,心肌梗死面积减小,心肌p-Akt表达上调,p-Akt/t-Akt升高(P＜0.05);与MS组比较,FS组LVDP降低,LVEDP和冠状动脉流出液LDH活性升高,心肌梗死面积增大(P＜0.05);FC组和FS组LVDP和LVEDP比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤存在性别差异,对雄性大鼠的心肌保护作用强于雌性大鼠,该差异可能与心肌Akt的活化水平有关.     

七氟醚后处理对离体大鼠心脏再灌注心律失常的影响

目的 探讨七氟醚后处理对离体大鼠心脏再灌注心律失常的影响.方法 雄性SD大鼠,2.5月龄,体重250～ 300 g,Langendorff装置制备离体心脏灌注模型30个,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=10):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚后处理组(S组).C组继续灌注K-H液55 min; I/R组和S组均停止灌注K-H液25 min,随后I/R组再灌注K-H液30 min;S组在再灌注初期灌注3％七氟醚饱和的K-H液15 min,然后灌注K-H液15 min.分别于缺血前(基础状态)、再灌注15、30 min时记录左室发展压(LVDP)、左室舒张末期压力(LVEDP)、左室内压上升最大速率(+ dp/dtmax)、左室内压下降最大速率(-dp/dtmin)和心率(HR),并记录再灌注期间心律失常的发生情况.于再灌注结束时收集冠脉流出液,测定心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;然后取心尖部组织,测定心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i).结果 与C组比较,I/R组LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmin和HR降低,LVEDP、cTnI浓度和[Ca2+]i升高(P＜0.05);与I/R组比较,S组LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmin和HR升高,LVEDP、室性早搏数量、室颤发生率、再灌注心律失常评分、cTnI浓度和[Ca2+]i降低,室性心动过速时程和室颤时程缩短(P＜0.05).结论 七氟醚后处理可降低离体大鼠心脏再灌注心律失常的发生,其机制与减轻细胞内钙超载有关.     

异氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨异氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法50只SD大鼠随机分为5组：对照组（C组）、缺血再灌注组（Ⅰ组）、0．5％、1．0％、2．0％异氟烷预处理组（P1、P2、P3组），每组10只。采用Langendorff离体心脏灌注模型，经主动脉用K-H液平衡灌注。除C组外，其余组均全心缺血30min再灌注60min。P1、P2、P3组在缺血前分别用含相应浓度异氟烷的KH液灌注15min，再用K-H液冲洗15min。记录平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30、60min时左室舒张末压（LVEDP）、左室收缩压（LVSP）、左室内压下降最大速率（dp／dtmin）、左室内压上升最大速率（dp，dtmax）、心率（HR）。再灌注60min时，计算心肌梗死面积百分比、线粒体和胞浆的细胞色素C水平。结果与C组比较，再灌注期间Ⅰ组LVEDP升高，LVSP、dp／dtmax、dp／dtmin降低，P1、P2、P3组LVEDP升高，I、P1组心肌梗死面积百分比升高，I、P1、P2组线粒体细胞色素C水平降低，胞浆细胞色素C水平增高；与Ⅰ组比较，P1、P2、P3组LVEDP及心肌梗死面积百分比降低，线粒体及胞浆细胞色素C水平增高，胞浆细胞色素C水平降低（P〈0．05或0．01）。P2组胞浆细胞色素C水平高于P1组；与P1、P2组比较，P3组线粒体细胞色素C水平增高，胞浆细胞色素C水平降低（P〈0．05）。结论通过抑制线粒体细胞色素C释放到胞浆。异氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

舒芬太尼后处理和七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价舒芬太尼后处理和七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重230～250 g,成功制备Langendorff离体灌注模型的40个心脏随机分为4组(n=10):缺血再灌注组(Ⅰ组)、七氟醚后处理组(Ⅱ组)、舒芬太尼后处理组(Ⅲ组)和七氟醚联合舒芬太尼后处理组(Ⅳ组).采用K-H液平衡灌注(灌注压10 kPa)30 min,全心缺血40 min再灌注120 min.再灌注即刻时Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组进行药物后处理15 min:Ⅱ组K-H液中通入3.0%七氟醚,Ⅲ组K-H液中加入100 nmol/L舒芬太尼,Ⅳ组同时进行七氟醚后处理和舒芬太尼后处理.分别于平衡灌注末(基础状态)、再灌注15 min、30 min、60 min、90 min、120 min时记录左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速率(-dp/dtmax)、心率(HR)和灌脉流量(CF).再灌注5 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性.再灌注120 min时取心肌组织,测定心肌梗死体积、Bcl-2和Bax的表达水平,并计算Bcl-2和Bax表达的比值(Bcl-2/Bax).结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组LVSP、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax和CF升高,LVEDP和LDH、CK的活性降低,心肌梗死体积缩小,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05或0.01);Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 舒芬太尼后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,联合七氟醚后处理时心肌保护作用并未增加,其心肌保护的机制与上调Bcl-2表达、下调Bax表达从而抑制细胞凋亡有关.     

七氟醚后处理对慢性心肌梗死大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价七氟醚后处理对慢性心肌梗死大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠,在体结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,6周后开胸取心脏,建立离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏80个,采用随机数字表法,将心脏随机分为8组(n=10),Ⅰ组K-H液持续灌注90 min;Ⅱ组全心缺血30 min,再灌注60 min;Ⅲ组～Ⅵ组全心缺血30 min,再灌注最初15 min灌注含磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002 15 μmol/L、丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059 20 μmol/L、0.02％二甲基亚砜及经3％七氟醚饱和的K-H液,随后更换为K-H液再灌注45 min;Ⅶ组和Ⅷ组全心缺血30 min,再灌注最初15 min灌注3％七氟醚饱和的K-H液,同时分别给予LY294002 15 μmol/L和PD98059 20 μmol/L,随后更换为K-H液再灌注45 min.于平衡灌注20 min、缺血前即刻、再灌注15、30和60 min(T0-4)时测定冠状动脉流量(CF)、记录左室发展压(LVDP)、左室最大收缩速率(+dp/dt)、左室最大舒张速率(-dp/dt)、左室舒张末期压力(LVEDP)及心率(HR);于T04时收集冠状动脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;于T4时测定急性心肌梗死面积,于T2时取左心室,测定蛋白激酶B(PKB/Akt)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化表达水平及心肌细胞mPTP的开放程度.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅷ组再灌注时LVDP、±dp/dt、HR和CF降低,LVEDP升高,急性心肌梗死面积增大,冠状动脉流出液LDH和CKMB活性升高,心肌细胞mPTP开放程度增加(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅵ组再灌注时LVDP、±dp/dt、HR和CF升高,LVEDP降低,急性心肌梗死面积减小,冠状动脉流出液LDH和CK-MB活性降低,心肌PKB/Akt和ERK1/2磷酸化水平增强,心肌细胞mPTP开放程度降低(P＜0.05),其余组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3％七氟醚后处理可减轻慢性心肌梗死大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与激活PI3K-PKB/Akt和MEK1/2-ERK1/2,从而抑制心肌细胞mPTP开放有关.     

七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2表达的影响:在体和离体实验

目的 通过在体和离体实验评价七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 在体实验健康成年小鼠54只,体重约250 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):对照组(C组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(SP组).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注的方法制备心肌缺血再灌注模型.SP组小鼠吸入2.0％七氟醚,15min/次,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理后90 min制备心肌缺血再灌注模型.再灌注6、9h时,取心肌组织分别采用Western blot法测定COX-2表达,采用分光光度法测定心肌caspase-3的活性.再灌注24h时测定左室舒张末压(LVEDP).细胞实验采用随机数字表法,将H9C2细胞随机分为3组,每组6皿:对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和七氟醚预处理组(SP组).H9C2细胞置于95％N2+ 5％CO2培养箱中孵育14 h后,置于95％O2+ 5％CO2培养箱中孵育3h,建立缺氧复氧模型.SP组H9C2细胞培养基中加入2.0 mmol/L七氟醚,每次孵育15 min,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理结束后15 min建立缺氧复氧模型.复氧3h时采用Western blot法测定细胞COX-2的表达水平,采用比色法测定上清液和细胞裂解液LDH活性,计算LDH释放量.结果 在体实验:与C组比较,I/R组和SP组LVEDP升高,心肌组织caspase-3活性增强,COX-2表达上调(P＜0.01);与I/R组比较,SP组LVEDP降低,心肌组织caspase-3活性减弱,COX-2表达下调(P＜0.01).细胞实验结果:与C组比较,H/R组和SP组H9C2细胞COX-2表达上调,LDH释放量增加(P＜0.01);与H/R组比较,SP组H9C2细胞COX-2表达下调,LDH释放量减少(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可通过直接下调心肌COX-2的表达,抑制细胞凋亡减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤.     

异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CBS/H2S、iNOS/NO和HO-1/CO的影响

目的 研究异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CBS／H，S、iNOS／NO和HO-1／CO的影响，探讨吸入麻醉药脑保护作用的机制。方法30只Wistar大鼠随机分为5组（n=6）：对照组（C组）、脑缺血再灌注组（I／R组）、异氟醚组（I组）、七氟醚组（S组）和地氟醚组（D组）。采用四动脉阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。Ⅰ组、S组和D组夹闭两侧颈总动脉前分别吸入氧气＋0．65MAC的异氟醚、七氟醚和地氟醚30min，C组和I／R组吸入氧气。缺血20min，再灌注12h后处死大鼠，取海马，测定大鼠海马组织中HS、NO、CO、cAMP和cGMP含量和CBS，iNOS和HO活性以及CBS—mRNA、iNOS，mRNA和HO—1-mRNA的表达水平；电镜下观察海马线粒体的变化。结果与C组相比，I／R组海马组织CO、H2S、NO、cAMP、cGMP含量和HO、CBS、iNOS活性升高，CBS—mRNA、iNOS-mRNA和HO-1-mRNA表达升高，海马神经细胞线粒体变性率升高（P〈0．01）；与I／R组相比，Ⅰ组、D组和S组CO含量和HO活性升高，H2S、NO、cAMP含量和CBS、iNOS活性降低，CBS—mRNA和iNOS-mRNA表达降低而HO-1-mRNA表达升高，线粒体变性率降低（P〈0．05或0．01）。结论 异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理可通过抑制CBS／142S、iNOS／NO，激活HO-1／CO，减轻了大鼠脑缺血再灌注损伤。     

含不同浓度乳化异氟醚的停跳液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨含不同浓度乳化异氟醚的停跳液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级雄性成年SD大鼠,体重180～250 g,建立Langendorff离体心脏灌注模型,取模型制备成功的56个心脏随机分为7组(n=8):St.Thomas停跳液组(C组)和含不同浓度乳化异氟醚的停跳液组(E1组～E6组).K-H液平衡灌注20 min后,C组用4℃ St.Thomas停跳液20 ml使心脏停搏45 min,K-H 液再灌注60 min,E1组～E6组分别用含乳化异氟醚0.28、0.56、1.12、1.68、2.24和2.80 mmol/L的4℃St.Thomas停跳液20 ml使心脏停搏45 min,K-H液再灌注60 min.于平衡灌注末、再灌注20、40、60 min 时记录HR、左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax),并收集冠脉流出液1.5 ml,测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和肌钙蛋白I(cTnI)浓度.于再灌注60 min时取心肌组织,计算心肌梗死面积.结果 与C组比较,E4组HR、LVDP、+dp/dtmax和SOD活性升高,LVEDP、LDH的活性和cTnI浓度降低,心肌梗死面积减小,E5组和E6组HR、LVDP、+dp/dtmax和SOD活性降低,LVEDP、LDH活性和cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加(P<0.05),E1组～E3组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).与E4组比较,其余含不同浓度乳化异氟醚的停跳液组HR、LVDP、+dpldt～和SOD活性降低,LVEDP、LDH活性和cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加(P<0.05).结论 含1.68 mmol/L乳化异氟醚的停跳液可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.